杨桂红
- 作品数：40 被引量：67H指数：5
- 供职机构：第三军医大学大坪医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划重庆市科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人表皮干细胞体外诱导分化为汗腺样上皮细胞的研究被引量：4
- 2017年
- 目的探讨体外人表皮干细胞向汗腺样上皮分化的影响条件,并对诱导成的管腔样结构进行鉴定。方法将人表皮干细胞接种到复方壳多糖真皮基质上和胶原凝胶中,加入不同浓度的表皮生长因子(EGF),体外垂直震荡培养,进行三维培养和定向诱导分化,采用HE染色、免疫荧光等手段观察表皮干细胞定向分化为汗腺样上皮的条件及形态、表型改变。结果 15~20ng/mL的EGF可诱导组织工程真皮上的表皮干细胞向真皮内生长并可出现腺样结构。HE染色该结构,显示为单层细胞连接为环状,中间见明显的腔隙,细胞质嗜酸性。利用CK19荧光染色,在激光共聚焦显微镜下观察到细胞团中央有管腔结构,同时此结构表达CK18、癌胚抗原(CEA)。结论体外培养的人表皮干细胞接种在组织工程真皮上,在一定浓度的EGF诱导条件下,能形成管腔样结构,该管腔样结构在形态学、组织学上与在体汗腺分泌部细胞相似。
- 王元元杨桂红杨涛唐书谦伍津津
- 关键词：表皮干细胞分化表皮生长因子
- 高敏度小张力膜状生物材料力学检测装置改进被引量：2
- 2010年
- 目的改进本实验室与重庆大学联合研制的高敏度小张力膜状生物材料力学检测装置并测试其准确度及稳定性。方法①将原仪器液-气压力加载系统改为气体加载系统;②将夹具升级为可轴向运动,夹持稳固、精确,可视的夹持系统;③更换为高精度、量程为20kPa的传感器,并对系统软件内参数作相应调整;④对仪器准确度、稳定性进行测试。结果①成功地将原仪器改进成外形小巧,夹持可靠,试件变化可视,操作方便、快捷的装置。②准确度测试结果:引用误差为-0.30%～+0.29%之间。③稳定性测试:不同日期5个不同时段测得同一标准品的数据[分别为(18723±16)、(18705±5)、(18720±23)、(18731±15)、(18733±20)Pa]之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论经改进后仪器能准确测量出组织工程皮肤等膜状生物材料的抗张强度。
- 张才茂伍津津鲁元刚杨涛杨桂红唐书谦
- Wnt-1重组腺病毒的构建及其对人表皮干细胞分化的影响
- 2008年
- 目的构建Wnt-1重组腺病毒，并观察Wnt-1对人表皮干细胞分化相关蛋白表达的影响。方法连接穿梭质粒与骨架质粒，构建重组腺病毒；扩增后感染人表皮干细胞，检测其3种角蛋白和基质金属蛋白酶（MMP）-2的表达。结果重组质粒酶切后可得到30kb和4．5kb两条特异性条带；人表皮干细胞感染重组腺病毒后，聚合酶链反应（PCR）与绿色荧光蛋白均指示Wnt-1基因的表达，且角蛋白10表达变为阳性；角蛋白18表达增强；角蛋白19表达减弱；细胞培养基中MMP-2浓度由（-16．25±2．40）μg/L升高至（714．88±30．45）μg/L（t=58．45，P〈0．01）。结论Wnt-1具有促使人表皮干细胞向腺样上皮细胞分化的趋势。
- 李元朝伍津津张一杨涛杨桂红王兵强
- 关键词：WNT-1腺病毒载体表皮干细胞
- 不同代次角质形成细胞构建组织工程皮肤的增殖分化能力比较
- 2013年
- 目的比较三维条件下不同代次角质形成细胞构建的表皮形态及增殖分化情况。方法采用不同代次角质形成细胞构建组织工程皮肤，通过苏木精-伊红（HE）和高碘酸-希夫（PAS）染色，观察各组组织工程皮肤的结构形态；并利用角蛋白CK1／CK10、CK5／CK14、细胞增殖核抗原Ki-67免疫组织化学染色，比较各组组织工程皮肤表皮的增殖分化能力。结果不同代次角质形成细胞构建的组织工程皮肤都有明显的表皮真皮结构。1、2代较其他代次分层情况好，2代表皮层厚度明显高于其他代次（P〈0．05）。加Ⅳ型胶原组的表皮真皮间黏附的紧密程度高于未加Ⅳ型胶原组，Ⅳ型胶原对表皮的厚度影响不大（P〉0．05）。Ⅳ型胶原组PAS染色阴性，说明单独加Ⅳ型胶原不能形成基底膜结构。2代角质形成细胞Ki-67增殖系数接近正常皮肤，其余各代次角质形成细胞的增殖系数逐渐减少（P〈0．05）。CK1／CK10、CK5／CK14在1、2代皮肤中阳性表达明显，其余代次对于两种角蛋白的表达并不明显。结论3代以前角质形成细胞有更好的增殖分化能力，更适合作为组织工程皮肤的种子细胞。
- 徐巧瑜杨桂红杨涛王端鲁元刚伍津津
- 关键词：角质形成细胞组织工程皮肤CK10
- 灌注式培养复方壳多糖组织工程皮肤的营养条件
- 2015年
- 目的探索灌注培养条件下不同营养浓度对复方壳多糖组织工程皮肤形态结构及细胞凋亡的影响,为进一步优化灌注营养条件提供依据。方法常规构建组织工程皮肤后,将复方壳多糖组织工程皮肤分别置于浓度为40%和80%的培养基中进行灌注式培养,分别于第5天及第10天取材进行HE染色观察细胞形态,利用TUNEL染色检测细胞凋亡情况。结果复方壳多糖组织工程皮肤呈典型双层结构,表真皮界限清晰,表皮细胞各层次界限不清楚,且均可见明显的角化过度;真皮区成纤维细胞成梭形,排列有序。40%的培养基培养第5天时真皮和表皮中凋亡细胞数显著高于同时间80%培养基的凋亡细胞数(P<0.05)。80%的培养基培养第10天表皮中凋亡细胞数显著高于培养第5天的凋亡细胞数(P<0.05)。结论灌注式培养可用于组织工程皮肤的培养,80%培养基浓度较40%培养基浓度培养效果更佳。
- 王端温旭红邱伟明杨桂红闫洪涛唐辉伍津津
- 关键词：营养浓度凋亡
- 外源性人端粒酶逆转录酶基因转染对正常人毛乳头细胞的影响被引量：4
- 2008年
- 目的研究外源性人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)基因转染对体外培养正常人毛乳头细胞的影响。方法采用脂质体转染法,将hTERT基因导入体外培养的正常人毛乳头细胞,经G418筛选得到阳性克隆,连续传代培养。检测转染细胞内hTERT基因的整合和表达情况,初步分析转染细胞的生物学特性。结果转染后获得1个阳性细胞克隆,扩大培养后细胞生长良好,传代次数增加,已连续传至35代。检测证实转染细胞内hTERT基因在DNA、mRNA和蛋白质水平均有表达,且此转染细胞具有体外培养正常毛乳头细胞的生物学特性。结论外源性hTERT基因转染可以延长体外培养正常人毛乳头细胞的寿命且可保持其正常的生物学特性。
- 刘官智伍津津朱堂友鲁元刚杨亚东杨桂红
- 关键词：毛乳头细胞端粒酶人端粒酶逆转录酶转染
- 肉桂醛对恶性黑素瘤A375细胞增殖和分泌VEGF的影响被引量：10
- 2012年
- 目的研究肉桂醛对体外培养的人恶性黑素瘤细胞株A375增殖和分泌血管内皮细胞生长因子(vascularendothelial growth factor,VEGF)的影响。方法 A375细胞在体外培养扩增后,在培养基中分别加入10、20、40μmol/L肉桂醛,分别在培养24、48、72 h MTT法检测细胞活性。同时收集各个浓度肉桂醛处理不同时相的培养液样本,双抗体夹心ELISA法测定其中VEGF分泌量。结果 10μmol/L肉桂醛作用24 h即能抑制A375细胞增殖,10、20、40μmol/L肉桂醛间的抑制强度具有统计学意义(P<0.01)。40μmol/L的肉桂醛作用72 h后细胞增殖抑制率最高,达(88.91±4.5)%。随肉桂醛作用时间延长,A375细胞分泌VEGF的量逐渐减少,72 h后各浓度间的抑制作用具有统计学意义(P<0.01)。40μmol/L肉桂醛作用72 h后A375细胞分泌的VEGF含量最低,为9.55 pg/ml。结论肉桂醛能抑制人黑素瘤细胞增殖和VEGF的分泌,其抑制强度与药物浓度和作用时间成正比。
- 周凌鲁元刚杨桂红杨涛伍津津
- 关键词：肉桂醛黑素瘤细胞血管内皮细胞生长因子
- 准静态平面均匀流场条件下游离皮片体外培养效果评价
- 2019年
- 目的观察并评价准静态平面均匀流场不同灌注频次对游离人皮肤标本的培养效果。方法将4 mm游离包皮皮片置于准静态平面均匀流场中,按随机数字表法分为2组:实验组采用高频次灌注,对照组采用低频次灌注;培养12 d后进行PAS染色、VG染色观察基底膜、细胞形态及真皮胶原纤维的变化情况;采用HE染色,TUNEL法观察2组皮片中细胞数目及细胞凋亡的变化情况;利用溶解氧测量仪模拟测量培养基中溶解氧的含量。结果肉眼观察见对照组皮片呈坏死特征性变化;PAS、VG染色结果显示对照组表真皮严重分离,基底膜结构消失,胶原纤维堆积;实验组染色细胞数为(249.35±13.00),显著高于对照组[(37.50±9.18),P<0.001];实验组细胞凋亡率为(9.91±3.89)%,显著低于对照组[(59.73±8.04)%,P<0.001];高频次灌注溶解氧水平高于低频次灌注。结论准静态平面均匀流场条件下,高频次灌注对人皮肤游离标本的体外培养作用更佳。
- 闫洪涛唐辉邱伟明宋林娟杨桂红伍津津
- 关键词：体外培养组织形态学
- 人皮肤鳞状细胞癌体外三维模型的建立及高侵袭性鳞癌细胞的生物学评价
- 2013年
- 目的建立人皮肤鳞癌细胞体外三维培养模型,分离高侵袭性细胞亚群,并比较其生物学特性。方法利用复方壳多糖组织工程皮肤,成功建立人皮肤鳞癌细胞体外三维培养模型,消化分离得到高侵袭性鳞癌细胞亚群,比较肉桂醛和干扰素作用后对不同侵袭特性细胞亚群的增殖抑制效果,同时比较不同侵袭特性细胞亚群在裸鼠中成瘤效果的不同。结果不同浓度的肉桂醛和干扰素对皮肤鳞癌细胞的增殖抑制差异有统计学意义(P<0.01),不同侵袭特性的皮肤鳞癌细胞亚群之间的增殖抑制差异也有统计学意义(P<0.01),另外,两种不同侵袭特性的细胞亚群的成瘤特性差异有统计学意义(P<0.01)。结论成功建立人皮肤鳞癌体外三维培养模型,同时运用此种三维培养模型能够筛选得到侵袭特性更强的细胞亚群。
- 杨晓鲲杨亚东杨桂红唐书谦伍津津
- 关键词：组织工程皮肤鳞状细胞
- 微载体技术高效扩增人毛乳头细胞的培养被引量：1
- 2007年
- 目的探讨用微载体培养技术进行人毛乳头细胞高效扩增的培养方法，以满足对毛乳头细胞的大量需求。方法采用Cytodex-3为培养载体进行人第3代毛乳头细胞的微载体培养，定期观察培养液颜色的变化，采用苔盼蓝染色进行活细胞计数，倒置显微镜下观察生长状况。将微载体上消化的细胞进行传统培养，观察细胞生长情况，甲苯胺蓝染色，细胞免疫组织化学染色。结果培养至第12天，微载体上细胞数量最多，并且细胞聚集成团，类似毛乳头样结构。利用这时的细胞进行普通培养，仍然表现出凝集性生长特点，细胞呈异染性，免疫组织化学染色阳性。结论利用Cytodex-3培养可以收获大量具有生物活性的毛乳头细胞。
- 张教扬伍津津鲁元刚朱堂友杨桂红
- 关键词：毛乳头细胞微载体免疫组织化学染色
