王丽丽
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
- 供职机构：遵义医学院附属医院更多>>
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- HL-60细胞胞质体的制备
- 2013年
- 建立悬浮培养细胞胞质体制备及鉴定方法,为细胞重构奠定基础。采用密度梯度离心法和低速离心法纯化人白血病HL-60细胞,在单独细胞松弛素B(CB)和联合秋水酰碱介导下,分别于34℃和25℃,50%Percoll等密度梯度离心对HL-60细胞进行脱核,然后分别用38%和40%Percoll密度梯度离心纯化胞质体;采用Wright-Giem-sa染色和4,6-联脒-2-苯基吲哚二盐酸盐(DAPI)/羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)荧光染料双染色观察胞质体形态学变化;采用流式细胞术(FCM)检测胞质体表型和线粒体膜电位(MMP)以评价其活性。结果显示,CB联合秋水酰碱介导HL-60细胞脱核率为91.98%±4.29%,明显高于单独CB组(74.95%±3.02%)(P<0.01);34℃组的脱核率和直径≥5μm胞质体比例均明显高于25℃组(P<0.01,P<0.05);38%Percoll密度梯度离心纯化胞质体纯度高于40%Percoll组;纯化的HL-60胞质体表型无明显变化,12h内其活性达80%以上。结果表明,CB联合秋水酰碱介导下50%Percoll密度梯度离心脱核、38%Percoll密度梯度离心纯化、DAPI/CFSE双染鉴定、MMP检测是制备和鉴定悬浮培养细胞胞质体的适宜方案。
- 王丽丽喻皇飞方宁陈代雄
- 关键词：HL60细胞细胞松弛素B
