梁宏儒
- 作品数：10 被引量：38H指数：4
- 供职机构：黑龙江八一农垦大学更多>>
- 发文基金：黑龙江省重大科技攻关项目黑龙江省研究生创新科研项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 金黄色葡萄球菌GapC蛋白与鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白的融合表达及其活性被引量：2
- 2014年
- 目的在大肠埃希菌中融合表达金黄色葡萄球菌(Staphylococcus.aureus,S.aureus)GapC蛋白与鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白,并检测其甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)活性。方法采用PCR技术分别扩增鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白flic基因和S.Aureus GapC基因,通过overlap PCR将这两段基因拼接并克隆至载体pQE30a,构建重组表达质粒pQE30-flic-GapC,将重组表达质粒转化E.coli XL-blue,IPTG诱导表达,表达产物经镍柱亲和层析试剂盒纯化后,进行SDS-PAGE及Western blot分析,并检测其GAPDH活性。结果重组表达质粒pQE30-flic-GapC经双酶切及测序鉴定证明构建正确;表达产物相对分子质量约95 000,最佳诱导表达时间为5 h,主要以包涵体形式存在,占菌体总蛋白的31.4%;纯化产物可与小鼠抗S.aureus全菌体多抗血清和抗鼠伤寒沙门菌全菌体多抗血清发生特异性反应,GAPDH活性为(0.337±0.019)。结论成功表达并纯化了具有较高生物学活性的flic-GapC融合蛋白,为S.aureus亚单位疫苗的研究奠定了基础。
- 赵达王鹤梁宏儒胡旭姜东君高佳滨尹辉陈为宏乔波朱战波
- 关键词：金黄色葡萄球菌鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白融合蛋白
- 金黄色葡萄球菌GapC蛋白与鼠伤寒沙门氏菌Flic融合蛋白的构建与免疫原性研究被引量：3
- 2014年
- 目的探讨金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)GapC蛋白与鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium,S.typhimurium)鞭毛蛋白融合蛋白的免疫保护作用。方法将纯化的Flic-GapC融合蛋白背部皮下接种免疫小白鼠,间隔3周免疫两次。应用间接ELISA方法测定小鼠血清中IgG抗体滴度;在二次免疫后2周,分离小鼠脾脏淋巴细胞,进行淋巴细胞增殖实验,利用Elispot方法检测IFN-γ和IL-4特异性分泌细胞;在二免后3周,用S.aureus Wood46株对免疫小鼠进行腹腔注射攻毒,观察1周并记录小鼠死亡数目。结果融合蛋白能够诱导小鼠产生特异性的免疫应答,二免后14d血清中IgG抗体滴度达到最高(1∶64 000),淋巴细胞刺激指数、分泌IFN-γ和IL-4的细胞数与对照组相比升高(P<0.05),对S.aureus的保护率达到70%。结论 Flic-GapC融合蛋白具有良好的免疫原性和免疫保护作用,可作为S.aureus的疫苗靶向进行深入研究。
- 赵达王鹤梁宏儒胡旭姜东君尹辉高佳滨陈为宏乔波朱战波
- 关键词：鞭毛蛋白融合蛋白免疫保护作用
- 一种菌影载体的构建方法
- 本发明提供了一种菌影载体，所述菌影载体包含锚定基因E’、巴氏杆菌OmpH基因、裂解盒（pBV220-E从阻遏蛋白到终止子的全部序列）和质粒载体pET28a。所述菌影载体中的裂解盒（ci857-E-T1T2）独立存在于pE...
- 朱战波姜东君于立权崔玉东王鹤梁宏儒赵达胡旭高佳滨陈为宏尹辉乔波陈楠楠
- 文献传递
- 鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白FliC的原核表达及纯化被引量：1
- 2012年
- 对鼠伤寒沙门氏菌的鞭毛蛋白FliC的基因进行克隆、鉴定和原核表达,为鞭毛蛋白佐剂作用的研究奠定基础。以鼠伤寒沙门氏菌8014菌株基因组DNA为模板,PCR扩增Flic基因,产物与T载体连接,经测序鉴定正确后与表达载体pQE30(+)连接构建重组表达质粒Flic-pQE30,将此重组质粒转化入表达宿主E.coli XL1-Blue菌株内抽提质粒,酶切鉴定正确后对转化菌株以IPTG进行诱导后,表达产物经镍离子亲和层析柱纯化后,进行SDS-PAGE和Western blot分析。测序结果显示,FliC为完整的编码区基因1 485 bp,编码495个氨基酸残基,蛋白相对分子质量约为56 kDa。经SDS-PAGE分析表明,以37℃、1 mM的IPTG诱导5 h,表达效果最好,诱导产物是与理论值相符的56 kDa的融合蛋白。经western-blotting检测,表达的重组蛋白FliC可与小鼠抗鼠伤寒沙门氏菌全菌体多抗血清反应得到清晰的目的条带,表明表达的重组蛋白具有良好的反应原性。成功进行了鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白Flic基因的克隆表达,为进一步研究其免疫佐剂作用奠定了基础。
- 王鹤梁宏儒胡旭赵达姜东君尹辉高佳滨陈为宏崔玉东朱战波
- 关键词：鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白克隆
- 黑龙江部分奶牛场大肠杆菌耐药性和耐药基因检测分析
- 大肠杆菌是环境中和动物体内的常在菌，致病性的大肠杆菌能够引起犊牛腹泻、肠毒血症和奶牛乳房炎等疾病。开展奶牛源和环境大肠杆菌耐药性调查，了解奶牛养殖场常用抗菌药物，监测牛群大肠杆菌和环境大肠杆菌耐药性的发展变化动态。有利于...
- 梁宏儒
- 关键词：大肠杆菌药敏实验耐药基因
- 文献传递
- 牛传染性鼻气管炎的分离鉴定和灭活条件的优化被引量：3
- 2013年
- 从疑似牛传染性鼻气管炎病毒感染的牛鼻腔中分离出1株病毒,通过PCR方法和MDBK细胞病变观察对其进行鉴定,确定该分离株为牛传染性鼻气管炎毒株。通过对该毒株的增殖条件和甲醛灭活条件的优化研究,为制备牛传染性鼻气管炎细胞源灭活疫苗提供参考依据。结果表明该毒株接毒18 h后病变细胞达70%开始收毒,病毒液在0.2%的甲醛37℃灭活36 h灭活效果最好。
- 梁宏儒高佳滨李安陈为宏乔波尹辉胡旭赵达姜东君朱战波
- 关键词：牛传染性鼻气管炎病毒PCR
- 一种菌影载体的构建方法
- 本发明提供了一种菌影载体，所述菌影载体包含锚定基因E’、巴氏杆菌OmpH基因、裂解盒（pBV220-E从阻遏蛋白到终止子的全部序列）和质粒载体pET28a。所述菌影载体中的裂解盒（ci857-E-T1T2）独立存在于pE...
- 朱战波姜东君于立权崔玉东王鹤梁宏儒赵达胡旭高佳滨陈为宏尹辉乔波陈楠楠
- 文献传递
- 无乳链球菌GapC蛋白和鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白的融合表达及纯化被引量：4
- 2013年
- 目的构建无乳链球菌(Streptococcus agalactiae,S.agalactiae)gapC基因和鼠伤寒沙门菌(Salmonella typhimu-rium,S.typhimurium)fliC基因的融合基因gapC-fliC,并在大肠杆菌中表达融合蛋白。方法应用PCR技术分别扩增鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白fliC基因和无乳链球菌gapC基因片段,通过柔性肽(Gly4Ser)2编码序列将二者串联并克隆至质粒pQE-30上,构建重组原核表达质粒fliC-gapC-pQE30,转化E.coli XL1-Blue,IPTG诱导表达,并进行SDS-PAGE分析。表达产物经镍离子亲和层析柱纯化后,进行Western blot分析及融合蛋白活性检测。结果重组表达质粒fliC-gapC-pQE-30经双酶切和测序证明构建正确;表达的融合蛋白FliC-GapC相对分子质量约95 000,表达量占菌体总蛋白的58%,主要以包涵体形式存在,且可与小鼠抗鼠伤寒沙门菌和抗无乳链球菌多抗血清发生特异性反应,具有较好的甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)活性。结论成功构建了重组表达质粒fliC-gapC-pQE-30,并在E.coli XL1-Blue中表达了融合蛋白,为下一步动物免疫保护性试验的研究奠定了基础。
- 王鹤梁宏儒胡旭赵达姜东君尹辉高佳滨陈为宏崔玉东朱战波
- 关键词：鞭毛蛋白重组融合蛋白质类
- 牛病毒性腹泻病毒E0和E2蛋白的融合表达及纯化被引量：6
- 2014年
- 目的在大肠埃希菌中融合表达牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)E0和E2基因,并进行纯化。方法采用RT-PCR法分别扩增BVDV BA株的E0和E2基因片段,通过酶切位点将二者串联并克隆至原核表达载体pET-28a上,构建重组表达质粒pET-28a-E0-E2,转化至大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达的融合蛋白E0-E2经镍离子亲和层析纯化后,进行Western blot分析。结果重组表达质粒pET-28a-E0-E2经双酶切和测序证明构建正确;表达的融合蛋白E0-E2相对分子质量约为68 500,表达量约占菌体总蛋白的20%,主要以包涵体形式存在;纯化的融合蛋白纯度达95%,可与牛病毒性腹泻病毒阳性血清发生特异性反应。结论在大肠埃希菌中融合表达了BVDV E0和E2蛋白,纯化后的融合蛋白纯度较高,为BVDV抗体ELISA检测方法的建立及新型疫苗的研制奠定了基础。
- 陈为宏周玉龙尹辉高佳滨梁宏儒乔波陈楠楠翟军军朱战波
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒E2蛋白纯化
- 牛多杀性巴氏杆菌外膜蛋白H的表达与纯化被引量：4
- 2013年
- 试验对多杀性巴氏杆菌外膜蛋白H(OmpH)基因进行克隆、鉴定,并在原核系统中表达。以多杀性巴氏杆菌(CVCC448)强毒株基因组为模板,扩增OmpH基因,连接T载体,经测序鉴定正确后与表达载体pET-28a连接构建重组表达质粒OmpH-pET28a,将此重组质粒转化入表达宿主E.coli BL21菌株内,抽提质粒,酶切鉴定正确后对转化菌株以IPTG进行诱导,表达产物通过镍离子亲和层析纯化,之后进行SDS-PAGE和Western blotting分析。结果显示,OmpH基因的编码区为978bp,编码326个氨基酸残基,融合蛋白分子质量约为37ku。Western blotting检测结果显示,表达的重组蛋白OmpH可与鼠抗多杀性巴氏杆菌全菌体多抗血清反应得到清晰的目的条带,表明表达的重组蛋白具有良好的免疫原性。多杀性巴氏杆菌OmpH基因的成功表达,为进一步研究其免疫作用奠定了基础。
- 胡旭梁宏儒姜东君赵达高佳滨陈为宏尹辉乔波朱战波
- 关键词：多杀性巴氏杆菌克隆
