欧阳应斌
- 作品数：19 被引量：36H指数：4
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程更多>>
- 野生型组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)工程细胞株生物学特性分析
- 1997年
- 野生型t-PA工程细胞4B3形态与亲代细胞CHO-dhfr-相似呈多角形,类似上皮细胞。在MTX加压达5×10^(-7)mol/L时,少数细胞略变瘦长,但仍显多角形,形态正常。细胞无血清培养上清经FAPA检测,亚克隆株表达水平为10~6细胞4000～5000IU/24h。细胞经体外传代3个月及冻存3个月后复苏,部分亚克隆株表达水平下降,多数仍为10~6细胞4000IU/24h,表明4B3细胞株稳定性好。裸鼠试验表明,该工程株活细胞、细胞DNA、纯化的4B3rt-PA均无致瘤性病毒,支原体检查为阴性。遗传特性分析表明,该工程细胞与其亲代细胞CHO-dhfr-细胞染色体数均为20条,均有不同程度不同类型的畸变。该工程细胞的畸变率为16％。CHO-dhfr-细胞畸变率为6％。属正常范围。结果表明4B3细胞株为高效表达的性能优良的工程细胞株。
- 徐秀英陈琳欧阳应斌刘士辉朱恒奇黄培堂黄翠芬
- 关键词：工程细胞株特性分析
- 人组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)mRNA5′端非翻译区(UTR)对其表达的调控
- 1994年
- 运用反转录-PCR技术,从黑色素瘤细胞中扩增出t—PA cDNA 5′末端460bp的片段,再经重组获得含完整5′-UTR的t—PA cDNA克隆,在兔网织红细胞裂解物中翻译和COS-7细胞中表达发现,t—PA mRNA 5′—UTR对其表达有明显的抑制作用。将t—PA mRNA 5′—UTR用苜蓿病毒RNA 5′—UTR替换,使t—PA的表达水平提高3-7倍,mRNA翻译起始区二级结构分析结果表明,翻译起始区的二级结构与t-PA的表达水平有关。
- 欧阳应斌黄培堂黄翠芬
- 关键词：人组织型纤溶酶原激活剂非翻译区
- 靠近5′端帽子的上游AUG不影响t-PA mRNA的翻译被引量：2
- 1995年
- 大多数真核生物mRNA的翻译起始都符合Kozak提出的扫描学说,即40s小亚基携带相应的起始因子进入mRNA的5′末端,沿mRNA线性滑动,至第一个AUG起始密码处与60s大亚基结合,形成第一个肽键,然后进入肽链延伸阶段。本课题组所构建的重组质粒pMM 5065含人组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)cDNA。序列分析证明,该质粒中t-PA起始密码子ATG的5′端序列为:AAGCTTGCATGCCTGCAGGTC ATG GAT……,可见转录后t-PA mRNA起妈密码子AUG的5′端还有一个AUG三联体(即上游AUG)。
- 欧阳应斌黄培堂黄翠芬
- 关键词：MRNA体外转录起始密码子真核生物小亚基
- 野生型组织型纤溶酶原激活剂工程细胞株生物学特性分析
- 1999年
- 组织型纤溶酶原激活剂（ｔ－ＰＡ）是体内丝氨酸类蛋白酶。它能激活纤维蛋白溶酶原生成纤溶酶，后者将不溶性的纤维蛋白降解为可溶性肽段，使血栓溶解，血管再通。而且由于它与纤维蛋白有高亲和力，只激活血栓表面纤溶酶原，溶解局部血栓，因而引起全身出血倾向小。目前，...
- 徐秀英陈琳欧阳应斌刘士辉朱恒奇黄培堂黄翠芬
- 关键词：野生型T-PA工程细胞株纤溶酶原激活剂
- 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染研究进展被引量：6
- 1989年
- 目前,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌所致的医院内交叉感染日趋严重,已成为亟待解决的全球性公共卫生问题之一,但在我国目前尚未引起足够的重视。本文着重介绍该菌株特点、流行病学、检测技术及防治措施等问题。
- 欧阳应斌陈宁庆
- 关键词：耐甲氧西林金葡球菌
- t-PA cDNA在CHO细胞中的高效稳定表达被引量：7
- 1995年
- 我们曾报道t-PA mRNA非翻译区序列对其表达有明显的抑制作用,在此基础上,通过对5′-UTR及3′-UTR的改造,使t-PA在COS-7细胞中的表达水平提高30倍左右。将t-PA表达质粒用电击法转染中国仓鼠卵巢细胞二氢叶酸还原酶缺陷株(CHO-dhfr),经过混合加压及筛选,在CHO细胞中高效表达了t-PA,表达水平达到5000～6000 IU/10~6细胞/24hr。重组t-PA具有与天然t-PA相同的分子量及酶活性。经过8个月连续传代,表达水平未下降,表明细胞株是稳定的,其主要指标均符合工程细胞株的要求。
- 欧阳应斌黄培堂徐秀英陈琳黄翠芬
- 关键词：人组织型纤溶酶原激活剂CHO细胞
- t-PA在哺乳动物细胞中的表达调控及高效表达被引量：3
- 1994年
- 人组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)对纤维蛋白有较强的亲和力,可选择性溶解血栓而不引起全身出血倾向,所以是一种较理想的溶血栓药物。美国的重组t-PA已通过FDA批准,应用于临床,每年销售达数亿美元。国内上医,北大,南大及我所先后开展了t-PA在CHO细胞中的表达的研究,经多年努力表达水平约1～2μg(200～400IU)/10~6细胞/24小时,但该水平离中试生产尚有差距。
- 欧阳应斌顾利群黄培堂黄翠芬
- 关键词：细胞克隆T-PA溶血栓药翻译起始区非翻译区
- 人IL-6和TNF突变体重组融合蛋白表达质粒的构建及在大肠杆菌中的表达被引量：1
- 1994年
- 本文利用PCR技术,对人肿瘤坏死因子α(hTNFα)基因进行了改造,并将其与人白细胞介素-6(hIL-6)成熟肽编码区cDNA进行融合,构建了5′IL-6-TNF△融合蛋白的表达质粒pBVIL6-TNFA△。DNA序列分析证明,PCR扩增片段核苷酸序列与引物设计序列及相应的cDNA序列完全一致;重组子用限制性内切酶酶切鉴定,含有正确的IL6-TNF△融合cDNA片段;表达产物经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,分子量约为37kD,与预计的相符合;生物学活性分析初步表明,该融合蛋白具有抗肿瘤活性。
- 刘丽欧阳应斌黄培堂刘及
- 关键词：人肿瘤坏死因子突变体
- 人组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)mRNA5′端非翻译区(UTR)对其表达的调控被引量：6
- 1995年
- 人组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)在人体纤溶与凝血的平衡调控中发挥重要作用,而且在治疗心血管栓塞性疾病方面具有广阔的应用前景.t-PA在人体内的表达受严格调控,其mRNA具有较长的非翻译区序列.我们曾报道了t-PA mRNA 3′-UTR对其表达的调控,为研究长约209nt的5′-UTR序列对t-PA表达的影响.本文采用反转录-PCR技术从黑色素瘤细胞中克隆出t-PA cDNA 5′端序列,在体外和体内2个系统中研究了5-′UTR序列对t-PA表达的影响.
- 欧阳应斌黄培堂黄翠芬
- 关键词：纤溶酶原激活剂非翻译区RNAT-PA
- 组织型纤溶酶原激活剂抗血清的制备及初步应用
- 1995年
- 在研究t-PA过程中,区分t-PA与其它纤溶药物的较特异方法是采用抗体中和抑制试验。本文用200μg t-PA经背部皮下多点免疫家兔,待产生的抗体效价经ELISA测定达1∶1000后,经兔动脉放血收集抗血清。该血清有DE-32直接过滤法纯化,检定其纯度及特异性后,用于中和抑制试验检定t-PA的基因工程产品。结果表明本组构建表达的野生型t-PA和突变体t-PA的活性均能被兔抗t-PA抗体抑制,为特异产品。
- 徐秀英陈琳周卫刘士辉欧阳应斌王珏黄培堂
- 关键词：组织型纤溶酶原激活剂抗血清
