王亚辉
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 供职机构：生物芯片北京国家工程研究中心更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 一种用于基因芯片可靠的双轮RNA线性扩增技术被引量：2
- 2006年
- DNA微阵列能在一次实验中检测成千上万个基因的表达情况,有助于阐明疾病发生的分子机制及发现新的诊治靶标.但常规方法需要大量RNA,因而基于T7RNA线性扩增技术逐渐成为微阵列表达谱实验中最常用的探针制备方法.本方法将实验步骤进一步改进,增加额外的一轮体外转录,并结合Klenow酶标记技术来制备cDNA靶标和寡核苷酸芯片杂交.从纳克量级的总RNA起始,本方法和常规的RNA单轮线性扩增法相比,仍然准确地保留了约70%的基因表达信息.同一RNA样本的自身比较实验及重复实验结果也显示,该方法具有较高的可靠性和重复性.RNA双轮体外扩增法需要的起始RNA相对于常规的单轮扩增法减少了很多(10ng甚至更少),因而非常适合分析那些只能提供微量RNA的样本.
- 周荣荣卫军霞王亚辉张亮程京周玉祥
- 关键词：DNA微阵列
- 高性价比寡核苷酸基因表达谱芯片的制备方法被引量：1
- 2010年
- 目的探讨探针长度对寡核苷酸(Oligo)基因芯片杂交信号的影响。方法以大肠杆菌基因表达信息作为实验模型,根据已有大肠杆菌全基因组芯片数据选择覆盖高、中、低杂交信号强度的20个大肠杆菌基因,针对该20个基因分别设计59-mer和70-mer长度Oligo探针,并将2种探针点制在同一张芯片中,同时设阳性对照探针和阴性对照点样液。提取大肠杆菌RNA,经过反转录、扩增、荧光标记后与芯片进行杂交反应,采用激光共聚焦扫描仪扫描芯片,利用数据分析软件提取探针的杂交信号值并进行显著性分析。结果大肠杆菌28SrRNA和18SrRNA条带清晰,无降解带出现,质量合格。芯片杂交结果显示59-mer和70-mer长度探针的杂交效率和杂交信号差异无统计学意义(P=0.9810),阳性对照探针出现阳性杂交信号,阴性对照点样液未检测到杂交信号,符合质控要求。结论59-mer长度探针可用来制备Oligo基因芯片,这不仅降低了基因芯片制作成本,而且将推动基因芯片技术更为普及的应用。
- 任永红张科孙清岚王亚辉庄远红张亮
- 关键词：寡核苷酸序列分析寡核苷酸探针基因表达谱
