王晓
- 作品数：8 被引量：22H指数：2
- 供职机构：上海生物制品研究所有限责任公司更多>>
- 发文基金：上海市卫生系统百名跨世纪优秀学科带头人培养计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- C群脑膜炎球菌结合疫苗的制备及其免疫原性
- 2014年
- 目的 制备由不同分子大小C群脑膜炎球菌多糖（group C meningococcal polysaccharide,CPS）与破伤风类毒素（tetanus toxoid,TT）共价偶联而成的结合疫苗（CPS-TT）,并检测其在小鼠中的免疫原性.方法 将CPS降解成不同大小的片段,经碳二亚胺（carbodiimide,EDAC）或溴化氰（cyanogen bromide,CNBr）活化后偶联到TT上制成CPS-TT.NIH小鼠皮下注射制备的不同CPS-TT,用ELISA法测定小鼠血清抗CPS和TT IgG抗体.结果 EDAC活化的降解CPS的衍化率（3.9％～5.7％）和多糖回收率（11.4％～21.3％）均高于CNBr活化的降解CPS的衍化率（0.4％～1.2％）和回收率（2.4％～11.5％）.EDAC或CNBr活化的降解CPS制备的CPS-TT在小鼠中均具有较强的免疫原性,但EDAC活化的降解CPS制备的CPS-TT免疫小鼠的抗CPS抗体滴度高于CNBr活化的降解CPS制备的CPS-TT免疫小鼠.结论 EDAC活化的降解CPS可用于制备C群脑膜炎球菌结合疫苗.
- 毕慧王伟沈坚王月红王晓荣家康朱为
- 关键词：免疫原性
- A群和C群脑膜炎球菌荚膜多糖提制工艺研究被引量：4
- 2011年
- 研究一种不使用苯酚的荚膜多糖提制工艺,用于疫苗制备。采用液体罐培养A群和C群脑膜炎球菌,杀菌后离心取上清液,用十六烷基三甲基溴化铵沉淀多糖,用氯化钙溶液解离后,加乙醇至25%去除核酸等杂质,经乙醇沉淀获得粗多糖。将粗多糖溶解后,加乙醇至一定浓度沉淀蛋白,离心获得上清液,经超滤浓缩和乙醇沉淀,获得纯化多糖。纯化的多糖生化检测结果符合WHO和《中国药典》(2010年版)规定,豚鼠和小鼠异常毒性检查合格,豚鼠过敏试验未见过敏反应,1H NMR检测显示多糖结构具有一致性。该研究建立的A群和C群脑膜炎球菌荚膜多糖提制工艺为应用于疫苗制备奠定了基础。
- 朱为荣家康江元翔王晓毕慧王月红郑小秋黄帼英秦洁
- 关键词：脑膜炎球菌荚膜多糖提制乙醇
- A群脑膜炎球菌多糖-破伤风类毒素结合物中游离多糖测定方法的建立被引量：11
- 2002年
- 本文建立一种测定A群脑膜炎球菌多糖 破伤风类毒素 (PS TT)结合物中游离多糖的方法。用 80 %乙醇使PS TT结合物沉淀 ,再用 6 0 %乙醇洗涤沉淀使未结合多糖溶解 ,使与TT结合的和未结合的多糖分离并分别测定。该方法可有效分离结合的与未结合的多糖并分别测定 ,结合物中外加多糖可定量回收。本方法适用于测定A群脑膜炎球菌多糖
- 朱为余生玲朱文瑛王晓黄帼英李凤祥李亚楠
- 关键词：破伤风类毒素A群脑膜炎球菌
- 脑膜炎球菌表面蛋白fHBP与PorA的融合表达及其免疫原性被引量：2
- 2016年
- 目的构建脑膜炎球菌（Neisseria meningitidis,Nm）表面蛋白fHBP重组表达质粒,并与PorA蛋白融合表达,对单抗原fHBP和融合抗原fHBP-PorA的免疫原性进行检测。方法筛选并优化fHBP和PorA基因序列,设计连接片段将PorA连接至fHBPC-端,构建重组表达质粒pET-24b-fHBP和pET-24b-fHBP-PorA,分别转化E.coli BL21（DE3）感受态细胞,IPTG诱导表达。表达的重组蛋白经镍柱亲和层析和凝胶过滤层析后免疫家兔,制备抗血清,采用间接ELISA、流式细胞术和微量血清杀菌力试验（serum bactericidal assay,SBA）评价抗原的免疫原性。结果经双酶切和测序鉴定,两个蛋白的重组表达质粒构建正确。重组蛋白fHBP以可溶形式表达,fHBP-PorA以包涵体形式表达,纯化后纯度均在90%以上。抗血清滴度均在1.0×10~5以上。流式细胞术检测显示,抗血清与Nm可发生特异性结合,且fHBP-Por A抗血清显示出一定的交叉反应。fHBP和fHBP-PorA抗血清对Nm29019的杀菌滴度为1∶128。结论 fHBP具有较好的抗原性和免疫原性,具备B群脑膜炎疫苗开发前景。多抗原融合策略需更多的优化考虑。
- 吴根鹏袁萍王月红王晓毕慧黄帼英徐帆洪朱为
- 关键词：脑膜炎球菌免疫原性
- 冻干A群脑膜炎球菌多糖结合疫苗的稳定性及氢氧化铝佐剂复溶疫苗的免疫效果被引量：2
- 2010年
- 目的观察冻干A群脑膜炎球菌多糖-破伤风类毒素结合疫苗的稳定性,并比较A(lOH)3佐剂和磷酸盐缓冲液(PBS)复溶疫苗的免疫效果。方法将冻干疫苗于2～8℃放置36个月,每隔6个月取样,测定游离多糖含量、分子大小等,观察疫苗的稳定性。分别用A(lOH)3和PBS两种稀释液复溶疫苗后,计算吸附率并免疫小鼠,采用ELISA法测定小鼠血清中抗多糖IgG抗体滴度。结果疫苗于2～8℃放置30个月,各项质量指标均合格。A(lOH)3稀释液复溶疫苗的吸附率为100%。以两种稀释液复溶的疫苗均可诱导小鼠产生高滴度的抗多糖IgG抗体及免疫记忆反应,且A(lOH)3稀释液明显优于PBS稀释液。结论冻干A群脑膜炎球菌结合疫苗具有良好的稳定性,A(lOH)3佐剂可作为其稀释液。
- 朱为毕慧王月红王晓
- 关键词：脑膜炎结合疫苗稳定性氢氧化铝
- 用乙醇沉淀法制备脑膜炎球菌荚膜多糖
- 脑膜炎球菌(简称流脑)、肺炎球菌、伤寒杆菌和b型流感杆菌的荚膜多糖可以制成多糖疫苗或与蛋白质结合成为结合疫苗,用于相应疾病的预防与控制。经典的细菌荚膜多糖提制以Gotschlich的方法为基础,从细菌全培养物或经过离心除...
- 荣家康王晓郑小秋朱为
- 文献传递
- 一种奈瑟菌黏附素A的突变基因序列被引量：1
- 2014年
- 脑膜炎球菌（Neisseria meningitidis,Nm）能导致流行性脑膜炎和暴发性败血症.全球每年流行性脑膜炎发病人数达30万～50万,成为重要的公共卫生问题之一.Nm可以分为13个血清群,主要致病群是A、C、Y、W135和B群.在欧美国家、新西兰等地,B群脑膜炎球菌已成为主要的致病菌群,占病例数的1/3 ～2/3以上.在我国,据中国疾病预防控制中心报告,2005-2009年在31个省、市、自治区中,已有25个分离到B群菌株.由于B群荚膜多糖与人体抗原之间存在交叉反应表位,其表面的优势蛋白具有复杂的表型,因此,疫苗开发难度很大,仅有少数几个外膜囊泡疫苗用于预防特定的疫苗特异性亚型菌株感染.
- 吴根鹏黄帼英王晓徐帆洪朱为
- 关键词：聚合酶链反应
- 金黄色葡萄球菌α-溶血素及其突变体的原核表达和免疫学活性被引量：2
- 2014年
- 目的原核表达金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)α-溶血素(α-hemolysin,Hla)及其突变体,并检测其免疫学活性。方法采用PCR法从S.aureus中扩增hla基因,将该基因克隆至原核表达载体p ET28a中,构建重组表达质粒p ET28a-hla,并利用点突变试剂盒进行突变,获得重组质粒p ET28a-hlaH35L。将两种重组表达质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达;表达的重组蛋白经Ni-NTA亲和层析和CM离子交换层析纯化后,检测其溶血活性、免疫血清的抑制溶血活性及HlaH35L蛋白的免疫保护作用。结果重组表达质粒p ET28a-hla经双酶切和测序证明构建正确;重组质粒p ET28a-hlaH35L的测序结果显示,第35位氨基酸突变位点与设计相符。表达的Hla和HlaH35L蛋白相对分子质量约为36 000,均为可溶性表达,表达量约占菌体总蛋白的50%,纯化后纯度均在90%以上。Hla具有溶血活性,溶血比活为152 HU/mg;HlaH35L无溶血活性;抗Hla和抗HlaH35L血清均具有抑制Hla溶血的活性;在小鼠滴鼻攻击模型中,HlaH35L具有一定的保护作用。结论成功在大肠埃希菌中表达了具有良好免疫学活性的Hla及其突变体HlaH35L,为筛选S.aureus候选疫苗组分奠定了实验基础。
- 袁萍王晓吴根鹏王月红徐帆洪朱为
- 关键词：原核细胞溶血活性免疫保护
