王学谦
- 作品数：5 被引量：1H指数：1
- 供职机构：南通大学公共卫生学院江苏省神经再生重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省自然科学基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 斑马鱼Mut-001基因的克隆及胚胎早期发育过程中的表达
- 2015年
- 为了研究斑马鱼Mut-001基因的克隆及其在个体早期发育过程中的时空表达图谱,试验提取斑马鱼胚胎的总RNA制备地高辛标记的Mut-001 RNA反义探针,采用整体胚胎原位杂交(WISH)的方法研究Mut-001基因在斑马鱼早期发育过程中的表达。结果表明:试验成功克隆斑马鱼Mut-001基因并合成Mut-001基因探针,获得Mut-001基因在斑马鱼早期发育过程中的表达情况,Mut-001基因在1 000细胞期(受精后3小时,即3 hpf)、50%外包期(受精后5.3小时,即5.3 hpf)前普遍性表达;受精后14小时(14 hpf)开始在头部、肌节边界及躯干肌肉有特异性表达;受精后24小时(24 hpf)时这些部位表达更明显并在听囊、脊索出现特异性表达;受精后36小时(36 hpf)开始除了在头部和躯干肌肉持续特异性表达外,在胸鳍原基和心脏也开始特异性表达;受精后48小时(48 hpf)时上述部位持续特异性高表达。说明Mut-001基因在早期参与了中枢神经系统与肌肉的发生,在脑部、脊索、肌肉的发育中可能起到了重要作用。
- 吕峰王学谦李丽萍王新刘东
- 关键词：斑马鱼特异性表达
- 多疣壁虎SPARCL1多克隆抗血清的制备及鉴定
- 2011年
- 目的:制备针对多疣壁虎SPARCL1的多克隆抗体,为深入研究SPARCL1基因功能奠定基础。方法:构建pGEX-4T1-SPARCL1质粒,在大肠杆菌BL21表达GST-SPARCL1蛋白,经亲和层析纯化后免疫新西兰大白兔,获得SPARCL1抗血清,经酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测SPARCL1抗血清的效价,Western blot和免疫组化法检测多克隆抗体特异性。结果:成功构建多疣壁虎SPARCL1基因的原核表达质粒pGEX-4T1-SPARCL1,诱导得到较高纯度的GST-SPARCL1融合蛋白,免疫兔获得SPARCL1抗血清,经Western-blot及免疫组织化学实验显示所得抗体具有较高的效价及特异性。结论:成功获得较高效价特异性强的SPARCL1抗血清,为进一步深入研究多疣壁虎SPARCL1功能提供抗体工具。
- 周晓芳陈倩储钰丹王学谦钱天梅陆仁飞顾星星
- 关键词：融合蛋白多疣壁虎抗血清
- 非肌性肌球蛋白Ⅱ-B调节斑马鱼咽弓的发育
- 2016年
- 目的探讨非肌性肌球蛋白Ⅱ(NMⅡ)家族基因在斑马鱼胚胎期咽弓的表达及其对咽弓发育的影响。方法通过斑马鱼胚胎整体原位杂交及冷冻切片技术(n=10),观察NMⅡ家族基因在斑马鱼胚胎期咽弓的表达情况。利用软骨的阿辛蓝染色方法,将野生型对照组(n=10)和blebbistatin处理组(每个浓度n=10)的斑马鱼胚胎进行比较,分析NMⅡ对斑马鱼胚胎期咽弓发育和形成的影响。结果受精后72 h(72hpf),NMⅡ-B在斑马鱼发育着的咽弓部位有特异性表达;120 hpf,NMⅡ-B在咽弓表达增加。Blebbistatin特异性抑制NMⅡ-B功能后,斑马鱼咽弓发生明显发育缺陷,部分软骨细胞出现显著形态改变;抑制咽弓形成的作用与blebbistatin浓度呈现剂量依赖效应。结论 NMⅡ-B通过影响咽弓软骨细胞从而调节斑马鱼胚胎期咽弓的发育。
- 王鸿奎王学谦王新袁玮刘东
- 关键词：发育斑马鱼
- 兔抗多疣壁虎Hoxc10抗血清的制备及鉴定
- 2011年
- 目的:制备兔抗多疣壁虎Hoxc10抗血清并进行特性鉴定。方法:构建pGEX-4T1-g-Hoxc10质粒,转化大肠杆菌BL21后,在异巯基-1-硫代-β呋喃半乳糖(IPTG)诱导下,表达谷胱甘肽S-转移酶(GST)-g-Hoxc10蛋白。用亲和层析纯化的融合蛋白免疫大白兔,制备Hoxc10抗血清。用Western blot和免疫组化染色法检测Hoxc10抗血清的特性。结果:构建的多疣壁虎Hoxc10基因的原核表达质粒pGEX-4T1-g-Hoxc10,在大肠杆菌中获得高效表达。表达产物经亲和层析纯化后得到高纯度的Hoxc10融合蛋白,以其免疫大白兔获得较高效价的Hoxc10抗血清。Western blot及免疫组化染色法检测显示,所得抗血清具有较高的效价及特异性。结论:利用原核表达的多疣壁虎GST-g-Hoxc10融合蛋白制备的Hoxc10抗血清效价高,特异性良好,为进一步深入研究Hoxc10的功能提供了重要的制剂。
- 周晓芳陆仁飞陈倩储钰丹王学谦钱天梅顾星星
- 关键词：多疣壁虎融合蛋白抗血清
- 流式细胞仪分选转基因斑马鱼胚胎荧光标记细胞的一种快速方法被引量：1
- 2014年
- 荧光蛋白在特异组织和器官表达的转基因斑马鱼已经在发育生物学和疾病模型研究中得到了广泛的应用。这些转基因系有助于追踪和分析数量较少的细胞群。但是如果要分离得到这些细胞来定量分析mRNA或蛋白质的表达情况比较困难。利用流式细胞仪分选这些荧光标记细胞是一种解决办法。此方法在不同的实验室中被广泛地应用,也有相关流程的介绍。但是流程一般较为繁琐,操作比较困难。该文以从转基因斑马鱼Tg(Kdrl:EGFP)中分选绿色荧光蛋白阳性的血管内皮细胞为例,介绍利用流式细胞仪分选转基因斑马鱼荧光标记细胞的实验流程和技术要点。该文作者在前人工作的基础上结合大量的实验经验,发展并优化了一套操作简便、效率较高的流程来分选这些细胞,在此做详细的介绍给大家以供参考。
- 王新张素珍王学谦李丽萍张晶晶刘东
- 关键词：转基因分选流式细胞仪斑马鱼
