滕巧泱
- 作品数：86 被引量：274H指数：6
- 供职机构：中国农业科学院上海兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市自然科学基金上海市科技兴农重点攻关项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 表达3个外源基因真核表达载体的构建被引量：5
- 2011年
- 为构建可以同时表达3个外源基因的真核表达载体,本实验以pCAGGs载体为骨架,引入SV40启动子及单疱疹病毒(HSV)TK基因的polyA序列,并且在β-actin启动子下游插入内部核糖体进入位点序列(IRES),构建了能够同时表达3个外源基因的真核表达质粒pCAGGs-IRES。本研究将PR8流感病毒的M基因、绿色荧光蛋白基因EGFP及H1N1猪流感病毒的HA基因,分别克隆于pCAGGs-IRES载体的3个启动子下游,转染细胞后,通过间接免疫荧光和western blot表明本实验构建的pCAGGs-IRES载体能同时表达3个外源基因。该载体有望为基因疫苗、基因操作及蛋白质相互作用等研究提供新的真核表达载体。
- 张树梅黄海碧滕巧泱闫丽萍颜丕熙徐大伟戴晓光张旭呼和巴特尔李泽君
- 关键词：基因表达
- 高效表达HA蛋白的重组流感病毒及其制备方法和应用
- 本发明公开了一种PR8重组流感病毒，该重组流感病毒含有H10亚型流感病毒的HA和/或NA基因、含有PR8病毒的6个内部基因(PB1，PB2，PA，NP，M，NS基因)，其中NS和NP基因或二者之一含有以下突变位点：NS基...
- 李泽君滕巧泱
- 文献传递
- 蝙蝠流感病毒与H9N2亚型禽流感病毒的重组特性研究被引量：1
- 2022年
- 人类历史上数次流感大流行,都与不同流感病毒之间的基因重组有关,为了研究新发现的蝙蝠流感病毒与禽流感病毒的重组可能性,本研究利用反向遗传操作技术对嵌合蝙蝠流感病毒(Bat09:mH9mN2)与禽流感病毒(A2093/H9N2)进行替换重组,研究发现仅H9病毒的M基因可单向替换Bat病毒的M基因获得重组嵌合蝙蝠流感病毒,命名为Bat09:mH9mN2-A2093(M),其他基因均不能互换拯救。该重组病毒可以在鸡胚上、MDCK细胞上复制良好,但在禽源LMH细胞上几乎不复制。本研究发现蝙蝠流感病毒与H9N2亚型禽流感病毒之间的基因兼容性并不强,仅有禽源病毒M基因可以单向替换重组,这与之前的研究报道一致,关于M基因的重组兼容性及重组病毒生物学特性还有待进一步研究。
- 张培黄敏滕巧泱刘芹防李雪松张志飞崔宏锐李泽君周雨霞杨健美
- 关键词：H9N2亚型禽流感病毒M基因
- 抗H9亚型禽流感病毒的单克隆抗体、杂交瘤细胞株及其应用
- 本发明公开了一种抗H9亚型禽流感病毒的单克隆抗体，其结合H9亚型禽流感病毒的HA蛋白，并具有血凝抑制活性。本发明还公开了检测H9亚型禽流感病毒抗体的试剂盒及上述单克隆抗体在制备诊断禽流感的产品中的应用。本发明检测H9亚型...
- 李泽君杨健美滕巧泱李雪松戴晓光
- 文献传递
- 犬流感重组病毒及其制备方法和应用
- 本发明公开一种犬流感重组病毒，该重组病毒包含：ZJCIV犬流感病毒的HA和NA基因、以及PR8病毒的PA、PB1、PB2、M、NP和NS六个内部基因。本发明还公开了犬流感重组病毒的制备方法及应用。本发明的犬流感重组病毒，...
- 李泽君滕巧泱张旭周洁文
- 文献传递
- H3N2禽流感病毒反向遗传操作平台的建立
- 2022年
- 近几年,禽流感病毒(AIV)跨越禽-犬屏障产生新型H3N2犬流感病毒,后者在亚洲多国的犬中广泛流行,造成潜在的公共卫生安全威胁。尽管如此,H3N2 AIV如何跨宿主传播至犬的分子机制尚不清楚。为此,本研究利用早期筛选到的一株不感染犬和鼠,但感染禽的H3N2禽流感病毒A/Duck/Shanghai/01/2009(H3N2)(简称为SH01),通过RT-PCR技术扩增了病毒的8个全基因片段,并分别克隆至PLLB双向表达载体上。将构建成功的8个质粒纯化后共转染293T细胞,转染48 h后加入TPCK胰酶作用2 h,将上清液和细胞一同接种9~11日龄SPF鸡胚,检测其血凝效价。经测序分析,确定获救病毒的8个基因片段序列与亲本毒株的序列完全一致,表明该病毒拯救成功。H3N2禽流感病毒反向遗传操作平台的成功建立为探索该病毒跨宿主传播犬的分子机制提供了工具。
- 石晓娜闫婉婉陈新武潘学李雪松刘芹防杨健美李泽君滕巧泱
- 关键词：H3N2禽流感病毒
- H9N2亚型禽流感病毒荧光定量PCR方法的建立及初步应用被引量：5
- 2013年
- H9N2亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)是我国主要流行的低致病性禽流感病毒亚型,因而对其进行病毒的监测与诊断显得极其重要。通过比对GenBank上H9亚型禽流感病毒HA基因序列,设计了一个特异性针对H9 AIV HA的探针。特异性和扩增曲线实验结果显示,该探针具有较好的扩增效率,且仅特异性识别H9亚型AIV。通过重组质粒pMD19-T-H9HA 10倍梯度稀释液为模板,进行荧光定量PCR。实验结果表明,本研究所建立的荧光定量PCR方法敏感性能达到100个DNA拷贝数,比传统PCR方法检测敏感性提高了1000倍。此外,本方法还能检测到10EID50个病毒,比传统PCR方法检测敏感性也提高了1000倍。通过批间和批内试验,结果表明,这两个试验的变异系数分别小于5%和1%,说明本研究的方法具有较好的重复性。此外,通过检测人工感染动物咽拭子,结果表明H9亚型AIV荧光定量PCR方法比传统PCR的方法检测敏感性提高了100倍。在临床样品的检测中,H9亚型AIV荧光定量PCR方法检测的阳性率比传统PCR法检测的阳性率提高了大约30%。综上所述,本研究所建立的H9N2亚型禽流感病毒荧光定量PCR方法具有较高的特异性、准确性和敏感性,对H9亚型禽流感疫情防控及其流行病学调查具有积极的科学意义。
- 胡涛滕巧泱申伟霞张月娥李国新李雪松闫丽萍姜秀云李泽君
- 关键词：H9N2禽流感病毒定量PCR敏感性
- H9N2亚型禽流感病毒反向遗传操作平台的建立被引量：2
- 2020年
- H9N2亚型禽流感病毒(AIV)在自然界中广泛存在和传播,给养禽业造成了巨大损失。为了进一步揭示该病毒的致病机制,本研究采用RT-PCR技术扩增禽流感病毒A/Chicken/Shanghai/1/2006(简称SH1)的PB2、PB1、PA、HA、NP、NA、M、NS 8个基因片段,并分别克隆至PLLB双向表达载体上。采用8质粒系统共转染293T细胞,转染48 h后加入TPCK胰酶作用2 h,将上清液和细胞一同接种9~11日龄SPF鸡胚,并检测其血凝效价。经序列比对,拯救获得的病毒rSH1的8个基因片段序列均与亲本病毒SH1的序列相同。实验结果表明,本研究成功建立了H9N2亚型禽流感病毒反向遗传操作系统,为该病毒的致病机理和传播机制研究等奠定了技术平台。
- 陈新武石晓娜潘学李雪松杨健美刘芹防陈鸿军滕巧泱李泽君
- 关键词：禽流感病毒H9N2致病
- H9亚型禽流感病毒基质蛋白M1单克隆抗体的制备与鉴定被引量：6
- 2010年
- 本研究用纯化的H9N2亚型禽流感病毒免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合。对杂交瘤细胞及时筛选,阳性孔经3次有限稀释法克隆,成功获得3株能稳定传代并分泌抗H9亚型禽流感病毒基质蛋白M1单克隆抗体的杂交瘤细胞:3G8、2F6、5F2。间接ELISA方法检测,3株单克隆抗体的腹水间接ELISA效价达106以上。构建了真核表达载体pCAGGS-M1并转染于MDCK细胞,以用于腹水的Western blot和间接免疫荧光鉴定。间接免疫荧光结果表明,3株单克隆抗体皆与真核表达蛋白M1反应。这些单克隆抗体的制备为后期研究M1蛋白在流感病毒复制与出芽过程中的重要生物学功能奠定了基础。
- 戴晓光滕巧泱黄海碧王朝霞张树梅张旭徐大伟申之义李泽君
- 关键词：H9亚型禽流感病毒单克隆抗体间接免疫荧光蛋白免疫印迹法
- 家禽细胞因子研究概况
- 近年来,分子生物学新理论、新技术的不断发展,推动了免疫学的发展,禽类许多如,IL-1β、IL-2、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-16、IL-17、IL-18和IFN等细胞因子被发现和研究。...
- 周继勇陈吉刚王金勇滕巧泱黄振宇顾建友
- 文献传递
