王晓
- 作品数：13 被引量：26H指数：3
- 供职机构：上海交通大学医学院附属新华医院更多>>
- 发文基金：上海市自然科学基金国家自然科学基金国家临床重点专科建设项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 血栓调节蛋白表皮生长因子样结构功能域在毕赤酵母中的表达被引量：1
- 2017年
- 目的 :构建血栓调节蛋白表皮生长因子样结构功能域(thrombomodulin-domain 2,TM-D2)的毕赤酵母表达体系,以获得重组TM-D2蛋白。方法:以人cDNA序列为模板,用PCR扩增出TM-D2片段,并将其插入pPICZaB质粒,构建重组表达质粒TM-D2-pPICZaB,重组质粒电击转化入毕赤酵母菌株GS115,用甲醇诱导酵母进行蛋白表达,行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl-sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)和蛋白印迹法鉴定蛋白表达及纯化情况。结果:PCR产物经琼脂糖凝胶电泳和质粒测序证实,TM-D2片段已正确克隆到表达载体中;SDS-PAGE和蛋白印迹法检测结果证实,上清液中含His-tag的重组TM-D2的表达,且其相对分子质量约为55 000。结论:TM-D2-pPICZaB初步判断TM-D2蛋白可在毕赤酵母中表达。
- 李莉王晓王尧康健周罗成王海嵘
- 关键词：血栓调节蛋白重组质粒毕赤酵母
- 去乙酰化酶SIRT1对氧化应激的调控被引量：4
- 2015年
- 去乙酰化酶SIRT1在许多生物过程中具有重要的作用,包括氧化应激、能量代谢、细胞分化及基因组稳定等。细胞的存活及其寿命和氧化应激的存在密切相关。氧化应激可引起多种病理表现,如内皮损伤、线粒体损伤、炎症、自噬、凋亡甚至坏死等。近来研究发现,SIRT1在多种氧化应激相关疾病中保护细胞存活。SIRT1可以通过调控不同转录因子而发挥抗氧化应激作用,但研究发现,SIRT1也对氧化应激有负性调控作用。本文就SIRT1对氧化应激的调控进行概述。
- 王晓葛勤敏
- 关键词：SIRTUIN氧化应激P53核转录因子ΚB
- α-硫辛酸对脂多糖诱导的大鼠胰岛细胞氧化应激和凋亡的影响被引量：2
- 2014年
- 目的观察脂多糖(LPS)刺激大鼠胰岛细胞的氧化应激和凋亡情况,探讨α-硫辛酸(α-LA)对LPS诱导大鼠胰岛B细胞氧化应激和凋亡的作用。方法对照组予磷酸盐缓冲液(PBS),LPS不同质量浓度处理组(LPS 0.01组、LPS 0.1组、LPS 1组、LPS 5组、LPS 10组)分别予LPS 0.01、0.1、1、5、10μg/mL,α-LA+LPS组予α-LA 4μg/mL预处理1h后加入LPS 10μg/mL,分别刺激刚分离的大鼠胰岛。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测胰岛B细胞活力,以2’,7’-二氢二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)为荧光探针检测胰岛氧化应激的状态,应用流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果不同质量浓度的LPS处理大鼠胰岛24h后,仅LPS10组的光密度值显著低于对照组(P<0.05);不同LPS质量浓度处理组大鼠胰岛B细胞产生的活性氧自由(ROS)呈剂量依赖性增多(r=0.95,P<0.01),胰岛B细胞凋亡率亦呈剂量依赖性升高(r=0.87,P<0.01)。LPS 1组、LPS 5组、LPS 10组的平均荧光强度(MFI),以及LPS 5组、LPS 10组的胰岛B细胞凋亡率均显著高于对照组(P值均<0.01);而α-LA+LPS组的MFI、胰岛B细胞凋亡率均显著低于LPS 10组(P值分别<0.05、0.01)。结论一定质量浓度范围内的LPS刺激抑制胰岛B细胞活力,可诱导大鼠胰岛发生氧化应激和细胞凋亡,α-LA可以降低LPS诱导的ROS产生并抑制胰岛B细胞的凋亡。
- 王晓葛勤敏
- 关键词：氧化应激脂多糖胰岛B细胞凋亡Α-硫辛酸
- 肾损伤分子-1、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白和白细胞介素-6对早期鉴别诊断不同病原菌血流感染的脓毒症急性肾损伤的价值被引量：2
- 2016年
- 目的探讨肾损伤分子-1(KIM-1)、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)和IL-6对早期鉴别诊断不同病原菌血流感染的脓毒症急性肾损伤的价值。方法选取无特定病原体级雄性SpragueDawley大鼠45只,禁食但不禁水。12h后,分别取15只大鼠于尾静脉注射大肠埃希菌和活金黄色葡萄球菌标准菌株悬液[均为1.5×108菌落形成单位(CFU)/mL,0.1mL/100g],分别制备大肠埃希菌感染大鼠模型(大肠埃希菌组)和金黄色葡萄球菌感染大鼠模型(SA组);另取15只大鼠注射等量的0.9%氯化钠溶液,作为正常对照组。在注射菌株后6、12、24、48、72h各时间点,采集3组大鼠心脏血按ELISA试验盒操作步骤检测血清肌酐(sCr)、尿素氮(BUN)、KIM-1、NGAL、IL-6水平,并在光学显微镜下观察大鼠肾脏病理组织形态学特征。结果大肠埃希菌组和SA组大鼠的血清BUN、sCr水平于注射菌株后48h达高峰,KIM-1、NGAL、IL-6水平于注射菌株后6h达高峰。大肠埃希菌组注射菌株后12、24、48、72h的BUN水平,注射菌株后6、12、24、48、72h的sCr水平均显著高于正常对照组同时间点(P值均<0.05);SA组注射菌株后6、12、24、48、72h的BUN水平,注射菌株后12、24、48、72h的sCr水平均显著高于正常对照组同时间点(P值均<0.05);大肠埃希菌组与SA组间注射菌株后不同时间点BUN、sCr水平的差异均无统计学意义(P值均>0.05)。大肠埃希菌组和SA组注射菌株后6、12、24、48、72h的IL-6水平均显著高于正常对照组同时间点(P值均<0.05);大肠埃希菌组注射菌株后6、12、24、48h的IL-6水平均显著高于SA组同时间点(P值均<0.05)。大肠埃希菌组注射菌株后6、12、24、48h的KIM-1水平,注射菌株后6、12、24h的NGAL水平均显著高于正常对照组和SA组同时间点(P值均<0.05);SA组注射菌株后6、12、24、48h的KIM-1和NGAL水平均显著高于正常对照组同时间点(P值均<0.05)。肾组织病理学检查结果显示,SA组大鼠
- 黄椿媚王晓葛勤敏
- 关键词：肾损伤分子-1中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白血流感染急性肾损伤脓毒症
- 重组组织型纤溶酶原激活物静脉溶栓治疗超早期脑梗死临床分析被引量：4
- 2015年
- 目的:探讨重组组织型纤溶酶原激活物(rt-PA)静脉溶栓治疗超早期脑梗死的临床疗效及预后。方法 :选取我院2009年5月至2014年5月收治的符合入选条件的超早期脑梗死患者336例,行rt-PA静脉溶栓治疗(溶栓组);选取同期非溶栓常规治疗的超早期脑梗死患者306例作为对照组。比较2组患者治疗前后的美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分、治疗效果、24 h内及3个月并发症及预后情况。结果:2组患者治疗前的NIHSS差异无统计学意义。治疗后2组患者的NIHSS分值均有下降,2组间比较差异具有统计学意义(P<0.05);溶栓组的总有效率为93.5%,明显高于非溶栓治疗的80.6%(P<0.05);2组患者药物过敏发生率、血管再闭塞率等差异无统计学意义(P>0.05);溶栓治疗组能显著改善患者3个月预后(P<0.05)。24 h内溶栓组脑出血率高于对照组(P<0.05),3个月2组患者脑出血率无显著差异(P>0.05)。24 h内病死率溶栓组高于对照组(P<0.05),3个月病死率溶栓组仍高于对照组(P<0.05)。结论 :rt-PA静脉溶栓治疗安全有效,有利于降低致残率,提高患者的生活质量。对于符合溶栓指征的急性脑梗死患者推荐早期应用rt-PA静脉溶栓治疗。溶栓相关性脑出血使溶栓组患者死亡率增加。
- 徐红华王晓陈淼葛勤敏
- 关键词：重组组织型纤溶酶原激活物静脉溶栓超早期脑梗死
- 51例菊池病患者临床资料回顾性分析被引量：2
- 2019年
- 目的 :比较、分析我院近10年收治的菊池病儿童及成人患者的临床特点及其异同,以提高诊断率,减少误诊、误治。方法:回顾性分析51例最终诊断为菊池病患者的临床资料,按照患者是否成年进行分组,比较2组之间的临床特点,并分析误诊、误治的原因。结果:51例患者中儿童组26例,成人组25例,2组中均以男性患者为主,男女比例分别为1.4∶1及1.3∶1。96.1%的患者在发病时有淋巴结肿大表现,且多累及颈部淋巴结(44例,占89.8%),其中成人组右侧颈部淋巴结受累更为多见(36.0%比15.4%,P=0.040 3),没有一例单纯锁骨上淋巴结肿大。82.4%的患者存在发热,2组之间差异无统计学意义(P=0.273 5),发热平均持续(23.5±36.2) d。51例患者中32例(62.7%)乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)升高,31例(60.8%)白细胞减少,20例(39.2%)中性粒细胞比例降低。儿童组患者中性粒细胞比例减少更常见(65.4%比12.0%,P<0.000 1),而在LDH、白细胞计数等实验室检查结果之间差异无统计学意义。51例患者中35例(68.6%)曾被误诊,儿童误诊率(22例,84.6%)高于成人误诊率(13例,52.0%)(P=0.012 1)。最终51例经淋巴结活组织检查(活检)后确诊为菊池病,予糖皮质激素治疗后好转。结论:儿童与成人菊池病患者的临床特点相似,多有发热、淋巴结肿大、白细胞减少、LDH增高,此外儿童患者更易出现中性粒细胞比例减少,成人患者更易出现右侧颈部淋巴结肿大。另外,虽然患者几乎都存在淋巴结肿大,但若只累及锁骨上淋巴结,诊断为菊池病的可能性不大。以上可作为初步诊断菊池病的主要参考依据。对于怀疑菊池病的患者都应尽早进行淋巴结活检,避免或减少误诊、误治。
- 王宁王尧王晓朱莹莹周罗成康健王海嵘
- 关键词：组织细胞坏死性淋巴结炎误诊误治
- 沉默信息调节因子1在脂多糖诱导胰岛素瘤细胞-1线粒体损伤中的作用被引量：2
- 2018年
- 目的 探讨沉默信息调节因子（silent mating type information regulation 2 homolog1，SIRT1）在脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）诱导胰岛素瘤细胞-1（insulinoma cell lines-1, INS-1）细胞线粒体损伤中的作用。方法 将对数生长期的INS-1 细胞分为5 组：正常对照组、1 mg/L LPS组（LPS 干预细胞24 h）、白藜芦醇（resveratrol，RSV）＋LPS 组（10 μmol/L RSV 预处理1 h 后，加入1 mg/L LPS 干预24 h）、EX527＋LPS 组（20 μmol/L EX527 预处理1 h 后，加入1 mg/L LPS干预24 h）、EX527＋RSV＋LPS 组（20 μmol/L EX527 预处理1 h 后，加入10 μmol/L 的RSV 和1mg/L LPS 干预24 h）。检测细胞活力和ATP 生成；提取INS-1 细胞总蛋白、胞质蛋白和线粒体蛋白，Western-blot 法检测SIRT1、TLR4、乙酰化FoxO1、细胞色素C（cytochrome C，CytC）、线粒体融合蛋白1（mitofusion1，Mfn1）、线粒体融合蛋白2（mitofusion2，Mfn2）、线粒体分离蛋白1（fission1，Fis1）蛋白的表达； Real-time PCR 方法检测SIRT1、FoxO1、Mfn1、Mfn2、Fis1 基因水平的变化。多组间比较采用单因素方差分析，用LSD-t 法进行组间两两比较。结果 1 mg/L LPS 作用于INS-1 细胞24 h 后，细胞活力降低（n=4，F=13.98，P〈0.01），ATP 生成减少（n=4，F=27.92，P〈0.05），RSV 预处理后促进ATP 生成（P〈0.01），但不能逆转EX527 预处理后ATP 生成的降低（P〉0.05）。RSV 可以促进SIRT1、Mfn1、Mfn2 蛋白表达和基因上调，降低TLR4 和Fis1 蛋白表达，下调其基因水平，减少CytC 在细胞质中的释放（P〈0.01），而各组间FoxO1 蛋白表达差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 白藜芦醇可能通过改变SIRT1 的活性，调控FoxO1 的乙酰化，部分参与调节LPS 诱导的INS-1 细胞线粒体的损伤。
- 莫兴兴王晓葛勤敏边帆
- 关键词：沉默信息调节因子TOLL样受体4氧化应激
- LncRNAs在血管性疾病中的作用
- 2016年
- 血管性疾病一直是威胁人类健康的重大问题,其关键病理特征为血管平滑肌细胞异常增殖和新生内膜的形成病变。近来有证据表明非编码RNA在组织稳态和病理生理调节中起重要作用。除微小RNA(miRNA)外,长链非编码RNA(LncRNAs)可在不同阶段基因表达和信号通路中发挥作用。LncRNAs最近被发现在血管发育、谱系提交和中胚层向心脏分化中起作用;且与血管紧张素Ⅱ活动及血管性疾病,包括心脏疾病和动脉粥样硬化相关。LncRNAs可能在血管发育及相关疾病中介导许多不同的途径。该文主要对LncRNAs在血管性疾病中的作用进行综述。
- 黄椿媚王晓葛勤敏
- 关键词：长链非编码RNA血管性疾病血管发育
- Toll样受体4在脓毒症大鼠胰岛中的表达被引量：5
- 2015年
- 目的 研究Toll样受体4（TLR4）在脓毒症大鼠胰岛中的表达变化及其对血糖的影响.方法 SPF级SD雄性大鼠腹腔内注射脂多糖（LPS）5 mg/kg,间隔3h注射第2次,制备脓毒症模型.大鼠被随机（随机数字法）分为正常对照组（n=5）、LPS组（n=5）、抗TLR4抗体组（n=5）和抗TLR4抗体＋LPS组（n=5）,分别采用RT-PCR法、Western-blot法和免疫组化法检测大鼠胰岛TLR4的表达.大鼠给药处理6h后行葡萄糖静脉试验（IVGTT）测定静脉全血葡萄糖和胰岛素水平,计算胰岛素、血糖曲线下面积（AUC）.结果 正常组大鼠胰岛细胞有TIR4表达,LPS处理大鼠6h后胰岛组织中TLR4蛋白和mRNA的表达升高,与对照组比较差异具有统计学意义（P＜0.01）,注射抗TLR4抗体预处理后用LPS刺激,LPS诱导的TLR4蛋白及mRNA水平的升高均被抑制（P＜0.01）.LPS处理后与正常对照组比较,大鼠IVGTT 10、30、60、120 min血糖明显升高,30、60、120 min胰岛素分泌降低（P＜0.01）.抗TLR4抗体干预后能降低30 ～ 120min血糖的升高,改善LPS对胰岛素分泌的抑制（P＜0.01）.结论 脓毒症大鼠胰岛细胞TLR4表达升高,LPS-TLR4系统可能是应激性高血糖的发生机制.
- 葛勤敏王晓边帆潘曙明
- 关键词：脓毒症胰岛TOLL样受体4胰岛素分泌应激性高血糖
- 2型糖尿病合并甲状腺功能异常患者凝血功能的回顾性研究被引量：3
- 2017年
- 目的:探讨2型糖尿病(T2DM)合并甲状腺功能异常与患者凝血功能的关系。方法:收集215例T2MD合并甲状腺功能异常患者[其中89例甲状腺功能亢进(甲亢)、126例甲状腺功能减退(甲减)]以及225例单纯T2MD患者的甲状腺功能和凝血功能资料,分析甲状腺功能异常与T2DM患者凝血功能的关系,并且就空腹血糖、甲状腺功能与出凝血相关指标之间的关联性进行分析。结果:T2DM合并甲亢组的凝血酶原时间(PT)和凝血酶时间(TT)与单纯T2DM组相比显著缩短(P<0.05),而活化部分凝血活酶时间(APTT)在2组之间的差异无统计学意义(P>0.05),合并甲亢组的血纤蛋白原(FIB)水平显著升高(P<0.05)。与单纯T2DM组相比,T2DM合并甲减患者除TT延长(P<0.05)外,其他指标差异均无统计学意义(均P>0.05)。空腹血糖与凝血功能PT之间呈负相关(r=-0.409,P<0.05),与FIB呈正相关(r=0.356,P<0.05);而促甲状腺素(TSH)与PT呈正相关(r=0.334,P<0.05),与FIB呈负相关(r=-0.465,P<0.05)。结论:甲状腺功能异常对T2MD患者凝血功能有一定的影响,合并甲亢可以加重T2MD的高凝状态,合并甲减则相对纤溶亢进。同时血糖不控制可能造成高凝事件的发生。
- 周罗成王尧王晓王海嵘
- 关键词：2型糖尿病甲状腺功能亢进甲状腺功能减退凝血功能
