杨静华
- 作品数：9 被引量：33H指数：2
- 供职机构：第四军医大学西京医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程更多>>
- 血管抑制素与肿瘤的生长
- 1999年
- 吴静杨静华樊代明
- 关键词：血管抑制素肿瘤血管生成分子结构生物学特性
- 胃癌多药耐药细胞SGC7901/VCR与亲本细胞SGC7901的比较蛋白质组学研究
- 目的研究胃癌多药耐药细胞 SGC7901/VCR 与亲本细胞 SGC7901的差异蛋白质组,为逆转多药耐药提供新的靶分子。方法采用蛋白质组学相关技术,如二维电泳、图像分析、质谱技术等方法,获得差异蛋白的肽质量指纹图,将所...
- 王新卢瑗瑗杨静华时永全兰梅翟惠虹樊代明
- 文献传递
- 新生血管抑制分子IP-10/Crg-2的cDNA克隆及序列鉴定被引量：1
- 1999年
- 目的： 拟获得编码ＩＰ１０ （ＩＦＮγｉｎｄｕｃｉｂｌｅ ｐｒｏｔｅｉｎ１０） 和Ｃｒｇ２ （ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ ｇｅｎｅ２） 的ｃＤＮＡ 序列。方法： 针对ＩＰ１０ 和Ｃｒｇ２ 的ｃＤＮＡ序列设计相应引物， 通过反转录ＰＣＲ技术， 分别从用ＩＦＮγ及ＴＮＦα处理的人成纤维细胞及Ｂａｌｂ／ｃ 小鼠肝脏中， 扩增出编码ＩＰ１０ 和Ｃｒｇ２ 的全基因序列， 并将其克隆入载体ｐＵＣ１９及ｐＧＥＭ３Ｚｆ （＋ ） 中， 通过酶切及序列测定鉴定重组载体。结果： 经序列测定证实， 重组载体含有正确地分别编码ＩＰ１０ 及Ｃｒｇ２ 的ｃＤＮＡ序列。结论： 获得的阳性克隆分别含有３０６ｂｐ 和３１４ｂｐ 的重组片段， 为进一步对其生物学活性和配体进行研究奠定了基础。
- 刘志国杨静华王海燕吴汉平李恩善樊代明
- 关键词：IP-10CDNA克隆肿瘤生物疗法
- 一步法从人血浆中制备天然血管生成抑制素被引量：12
- 2000年
- 血管生成抑制素 (angiostatin)能特异地抑制新生血管生成 ,有潜在的临床应用价值 .利用亲和层析从人血浆中纯化纤溶酶原 ,并在原位进行弹性蛋白酶有限消化产生angiostatin片段 ,经过洗涤 ,然后用 0 2mol/L 6 氨基己酸溶液将angiostatin特异性洗脱 .此改进使整个制备过程变得简单、快速和高效 .
- 李福洋何鹏刘新平张英起杨静华樊代明药立波fmmu.edu.cn
- 关键词：血管生成抑制素抗肿瘤转移血浆
- CXC趋化因子CRG-2真核表达载体的构建及表达被引量：1
- 2001年
- 刘志国杨静华安华章吴汉平王海燕韩者艺樊代明
- 关键词：肺癌细胞转染趋化因子CXC真核表达载体
- 小鼠原代淋巴细胞增殖过程中RNA编辑酶ADAR1的变化被引量：14
- 2002年
- 目的 探索淋巴细胞增殖时RNA编辑酶ADAR1的变化。方法 ①ADAR1底物的合成 ,利用含有α -tropomyosin基因的质粒pBluescriptSK(+/- ) ,体外转录的方法 ,合成双链RNA底物 ,掺入α - 3 2 P -ATP标记 ;②分离小鼠脾脏和淋巴结内的淋巴细胞 ,加入IL - 2 /ConA刺激淋巴细胞增殖 ,于不同的时间点收取细胞 ,裂解后用合成好的底物测定ADAR1的活性 ;③应用薄层色谱 ,观察细胞裂解物作用后的RNA中有多少腺嘌呤核苷变成了次黄嘌呤核苷 ;④用MTT法测定细胞的增殖率。结果 加入IL - 2 /ConA的淋巴细胞与未加入的比较 ,前者于 30h起ADAR1的活性升高 ,72h达高峰 ,其变化与细胞增殖曲线相一致。结论 首次发现淋巴细胞增殖过程中ADAR1的活性升高 。
- 赵青川张德新罗晓星苏映军杨静华
- 关键词：RNA编辑酶ADAR1小鼠
- CXC趋化因子CRG-2的表达及其在体内对Lewis肺癌生长的影响被引量：1
- 2001年
- 刘志国杨静华安华章吴汉平王海燕韩者艺樊代明
- 关键词：LEWIS肺癌CXC趋化因子肺癌基因表达
- 重组小鼠MIG趋化因子的高效真核表达及免疫活性测定被引量：2
- 2006年
- 目的克隆小鼠CXC趋化因子干扰素-γ诱生单核因子(MIG)并在杆状病毒表达系统中进行高效表达,进而对MIG蛋白进行纯化和活性鉴定。方法从小鼠脑组织中用RT-PCR的方法扩增出小鼠MIG基因的全长cDNA,在克隆入Bac-to-Bac杆状病毒表达载体后在High-Five昆虫细胞中进行分泌型表达;表达产物经S-Sepharose进行了纯化并进行了生化鉴定;最后对纯化的重组小鼠MIG蛋白进行了钙离子内流诱发试验和淋巴细胞趋化测定以鉴定其免疫活性。结果成功克隆了小鼠MIG基因并在Bac-to-Bac杆状病毒表达系统中进行了高效表达,其表达蛋白主体相对分子质量约为15 000;经过单步S-Sepha-rose纯化法就可获得纯度为85%以上的重组小鼠MIG蛋白,产量为10 mg/L;该蛋白该纯化蛋白在体外具有诱导小鼠T淋巴细胞钙离子内流和吸引、趋化小鼠脾细胞的活性。结论小鼠MIG蛋白可在杆状病毒表达系统中高产量分泌表达并可用S-Sepharose纯化法直接纯化;小鼠重组MIG蛋白具有激活、趋化淋巴细胞的生物活性;rmMIG纯化蛋白的大量制备为进一步研究小鼠MIG蛋白在炎症、免疫器官的成熟和其它疾病中的功能和作用提供了有利的工具。
- 张德新王钧杨静华Reuven Rabinovici樊代明
- 关键词：MIGCXC趋化因子杆状病毒趋化
- 鼠源性血管抑素基因转染对人肝癌细胞体内致瘤力的影响及新血管抑制作用被引量：2
- 2001年
- 目的 研究血管抑素血管他丁 (angiostatin)基因转染人肝癌细胞系HCC772 1,对肿瘤细胞体外生长、周期分布、形态以及体内致瘤力的影响 ,探讨血管抑素的作用机制。方法 应用定向克隆技术构建鼠源性血管抑素血cDNA基因真核表达载体 pcDNA3 .1( + ) angio ,酶切鉴定和测序。采用脂质体基因转染技术将真核表达载体导入人肝癌细胞系HCC772 1,新霉素G4 18筛选抗性克隆 ,设置转染空载体细胞为阴性对照和未转染细胞为空白对照。通过RNA点杂交和流式细胞荧光免疫检测血管抑素的表达 ,测定细胞生长曲线 ,计算细胞倍增时间 ,流式细胞仪检测细胞周期分布。建立动物模型 ,观察转染前后肿瘤细胞致瘤力的改变。免疫组化检测肿瘤组织微血管密度 (MVD)和血管抑素体内表达。结果 成功构建带有碱基序列正确的血管抑素基因片段的重组真核表达载体 pcDNA3 .1( + ) angio。分别转染脂质体 /pcDNA3 .1( + ) angio和脂质体 /pcDNA3 .1( + )的实验组 ,HCC772 1肝癌细胞和阴性对照组经G4 18筛选 ,3 0d后均得到稳定的抗性细胞克隆 ,空白对照组在筛选 1周后全部死亡。实验组HCC772 1细胞在体内和体外均表达目的蛋白 ,而对照组细胞中无表达。与对照组相比 ,虽然实验组细胞在体外的生长速度和细胞周期分布未发生明显改变 ,但在体?
- 吴静张德新杨静华樊代明
- 关键词：血管生成血管抑素基因转染肝癌细胞肿瘤抑制
