梁晨 作品数:12 被引量:23 H指数:3 供职机构: 石河子大学医学院 更多>> 发文基金: 新疆生产建设兵团医药专项基金 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
不同毒力结核杆菌对感染小鼠肺泡巨噬细胞铁蛋白及铁转运蛋白表达的影响 2014年 目的:探讨不同毒力的结核杆菌分别感染小鼠肺泡巨噬细胞后铁蛋白(Fn)和铁转运蛋白(FPN)表达量及其时相性变化。方法:利用制备的结核杆菌国际标准强毒株H37Rv株(以下简称H37Rv株)和卡介苗菌株(以下简称BCG)菌悬液,分别经小鼠尾静脉注射,建立各组小鼠感染模型。各组小鼠感染模型建立成功后,分别于第1、3、5、7、9、11、13、15天,进行肺泡灌洗,收集小鼠肺泡灌洗液,获取各组小鼠肺泡巨噬细胞。应用ELISA方法检测各组感染组小鼠肺泡巨噬细胞中Fn和FPN的表达含量;应用Western blot技术检测上述时间点各组感染的小鼠肺泡巨噬细胞内Fn的表达量。结果:用ELISA方法和Western blot技术检测各组小鼠肺泡巨噬细胞内Fn表达,结果显示:于模型建成后第7、9、11天,H37Rv株组与BCG组的小鼠肺泡巨噬细胞内Fn表达量明显减低,并且于第7天时表达量最低,差异有统计学意义(P<0.05)。利用ELISA方法检测各组小鼠肺泡巨噬细胞内FNP的表达,结果显示:不同毒力的结核杆菌菌株感染小鼠肺泡巨噬细胞后,各感染组内小鼠肺泡巨噬细胞FPN随处理时间延长表达逐渐降低;于感染第5天开始下降明显,第7、9天最低。H37Rv株组和BCG组表达接近,于第5、7、9天明显低于正常对照组FPN的表达量,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:结核杆菌感染导致巨噬细胞内Fn与FPN的表达均降低,并且感染巨噬细胞Fn和FPN的表达与结核杆菌的毒力强弱关系无相关性。 庄睿 王霞 张锋 宝音 章乐 吴芳 吴江东 张春军 张辉 李文娟 梁晨 樊超 张万江关键词:结核杆菌 铁蛋白 PhoP/PhoR基因过表达结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv的构建及鉴定 被引量:2 2014年 目的构建PhoP和PhoR基因过表达结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv(以下简称H37Rv),检测不同电压条件下电转化构建的PhoP/PhoR基因过表达H37Rv菌株PhoP/PhoR基因的表达水平。方法提取并鉴定结核分枝杆菌重组穿梭质粒pMV361-PhoP和pMV361-PhoR,利用电转化技术将结核分枝杆菌重组穿梭质粒pMV361-PhoP和pMV361-PhoR导入H37Rv的感受态细胞中,构建PhoP/PhoR基因过表达H37Rv,应用实时荧光定量PCR检测不同电压条件下电转化构建的PhoP/PhoR基因过表达H37Rv的PhoP/PhoR基因表达水平。结果成功构建PhoP/PhoR基因过表达H37Rv。应用实时荧光定量PCR检测不同电压条件下电转化构建的PhoP/PhoR基因过表达H37Rv的PhoP/PhoR基因表达水平,其中在电压为2 300~2 500V的范围内,电压越高,电转化菌的PhoP/PhoR基因表达量越高。结论成功构建了PhoP/PhoR基因过表达H37Rv菌株,以电压为2 500V电转化构建的PhoP/PhoR基因过表达H37Rv的PhoP/PhoR基因表达量较高。 王钊 雷英 吴芳 章乐 曹旭东 吴江东 张辉 张春军 朱彬 邬博 何丽 张玉清 李瑞山 庄睿 梁晨 樊超 李文娟 张万江关键词:结核分枝杆菌 过表达 结核分枝杆菌Pup-蛋白酶体系统与不同毒力结核分枝杆菌致病性的相关性研究 被引量:6 2014年 目的通过比较分析不同毒力结核分枝杆菌Pup、Dop、PafA和Mpa基因的表达差异,探讨Pup-蛋白酶体系统与不同毒力结核分枝杆菌致病性的相关性。方法分别提取卡介苗菌株(BCG)、结核分枝杆菌国际标准无毒珠(H37Ra)、结核分枝杆菌国际标准强毒珠(H37Rv)、新疆地区流行的优势强毒结核分枝杆菌临床分离株总RNA,并进行纯度鉴定。运用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测结核分枝杆菌Pup、Dop、PafA和Mpa基因的表达,比较分析不同毒力结核分枝杆菌Pup、Dop、PafA和Mpa基因的表达差异。结果 H37Rv菌株和新疆地区流行的优势强毒结核分枝杆菌临床分离株与BCG菌株相比,Pup基因表达分别上调1.67、2.65倍,Dop基因表达分别上调2.42、3.69倍,PafA基因表达分别上调4.09、7.36倍,Mpa基因表达分别上调2.65、3.91倍,差异有统计学意义(P<0.05);BCG、H37Ra、H37Rv菌株与新疆地区流行的优势强毒结核分枝杆菌临床分离株相比,Pup基因表达分别下调62%、59%、37%倍,Dop基因表达分别下调63%、64%、34%倍,PafA基因表达分别下调87%、86%、44%倍,Mpa基因表达分别下调64%、67%、32%倍,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在BCG、H37Ra、H37Rv、新疆地区流行的优势强毒结核分枝杆菌临床分离株Pup、Dop、PafA和Mpa基因的表达有差异性,且与菌株毒力呈正相关。Pup-蛋白酶体系统与不同毒力结核分枝杆菌致病性具有相关性。 朱彬 吴芳 章乐 吴江东 张辉 张春军 曹旭东 邬博 何丽 张玉清 李瑞山 王钊 庄睿 李文娟 梁晨 樊超 张万江关键词:结核分枝杆菌 毒力 结核杆菌Pup-蛋白酶体系统与耐药结核杆菌耐药性的相关性研究 被引量:7 2014年 目的:检测不同耐药的结核杆菌临床分离株原核类泛素蛋白-蛋白酶体系统(以下简称:Pup-蛋白酶体系统)相关的Pup、Dop、PafA、Mpa基因的表达水平,探讨研究结核杆菌Pup-蛋白酶体系统与新疆地区广泛流行的耐药结核杆菌临床分离株耐药性的相关性。方法:以培养对数生长期的新疆地区广泛流行的耐药结核杆菌临床分离株为研究对象,分别提取结核杆菌临床分离的药物敏感菌株、单纯耐异烟肼的结核杆菌临床分离株(INH-MTB)、单纯耐利福平的结核杆菌临床分离株(RFP-MTB)、单纯耐链霉素的结核杆菌临床分离株(SM-MTB)、单纯耐乙胺丁醇的结核杆菌临床分离株(EB-MTB)、耐多药结核杆菌临床分离株(MDR)等各组菌株的总RNA,经纯度鉴定后,利用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法,检测各组结核杆菌菌株的Pup、Dop、PafA、Mpa基因的表达水平,分析各组耐药结核杆菌临床分离株Pup-蛋白酶体系统相关的Pup、Dop、PafA、Mpa基因的表达与新疆地区广泛流行的耐药结核杆菌临床分离株耐药性的相关性。结果:与药物敏感菌株相比,Pup、Mpa基因在单一耐药菌株和耐多药菌株中表达有不同程度的下调,Dop、PafA基因在单一耐药菌株和耐多药菌株中表达有不同程度的上调,差异有统计学意义(P<0.05)。与MDR相比,Pup、Dop、Mpa基因在单一耐药菌株中表达有不同程度的上调,PafA基因在单一耐药菌株中表达有不同程度的下调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:在结核杆菌临床分离的药物敏感菌株、INH-MTB组、RFP-MTB组、SM-MTB组、EB-MTB组和MDR组中,结核杆菌Pup、Dop、PafA、Mpa基因的表达差异,与新疆地区广泛流行的耐药结核杆菌临床分离株耐药性有相关性。 何丽 雷英 吴芳 章乐 吴江东 曹旭东 朱彬 邬博 李瑞山 张玉清 王钊 庄睿 李文娟 梁晨 樊超 张万江关键词:结核杆菌 耐药性 结核杆菌PhoPR双组分系统与广泛流行的耐药结核杆菌耐药性的相关性研究 2013年 目的:通过比较分析不同耐药的结核杆菌临床分离株PhoP基因和PhoR基因的表达水平差异,探讨研究结核杆菌PhoPR双组分系统与新疆地区广泛流行的耐药结核杆菌耐药性是否具有相关性。方法以新疆地区广泛流行的耐药结核杆菌临床分离株为研究对象,分别提取结核分枝杆菌临床分离药物敏感菌株、单纯耐异烟肼的结核杆菌临床分离株( INH-MTB)、单纯耐利福平的结核杆菌临床分离株( RFP-MTB)、单纯耐链霉素的结核杆菌临床分离株( SM-MTB)、单纯耐乙胺丁醇的结核杆菌临床分离株( EB-MTB)、耐多药结核杆菌临床分离株( MDR)总RNA,并进行纯度鉴定,运用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR的方法,分别检测各组结核杆菌菌株的PhoP基因和PhoR基因的表达,比较分析不同耐药的结核杆菌临床分离株PhoP基因和PhoR基因的表达水平的差异。结果与结核分枝杆菌临床分离药物敏感菌株相比,PhoP基因在RFP-MTB中的表达上调1.48倍,在MDR中的表达上调2.74倍,差异有统计学意义(P<0.05);与MDR相比,PhoP基因在INH-MTB、RFP-MTB、SM-MTB和EB-MTB中的表达下调0.70、0.50、0.25和0.21倍,差异有统计学意义(P<0.05)。与结核分枝杆菌临床分离药物敏感菌株相比,PhoR基因在INH-MTB、RFP-MTB、SM-MTB和EB-MTB中的表达分别上调6.33、4.56、2.34和1.85倍,在MDR中的表达上调9.06倍,差异有统计学意义( P<0.05);与 MDR相比,PhoR基因在INH-MTB、RFP-MTB、SM-MTB 和EB-MTB 中的表达下调0.36、0.54、0.35和0.19倍,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在结核分枝杆菌临床分离药物敏感菌株、INH-MTB、RFP-MTB、SM-MTB、EB-MTB和MDR中,结核杆菌PhoP和PhoR基因的表达有差异,结核杆菌PhoPR双组分系统与新疆地区广泛流行的耐药结核杆菌的耐药性具有相关性。 李文娟 宝音 王霞 张峰 梁晨 庄睿 樊超 庹清章 张春军 张辉 吴芳 吴江东 章乐 张万江关键词:结核分枝杆菌 耐药性 结核分枝杆菌PhoPR双组分系统与不同毒力结核分枝杆菌致病性的相关性研究 被引量:3 2014年 目的:通过比较分析卡介苗株(BCG)、结核分枝杆菌国际标准无毒株(H37Ra)、结核分枝杆菌国际标准强毒株(H37Rv)、新疆地区流行的优势强毒株结核分枝杆菌临床分离株(XJ-MTB)的PhoP基因和PhoR基因的表达水平差异,探讨研究结核分枝杆菌PhoPR双组分系统与不同毒力结核分枝杆菌的致病性是否具有相关性。方法:首先提取上述四种不同毒力结核分枝杆菌菌株的总RNA,并进行完整性鉴定;再运用SYBR Green I实时荧光定量PCR技术检测各组菌株中PhoP基因和PhoR基因的表达水平;最后比较不同毒力结核分枝杆菌PhoP基因和PhoR基因的表达水平差异。结果:四种不同毒力菌株PhoP基因的相对表达量,由高到低依次为XJ-MTB(9.05)、H37Rv(1.00)、H37Ra(0.25)、BCG(0.08),且四种菌株中PhoP基因的表达有显著的统计学差异(P<0.05);同时四种不同毒力菌株PhoR基因的相对表达量,由高到低依次为XJ-MTB(5.72)、H37Rv(1.00)、H37Ra(0.18)、BCG(0.07),且四种菌株中PhoR基因的表达有显著的统计学差异(P<0.05)。其中XJ-MTB菌株PhoP基因和PhoR基因的表达水平与BCG、H37Rv、H37Ra相比存在显著的统计学差异(P<0.05);H37Rv菌株PhoP基因和PhoR基因的表达与BCG、H37Ra相比存在显著的统计学差异(P<0.05);而BCG菌株PhoP基因和PhoR基因的表达与H37Ra相比统计学差异不显著(P>0.05)。结论:结核分枝杆菌PhoPR双组分系统中PhoP基因和PhoR基因在不同毒力结核分枝杆菌中的表达存在差异,并且该系统与不同毒力结核分枝杆菌的致病性存在相关性。 邬博 吴芳 章乐 吴江东 张辉 张春军 曹旭东 朱彬 李瑞山 何丽 王钊 张玉清 庄睿 李文娟 梁晨 樊超 张万江关键词:结核分枝杆菌 结核分枝杆菌PhoP/PhoR基因重组穿梭表达质粒的构建及鉴定 被引量:2 2013年 为构建结核杆菌PhoPR双组分系统PhoP、PhoR基因的重组穿梭质粒pMV361-PhoP、pMV361-PhoR并对其进行鉴定。采用结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv菌株基因组DNA为模版,利用PCR技术分别扩增PhoP、PhoR基因编码序列,先克隆于T-Vector pMD19(Simple),再亚克隆至大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达载体pMV361,并转化E.coli DH5α感受态细胞,提取所得的阳性克隆子获得重组表达质粒pMV361-PhoP、pMV361-PhoR,通过PCR及双酶切鉴定。结果显示,结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv菌株基因组DNA中扩增出的PhoP、PhoR基因与GenBank公布的序列一致,经过PCR及双酶切鉴定,表明PhoP、PhoR基因均成功插入了pMV361穿梭载体。由此可知,成功构建了重组穿梭质粒pMV361-PhoP、pMV361-PhoR,为进一步研究PhoPR双组分系统奠定了基础。 梁晨 姜晓霞 张锋 王霞 吴芳 章乐 吴江东 张春军 张辉 樊超 庄睿 李文娟 张万江关键词:结核杆菌 PHOP 耐药结核分枝杆菌PhoPR双组分系统基因表达的研究 被引量:3 2014年 目的比较结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)原始耐药菌株与经过含不同浓度培养基培养后的菌株中PhoPR双组分系统基因表达水平的差异,研究MTB PhoPR双组分系统与MTB耐药的相关性。方法分别在原始状态下和用低浓度含药培养基及高浓度含药培养基培养单纯耐异烟肼MTB临床分离株(INH-MTB)、单纯耐利福平的MTB临床分离株(RFP-MTB)、单纯耐链霉素MTB临床分离株(SM-MTB)、单纯耐乙胺丁醇的MTB临床分离株(EB-MTB)、耐多药MTB临床分离株(MDR)养至对数期,提取各组MTB总RNA,并进行纯度鉴定;运用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR,检测各组MTB的PhoP基因和PhoR基因的表达,比较不同耐药的MTB临床分离株PhoP基因和PhoR基因表达水平的差异。结果在低浓度抗结核药物条件下培养的INH-MTB、RFP-MTB、SM-MTB和MDR组MTB与原始状态下MTB相比,PhoP基因表达分别上调2.19、2.04、1.72、2.73倍,PhoR基因分别上调1.57、2.57、1.56和2.83倍,差异有统计学意义(P<0.05);在高浓度抗结核药物条件下培养,INH-MTB、RFP-MTB、SMMTB、EB-MTB和MDR组MTB中的PhoP基因表达分别上调1.79、1.44、2.10、1.27和1.97倍,PhoR基因在INHMTB、RFP-MTB、SM-MTB和MDR组MTB分别上调1.05、1.91、1.76和2.13倍,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PhoP和PhoR基因的差异表达与MTB的耐药性相关,提示PhoPR双组分系统与MTB耐药具有相关性。 李文娟 宝音 王霞 张峰 章乐 吴芳 吴江东 庄睿 邬博 梁晨 樊超 张春军 张辉 张万江关键词:结核分枝杆菌 耐药性 结核分枝杆菌对感染小鼠肺泡巨噬细胞转铁蛋白受体和铁蛋白表达的影响 被引量:1 2014年 探讨不同毒力结核分枝杆菌感染对小鼠肺泡巨噬细胞转铁蛋白受体(TfR)和铁蛋白(Fn)表达的影响及其时相性变化。利用制备的卡介苗(以下简称BCG)和结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv株(以下简称H37Rv株)悬液,分别经小鼠尾静脉注射,建立各组小鼠感染模型,各组小鼠感染模型建立成功后,分别于第1、3、5、7、9、11、13、15天,进行各组小鼠肺泡灌洗,收集小鼠肺泡灌洗液,获取各组小鼠肺泡巨噬细胞。应用ELISA方法和Western blot技术检测各组小鼠肺泡巨噬细胞TfR和Fn的表达。利用ELISA方法检测各组小鼠肺泡巨噬细胞TfR的表达结果显示:H37RV组与BCG组小鼠肺泡巨噬细胞TfR表达均高于空白对照组,在感染第7、9、11天差异最明显,具有统计学意义(P<0.05)。利用Western blot技术检测各组小鼠肺泡巨噬细胞TfR表达结果显示:于模型建成后第7、9、11天,H37RN组、BCG组、空白对照组三组之间差异有统计学意义(P<0.05)。用ELISA方法和Western blot技术检测各组小鼠肺泡巨噬细胞内Fn表达结果显示:于模型建成后第7、9、11天,H37RV组与BCG组的小鼠肺泡巨噬细胞内Fn表达量明显减低,并且于第7天时表达量最第,异有统计学意义(P<0.05)。结核分枝杆菌感染小鼠,导致小鼠肺泡巨噬细胞TfR的表达增高,而Fn的表达降低。不同毒力的结核杆菌感染后Fn蛋白表达差异并不明显,而不同毒力的结核杆菌感染后TfR蛋白的表达有差异性。 庄睿 姜晓霞 张峰 梁晨 樊超 李文娟 吴芳 章乐 吴江东 张春军 张辉 张万江关键词:结核分枝杆菌 转铁蛋白受体 卡介苗菌株和结核分枝杆菌H37Ra菌株原生质体的制备研究 2014年 分别以卡介苗菌株(BCG)及结核分枝杆菌国际标准无毒株H37Ra菌株(H37Ra)为受体菌,制备上述两种菌株的原生质体,同时通过优化细菌菌龄、酶解浓度、酶解温度以及酶解时间等影响因素,探索出制备原生质体形成及再生的最优条件。结果显示:摸索出制备BCG和H37Ra菌株的原生质体条件:在对数生长期的两亲本菌株,经0.01 mol/L EDTA,0.01%β-巯基乙醇溶液预处理;酶解浓度为12 mg/mL,酶解温度为37℃,酶解时间为5 h,可制备出活性较高的两种菌株的原生质体。由此可知,成功制备了BCG与H37Ra菌株的原生质体,并能在高渗固体培养基上再生。本实验为进一步研究该两种菌株原生质体融合试验奠定了基础。 樊超 姜晓霞 张锋 王霞 吴芳 章乐 吴江东 张春军 张辉 梁晨 庄睿 李文娟 张万江关键词:原生质体制备 影响因素