李雪梅
- 作品数：6 被引量：16H指数：3
- 供职机构：中国科学院研究生院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国际科技合作与交流专项项目国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 小鼠四倍体半克隆胚胎发育研究被引量：2
- 2005年
- 半克隆(Semi-Cloned)胚胎是通过注射体细胞核到未去核的卵母细胞中产生的。在半克隆胚胎中,体细胞被用来作为精子的替代物。然而,由于异常的染色体分离,构建的半克隆胚胎在激活后形成了非整倍体而导致胚胎发育受到严重影响,不能发育到期。本研究通过抑制小鼠半克隆胚胎在激活过程中染色体数目减半,避免非整倍体胚胎形成,研究四倍体半克隆(TetraploidSemi-cloned,TSC)胚胎的发育和体细胞核的掺入对胚胎发育的影响。结果显示,TSC胚胎的体外发育率显著高于二倍体半克隆胚胎,与正常受精卵及孤雌激活对照无显著性差异,但TSC胚胎的细胞数在桑椹胚和囊胚期比正常二倍体受精胚胎和孤雌激活胚胎少。通过Oct-4染色发现,TSC胚胎囊胚期内细胞团(InnerCellMass,ICM)细胞很少或者没有。移植63个四倍体半克隆胚胎到3只假孕母鼠体内,得到20个胎盘,但没有得到胎儿。组蛋白乙酰化和DNA甲基化检测显示,部分TSC胚胎在囊胚期没有形成正常受精胚胎在ICM和滋养外胚层(Trophectoderm,TE)之间的差异分布。TSC胚胎的基因表达不依赖于细胞分裂次数而依赖于发育时间。虽然TSC胚胎避免了二倍体半克隆胚胎形成非整倍体现象,但由于TSC胚胎没有ICM细胞或ICM细胞很少,所以只能形成胎盘而不能形成胎儿。本实验第一次较为全面地研究了TSC胚胎的发育,同时也为研究体细胞核再程序化、基因打靶技术提供了一种新的途径。
- 丁晨晖焦丽红陈欣洁王二耀于洋赵春丽侯晓军李雪梅季维智王柳
- 关键词：四倍体胚胎发育非整倍体
- 核移植方法和活化方法对小鼠体细胞克隆胚胎发育的影响被引量：3
- 2007年
- 用卵丘细胞为核供体进行小鼠体细胞克隆,成功获得了一批成年体细胞克隆小鼠.为探讨不同核移植方法和重构胚活化方法对小鼠克隆胚发育的影响,用B6D2F1小鼠的卵丘细胞和卵母细胞作为供、受体进行核移植实验,采用电融合和细胞质内直接显微注射的方法进行核移植,并采用电脉冲、乙醇处理、氯化锶处理和电脉冲联合氯化锶4种不同方法对重构胚进行活化,对克隆胚胎的体外及体内发育进行研究.结果显示,利用显微注射法获得重构胚胎的工作效率(90.7%)显著高于融合法获得重构胚胎的工作效率(49.7%).乙醇、电脉冲和氯化锶3种激活方法都可以诱导孤雌胚发育到囊胚,但前二者处理的胚胎的囊胚发育率(52.4%,54.2%)显著低于后者(76.9%).10 mmol/L氯化锶处理6h活化效果最好.融合法获得的重构胚经氯化锶或者电脉冲联合氯化锶激活后,囊胚发育率(9.5%,8.6%)显著高于单纯电脉冲激活(2.6%),而乙醇活化的重构胚没有发育到囊胚阶段.用显微注射法经氯化锶激活获得的重构胚的囊胚发育率最高(16.6%).注射法和融合法获得的重构胚胎经氯化锶激活后进行胚胎移植,都获得了发育到期的体细胞克隆小鼠,发育到期率分别为2.5%和1.4%.结果表明,两种核移植方法对B6D2F1小鼠重构胚胎的早期发育能力有一定影响,用这两种方法都可以获得体细胞克隆小鼠;不同活化方法对重构胚胎的体外发育能力有显著影响,在上述4种激活方式中,氯化锶处理对克隆胚的激活效果最好.
- 王二耀于洋李雪梅焦丽红王柳
- 关键词：体细胞克隆核移植显微操作
- 两性小鼠核移植胚胎干细胞系的建立及其在胚胎干细胞多能性评估中的研究
- 2008年
- 治疗性克隆的安全性与风险性是阻碍治疗性克隆发展的关键环节之一.由于受到社会伦理问题的限制,人胚胎干细胞的多能性检测只能通过畸胎瘤的方式鉴定,与传统的小鼠生殖系嵌合鉴定方式不同.但是两种多能性检测方式之间的区别还不清楚.本研究利用遗传突变两性小鼠心肌成纤维细胞作为核移植供体细胞,构建核移植胚胎,经过体外培养获得克隆囊胚,建立核移植胚胎干细胞系.对胚胎干细胞系的鉴定结果表明,两性小鼠核移植胚胎干细胞系表达所有小鼠胚胎干细胞系多能性及特异的分子标记,如碱性磷酸酶活性,Oct4,Nanog,SSEA-1等,干细胞注射到免疫缺陷小鼠(SCID)体内能够形成含有三胚层分化附属物的畸胎瘤组织,证明两性小鼠核移植胚胎干细胞系具有多能性.但通过囊胚注射的方式获得的二倍体嵌合小鼠经过交配不能获得生殖系嵌合的小鼠,因而两性小鼠核移植胚胎干细胞系并不具有全能性,说明体内形成三胚层分化附属物的畸胎瘤组织并不能替代传统的生殖系嵌合,提示在人治疗性克隆胚胎干细胞系多能性鉴定中,仍然需要更多、更严格的标准,进而最大程度地降低治疗性克隆临床应用的风险性.
- 范勇佟曼赵春丽丁晨晖郝捷吕卓代相鹏海棠李雪梅姚汝强于洋李赞东王柳ALICE Jouneau周琪
- 关键词：体细胞核移植胚胎干细胞治疗性克隆
- 完整的供体细胞膜及供体胞质对小鼠体细胞克隆胚发育的影响被引量：7
- 2007年
- 利用显微注射和电融合的方法都可以成功地获得体细胞克隆小鼠,由于电融合法操作耗时,融合率低,因而大多数克隆小鼠是采用注射方法。而注射法需要将供体细胞核从细胞中分离出来,此分离操作有可能导致对DNA的损伤,曾有人使用直径较粗的注射管进行完整的供体细胞注射,这种方法操作相对简单而且对供体核没有损伤。为了研究这种方法在小鼠核移植中是否适用,本实验使用完整的小鼠卵丘细胞作供体,进行显微注射,结果显示,完整的卵丘细胞注入卵母细胞后,无论在1小时或者6小时激活,大部分的重构胚在2细胞期碎裂,而去掉细胞膜的供体体细胞核注入卵母细胞后,重构胚可以卵裂并进一步发育。卵母细胞去核后不注射供体也发生碎裂,大部分的孤雌胚(不去核)在完整的卵丘细胞被注入后同样发生碎裂。在供体卵丘细胞刚破膜后即被注入卵胞质和供核被充分剥离后注入两种情况下获得的重构胚的体外发育中,前者发育各期的比率显著低于后者。这些结果说明完整的卵丘细胞膜阻碍了卵胞质对体细胞核的重编程作用,造成碎裂;注入卵胞质的供体质膜和胞质成分影响了克隆胚的体外发育。
- 王二耀于洋李雪梅焦丽红周琪王柳
- 关键词：核移植小鼠卵丘细胞
- 小鼠母源因子对早期胚胎发育的影响被引量：4
- 2006年
- 在脊椎动物发育过程中,卵母细胞要经历MⅡ期停滞、受精、早期胚胎发育的启动、胚胎基因组的转录激活、并指导完成个体的发育过程。同时,核移植过程中,分化的细胞核在去核的卵母细胞中能够重编程到胚胎早期的状态并能完成个体的发育过程。在这些发育过程中母源因子都发挥了极其重要的作用。在小鼠胚胎发育研究中发现,小鼠的基因组激活发生在2-细胞期,这一时期标志着合子的发育由卵母细胞控制向胚胎控制的过渡,期间发生一系列复杂的生化过程。体外培养的小鼠胚胎的发育阻断也易发生在2-细胞时期。因此对卵母细胞及早期胚胎母源因子的研究,将有利于了解早期体外培养胚胎和克隆胚胎发育失败的原因,为提高体外培养和克隆胚胎发育的成功率提供理论基础。
- 赵春丽焦丽红李雪梅陈新郝艳红孙悍军王柳
- 关键词：早期胚胎发育重构胚重编程
- 卵母细胞老化对小鼠体细胞克隆胚发育的影响
- ＜正＞本研究就小鼠卵母细胞的卵龄对克隆胚的体外发育能力的影响进行了检测, 以确定最佳的取卵时间以及取卵后进行核移植操作的可耐受的时间。采用PMSG 和hCG超排B6D2F1雌鼠。在体内老化实验中,分别于注射hCG后13、...
- 王二耀李雪梅焦丽红王柳周琪
- 文献传递
