王玉华
- 作品数：29 被引量：146H指数：7
- 供职机构：西北大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金陕西省教育厅科研计划项目国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学文化科学经济管理更多>>
- 通过叶绿体基因工程在烟草中合成中长链羟基脂肪酸聚酯被引量：4
- 2005年
- 中长链羟基脂肪酸聚酯(medium-chain-length-PHAs,mcl-PHAs)属于微生物聚酯.PHA合酶(PHAsynthase,由phaC基因编码)和3-羟酰基-酰基转移蛋白-辅酶A转移酶(3-hydroxyacyl-acylcarrierprotein-coenzymeAtransferase,由phaG基因编码)是mcl-PHAs生物合成途径中的关键酶.以aadA(氨基糖苷-3′-磷酸转移酶)基因做筛选标记,分别构建了含phaC2基因的单价叶绿体转化表达载体pTC2以及同时嵌合phaC和phaG基因的双价叶绿体转化表达载体pTGC.通过PDS1000/He基因枪转化法转化烟草,获得具有壮观霉素抗性的叶绿体型转基因烟草植株,PCR和SouthernBlot结果表明,外源基因确已整合进烟草叶绿体基因组中且基本达到同质化.气相色谱法检测转基因株系中的mcl-PHAs含量最高达4.8mg/g干重,合成的PHAs单体主要成分为3-羟基辛酸(3-hydroxyoctanoate,3-HO)和3-羟基癸酸(3-dydroxydecanoate,3-HD).透射电子显微镜观察到转基因烟草叶片叶绿体中确有PHAs颗粒累积.
- 王玉华张秀海吴忠义杨清陈国强吴琼黄丛林
- 关键词：叶绿体基因工程长链转基因烟草植株叶绿体转化基因枪转化法磷酸转移酶
- 通过叶绿体基因工程在转基因植物中合成中长链羟基脂肪酸聚酯(mcl)
- 王玉华
- 关键词：叶绿体基因工程植物生物反应器母性遗传GFP
- 甘薯叶绿体rbcL基因的克隆与序列分析被引量：7
- 2008年
- 根据烟草、水稻和菠菜叶绿体的全基因组序列设计引物,以甘薯的叶绿体基因组DNA为模板,PCR扩增包含甘薯叶绿体rbcL完整基因(GenBank登录号为AY942199)在内的一段序列。序列分析表明:此片段的全长为1627bp,包括1443bp的编码区序列在内,推测编码480个氨基酸,同时构建了此片段的限制性酶切图谱。相似性比较显示,此基因编码区序列与烟草、菠菜、小麦、水稻、玉米、矮牵牛、紫花苜蓿、拟南芥、莨菪、葡萄以及甜菜的rbcL基因核苷酸的同源性为85%～98%,氨基酸的同源性为92%～95%。
- 王玉华吴忠义贾敬芬张秀海黄丛林
- 关键词：甘薯叶绿体基因RBCL基因
- 转phaC叶绿体型烟草的光学属性被引量：1
- 2007年
- 为探讨光谱无损测试技术在转phaC叶绿体型烟草材料筛选中应用的可行性,对烟草品种Wisconsin38(Nic-otiana tobacum cv·Wisconsin38,对照)和其转phaC基因烟草无损活体测定了相对叶绿素含量(SPAD)、叶绿素荧光参数和反射率,并对测定结果进行了分析.结果表明:(1)PSⅡ有效光化学量子产量[(Fms-Fs)/Fms]和SPAD均表现为对照烟草大于转基因烟草,其中,(Fms-Fs)/Fms差异显著.(2)对照的反射率光谱大于转基因烟草.两者在350～690nm、750～1350nm和2113～2320nm反射率变异显著.(3)一些波长反射率与PSⅡ最大光化学量子产量(Fv/Fm)、有效光化学量子产量(Fms-Fs)/Fms和SPAD值达到显著相关.(4)光谱指数中,D730/D706与SPAD值相关系数达到了0·833.Area1190、P_Nd1280、R685/R630、(R683)2/(R675×R691.)与(Fms-Fs)/Fms达到显著相关.上述结果表明高光谱等无损测试技术在基因工程中应用是一个值得重视的方向.
- 李佛琳赵春江刘良云王纪华黄丛林王玉华张永江
- 关键词：转基因烟草反射率光谱指数
- 木本植物不定根发育的基因表达调控研究进展被引量：5
- 2015年
- 不定根由非根器官发育而来,其发育已成为大多数木本植物无性繁殖和工厂化育苗的限制因素,而相关的分子机制还未完全搞清楚。本文介绍生长素与不定根形成关系的基础上,主要针对几种木本植物不定根发生的相关调控基因综述了近年来的研究进展,探讨不定根形成的分子机制,不仅具有重要的理论意义,而且具有潜在的应用价值。
- 郭早霞常伟东王军程星星王玉华
- 关键词：木本植物不定根生长素转录因子
- 利用甘薯质体同源片段构建多顺反子表达载体被引量：2
- 2009年
- 本研究利用质体基因组的进化保守性,根据烟草质体基因组全序列设计引物,从甘薯(Ipomoea batatas L.)质体基因组中克隆了两个相邻的功能基因rbcL(GenBank登录号为AY942199)和accD(GenBank登录号为AY942200),以此作为定点整合外源基因的同源重组片段。选用水稻质体基因组强启动子prrn及psbA3'非翻译区调控选择标记基因aadA和报告基因gfp,构建多顺反子表达盒prrn-aadA-gfp-psbA-3',之后将表达盒克隆进甘薯质体同源片段中,获得甘薯质体多顺反子定点整合表达载体pSAG,酶切鉴定结果表明所构建的载体符合预期设计。这为后期甘薯质体转化体系的建立和通过质体基因工程手段将更多目的基因导入甘薯进行遗传改良奠定了基础。
- 王玉华黄丛林贾敬芬
- 关键词：甘薯多顺反子
- 叶绿体转化及其用于疫苗表达研究的最新进展被引量：3
- 2012年
- 随着植物转基因研究的不断深入,核基因组转化的转基因沉默现象严重影响了基因工程的应用效果。植物叶绿体遗传转化以叶绿体基因组为平台对植物进行遗传操作,外源基因定点整合及母性遗传特性能较好地解决"顺式失活"和"位置效应"等类的基因沉默问题和转基因逃逸等安全问题,成为植物基因工程发展的新方向,在工业、农业及医药生物领域发挥了重要作用,也为生产廉价、安全的植物疫苗提供了新思路。本文在简要介绍叶绿体转化的原理、转化方法与优势的基础上,重点综述了近年来通过该技术表达的一些重要的病毒抗原和细菌抗原。最后,对叶绿体转化技术在表达外源基因方面存在的问题进行分析。未来随着叶绿体基因表达、调控机制研究的逐渐深入及相关技术体系的日臻完善,叶绿体转化有望成为疫苗生产的生力军。
- 巩智刚徐芳周海鹏王雯雯王玉华
- 关键词：叶绿体转化基因工程疫苗生产
- 甘薯叶绿体表达载体构建及其融合基因在叶绿体中的瞬间表达被引量：7
- 2009年
- 利用叶绿体基因组进化中高度保守的特点,根据烟草叶绿体基因组全序列设计引物,从甘薯(Ipomoeabatatas)叶绿体基因组中克隆了2个相邻的功能基因rbcL(GenBank登录号为AY942199)和accD(GenBank登录号为AY942200),并以此作为定点整合外源基因的同源重组片段。以来自叶绿体基因组的强启动子Prrn和Rps-bA-pro分别驱动选择标记基因aadA及phaC-gfp融合基因,构建成表达盒prrn-aadA-TpsbA-ter与RpsbA-pro-phaC-gfp-RpsbA-ter,然后将这2个表达盒串联在一起克隆进甘薯叶绿体同源片段中,获得甘薯叶绿体定点整合表达载体pSC-GFP。酶切分析证明,所构建的载体符合预期设计;采用该载体对甘薯叶片进行基因枪转化,结果显示,phaC-gfp融合基因可在叶绿体特异启动子和终止子的调控下在甘薯幼嫩叶片中瞬间表达,证明构建的载体pSC-GFP可用于甘薯叶绿体转化。
- 王玉华张秀海吴忠义王永勤黄丛林贾敬芬
- 关键词：甘薯
- 一种菊苣叶绿体转化体系的建立方法
- 本发明公开了一种安全、环保的菊苣叶绿体转化体系的建立方法，包括如下步骤：（1）菊苣叶片外植体的高频再生体系建立；（2）一种安全、环保的菊苣叶绿体定点整合表达载体的构建；（3）基因枪轰击法转化菊苣外植体，经三轮抗性筛选获得...
- 王玉华巩智刚周海鹏徐芳
- 文献传递
- 苹果砧木生根基因ARRO-1表达的研究
- 苹果(Malusdomestica)是世界四大水果之一,具有较高的营养价值和经济价值,是主要栽培的经济作物.我国是世界上最大的苹果生产国,但我国苹果生产水平低,产品质量偏低,品种结构不合理.推广矮化密植集约栽培技术是改善...
- 李绣坤郭早霞王玉华
- 关键词：不定根实时荧光RT-PCR
