李晓东
- 作品数：66 被引量：243H指数：10
- 供职机构：解放军第三〇二医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学自动化与计算机技术更多>>
- HBV基因组A1846T变异对病毒复制力及核心启动子活性的上调作用研究
- [目的]评价乙型肝炎病毒(HBV)基因组核苷酸(nt)A1846T变异对体外病毒复制力及核心启动子(CP)转录活性的影响。[方法]385例研究对象包括116例慢乙肝中度(CHB-M)患者,123例慢乙肝重度(CHB-S)...
- 江玲许智慧刘妍李晓东姚伟明李韦杰戴久增辛绍杰徐东平
- 文献传递
- 793例轻中度、重度慢乙肝及慢加急性肝衰竭患者HBV基本核心启动子/前C区突变特点及临床意义分析
- 目的:分析大样本不同病程的慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染患者HBV基本核心启动子(BCP)/前C区突变和基因型特点及与疾病进展的关系。方法:提取325例慢乙肝轻中度(CHB-M)患者、170例慢乙肝重度(CHB-S)患者...
- 刘妍许智慧任晓强李晓东王琳辛绍杰王慧芬徐东平
- 关键词：前C区突变慢加急性肝衰竭
- 文献传递
- 乙型肝炎病毒反转录酶区rtI233V变异的演变及病毒学特点分析被引量：11
- 2015年
- 目的分析乙型肝炎病毒(HBV)反转录酶区rtI233V变异的演变规律及其与阿德福韦酯(ADV)耐药的相关性。方法分析9830例慢性HBV感染者血清样本中HBV rtI233V变异的检出率。选择其中2例代表性患者,动态收集血清样本,扩增HBV RT基因并克隆测序(>20个克隆/样本),观察rtI233V变异的演变过程。构建pTriEx-HBV(C)1.1倍野生株和3种变异株(rtI233V、rtN236T、rtI233V+rtN236T)复制子,瞬时转染HepG2肝癌细胞,分别加入不同浓度的拉米夫定(LAM)、ADV、恩替卡韦(ETV)和替诺福韦(TDF)。采用实时荧光定量PCR法检测不同浓度药物作用后细胞培养上清中HBV DNA的水平,分析变异病毒复制力与表型耐药的变化特点。结果9830例慢乙肝患者血清样本中共检出rtI233V位点变异28例,检出率0.28%,其中rtI233V单独变异19例,与rtN236T等经典耐药变异联合出现9例。该变异的检出患者均有ADV治疗史,其中16例(57.1%)接受ADV单药治疗6个月以上,12例(42.9%)接受包括ADV的多药序贯联合治疗1年以上。病毒复制力与表型耐药分析显示,rtI233V变异株的复制力与野生株接近,rtN236T变异株的复制力较野生株显著降低;rtI233V变异株对LAM、ADV、ETV和TDF均敏感,rtI233V+rtN236T联合变异对耐药性的影响不大,但rtI233V变异可明显恢复rtN236T变异株受损的复制力。结论rtI233V位点变异与ADV应答不佳相关,虽不直接降低病毒对ADV的敏感程度,但可增加经典ADV耐药病毒株的复制力,是一种复制力补偿变异。
- 叶晓玲刘妍陈容娟许智慧李晓东叶海燕唐振祥程书权徐东平
- 关键词：肝炎病毒乙型阿德福韦酯DNA复制病毒
- 乙型肝炎病毒逆转录酶区N236T单独突变与N236T+A181T联合突变患者临床特征的比较被引量：7
- 2010年
- 目的了解乙型肝炎病毒(HBV)逆转录酶区N236T单独突变患者与逆转录酶区N236T+A181T联合突变患者核苷(酸)类药物应用情况和病毒学特点的异同。方法对发生HBV逆转录酶区N236T单独突变与逆转录酶区N236T+A181T联合突变的慢性乙型肝炎患者的血清HBsAg、HBVDNA和丙氨酸转氨酶(ALT)水平进行检测和HBV基因分型,并对所有患者的核苷(酸)类药物治疗史进行回顾性调查。结果逆转录酶区N236T单独突变组与逆转录酶区N236T+A181T联合突变组相比较,两者血清HBsAg水平的差异无统计学意义(P=0.9755),但后者血清HBVDNA(P=0.0014)和ALT(P=0.0032)水平高于前者。此外,C型较B型容易发生rtN236T+rtA181T联合突变(40%vs20.45%,P=0.0235),由拉米夫定换用阿德福韦的治疗方式容易引起病毒突变。结论 HBV逆转录酶区N236T单独突变患者与逆转录酶区N236T+A181T联合突变患者在引起突变的核苷(酸)类药物的使用情况上存在一致性(拉米夫定换用阿德福韦),但基因型构成和血清病毒学指标存在明显差异。
- 赵攀徐东平李晓东李乐钟彦伟
- 关键词：乙型肝炎病毒逆转录酶区突变阿德福韦
- SSH技术筛选β干扰素真核表达载体转染细胞的下调基因
- 2006年
- 筛选β-干扰素质粒转染下调相关基因。以β-干扰素表达质粒pcDNA3.1(-)-IFNβ转染HepG2细胞,同时以空载体pcDNA3.1(-)为对照;制备转染后的细胞裂解液,从中提取mRNA并合成cDNA,经RsaI酶切后将来自pcDNA3.1(-)转染的cDNA分成两组,分别与两种不同的接头adaptor1和adaptor2衔接,再与来自pcDNA3.1(-)-IFNβ转染的cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR,将产物与T/A载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆PCR后进行测序及同源性分析。成功构建人β-干扰素质粒转染下调相关基因差异表达的cDNA。所获得的50个克隆中,随机挑选37个克隆均含有插入片段,将这些克隆进行序列测定,并通过生物信息学分析获得其全长基因序列,结果共获得22种编码基因,其中3种为未知功能的基因。筛选到的cDNA序列,包括与细胞生长调节、物质代谢和细胞凋亡密切相关的一些蛋白编码基因。
- 钟彦伟成军曲建慧张黎颖郭江李晓东
- 关键词：Β-干扰素下调
- HBcrAg在慢性乙型肝炎自然进程及预判肝纤维化逆转中的应用价值被引量：12
- 2019年
- 目的评价HBV核心相关抗原(HBcrAg)预测慢性乙型肝炎(CHB)肝纤维化分级及逆转的临床应用价值。方法选取2013年1月-2015年12月解放军第三〇二医院、郑州大学第一附属医院和福州市传染病医院收治的CHB患者,其中HBeAg阳性69例、HBeAg阴性69例。109例Ishak评分≥3的患者接受恩替卡韦治疗72周。收集基线及72周治疗后两次肝活组织标本和血清,检测组织病理及HBcrAg水平。符合正态分布的计量资料两组间比较采用t检验;不符合正态分布的计量资料两组间比较采用Wilcoxon秩和检验。计数资料组间比较采用χ2检验。相关性分析采用Spearman相关分析法。采用受试者工作特征曲线分析HBcrAg对肝纤维化的诊断价值。结果在HBeAg阳性CHB患者中,血清HBcrAg水平与肝纤维化进程呈负相关(r=-0. 342,P=0. 004);在HBeAg阴性CHB患者中,血清HBcrAg水平与肝纤维化进程及炎症改变均呈正相关(r值分别为0. 439、0. 437,P值均<0. 001)。HBeAg阳性患者血清HBcrAg预测晚期肝纤维和肝硬化的受试者工作特征曲线下面积(AUC)分别为0. 705、0. 701(P值均<0. 05),HBeAg阴性患者血清HBcrAg预测轻微肝纤维化、明显肝纤维化、晚期肝纤维化和肝硬化的AUC分别为0.815、0.815、0.726、0. 675(P值均<0. 05)。经抗病毒治疗后,基线血清HBcrAg高表达组较低表达组更易发生肝纤维化逆转(53. 7%vs 32. 7%,X^2=4. 888,P=0. 027)。肝纤维化逆转患者血清HBcrAg下降差值高于未逆转患者[1. 5(0. 4～3. 2) log IU/ml vs 0. 8(0. 1～1. 8) log IU/ml,Z=-1. 724,P=0. 042]。结论血清HBcrAg可作为预测CHB肝纤维化分级和判定肝纤维化逆转的一项有临床应用价值的新标志物。
- 孙超常秀娟李晓东李晓东
- 关键词：肝硬化生物学标记
- 应用噬菌体展示技术筛选干扰素β基因启动子DNA结合蛋白的基因被引量：2
- 2006年
- 目的筛选干扰素β(IFN-β)启动子DNA结合蛋白的基因,探讨IFN-β基因调节的分子生物学机制。方法应用噬菌体展示技术,以IFN-β启动子DNA的聚合酶链反应(PCR)产物作为固相筛选分子,对噬菌体人肝细胞cDNA文库进行5轮“吸附-洗脱-扩增”的生物筛选过程,噬斑PCR扩增后,对所筛选克隆进行DNA序列测定和生物信息学分析。结果噬菌体经富集后,随机挑选52个克隆,序列测定后经过同源性搜索,确定与IFN-β启动子具有结合作用的肝细胞蛋白有6种,包括谷胱甘肽S-转移酶(GST),淀粉酶突变体蛋白,锌指蛋白等与细胞发育和代谢有关的蛋白。结论IFN-β启动子DNA与肝细胞中多种蛋白类型结合,为研究IFN-β基因在肝细胞中的表达调控奠定了基础。
- 钟彦伟吴顺华成军徐东平戴久增高学松曲建慧王巧侠李晓东郭风劲郭江纪冬
- 关键词：噬菌体表面展示技术干扰素Β启动子
- DNA序列测定法与实时荧光PCR法检测YMDD突变结果的比较被引量：5
- 2008年
- 目的比较DNA序列测定法与实时荧光法检测YMDD突变的结果,并对除YMDD突变之外的耐药相关基因突变及其意义进行讨论。方法收集89例慢性乙肝患者的92份血清样本,均用实时荧光PCR法做YMDD突变检测。采用巢式PCR法扩增HBV反转录酶(RT)基因,对PCR产物进行DNA双向测序,采用NTI软件比对结果,并对RT基因上其他11个已知耐药相关突变位点进行分析。结果在37份YMDD突变阴性的样本中,DNA测序法检测结果为33份M204M(未突变)、1份M204I、3份M204V;4份YMDD突变阳性样本均为突变/未突变序列共存;另检出7份样本存在ADV耐药相关突变,占18.9%(7/37)。在55份YMDD突变阳性样本中,DNA测序法检测到52份,阳性结果符合率为94.5%(52/55);另检出5例存在ADV或ETV耐药相关突变,占9.1%(5/55)。结论DNA序列测定法检测HBVRT基因耐药相关突变敏感性高,重复性好,与实时荧光PCR方法的检测结果有较高的符合率,可同时检出YMDD突变以外的各种耐药相关突变,有助于临床全面了解患者对核苷(酸)类似物的耐药情况,合理地制订抗HBV治疗方案。
- 许彪徐东平成军李晓东毛远丽王海滨马洪滨胡瑾华王业东
- 关键词：YMDD突变
- HCV NS4A与钙离子信号调节亲环素配体相互作用位点的确定
- 2007年
- 目的明确丙型肝炎病毒非结构蛋白4A(HCVNS4A)与钙离子信号调节亲环素配体(CAML)相互结合的具体位点。方法构建CAML不同剪接体及缺失突变体的酵母表达载体,转化入酵母Y187菌株,分别与转化了HCVNS4A的酵母AH109菌株进行配合,在含X-α-gal的酵母四缺培养基上培养观察。结果转化了CAML不同剪接体及CAML缺失突变体pGADT7/CAML-1-211,pGADT7/CAML-1-57的酵母Y187菌株与转化了HCVNS4A的酵母AH109菌株配合后在四缺培养基上均有菌落生长,并且菌落呈现蓝色。转化了CAML缺失突变体pGADT7/CAML-58-211,pGADT7/CAML-234-296的酵母Y187菌株与转化了HCVNS4A的酵母AH109菌株配合后在四缺培养基上未见菌落生长。结论HCVNS4A与CAML的相互结合位点位于CAML的N-末端1～57位氨基酸残基,CAML不同剪接体与HCVNS4A均可以相互结合。
- 程勇前王琳成军刘妍徐东平钟彦伟李晓东戴久增
- 关键词：丙型肝炎病毒结合位点
- HBV基因组A1846T变异对病毒复制力及核心启动子活性的上调作用研究被引量：4
- 2013年
- 目的评价乙肝病毒(HBV)基因组核苷酸(nt)A1846T变异对病毒体外复制力及核心启动子(CP)转录活性的影响。方法 385例研究对象包括116例轻中度慢性乙肝(CHB-M)患者,123例重度慢性乙肝(CHB-S)患者和146例慢加急性肝衰竭(ACLF)患者。从患者血清中提取HBV DNA,PCR扩增HBV全长基因组,统计A1846T变异的发生率。挑选代表性A1846T变异株HBV全长序列克隆至pGEM-Teasy载体中,并通过定点突变获得野生型对照。BspQⅠ/ScaⅠ双酶切HBV基因组,转染HepG2细胞,检测病毒复制力和HBsAg表达水平;用PCR分别扩增含nt1846变异型和野生型的HBVCP区片段,构建pGL3-CP双荧光素酶真核报告表达载体,转染HepG2细胞,分析检测A1846T变异对荧光素酶表达的影响。结果 HBV A1846T变异发生率随疾病程度加重依次增高,CHB-M、CHB-S和ACLF患者的变异检出率分别为31.03%、42.27%和55.48%(P<0.01)。A1846T变异株的复制力、分泌的HBsAg水平和核心启动子活性较野生株分别提高了320%、28%和85%,常见的CP区A1762T/G1764A双联变异株分别较野生株提高了67%、9%和72%,A1846T变异对提高病毒复制力的影响更强。结论 A1846T变异可显著增加HBV复制力,提高HBsAg表达水平,增强启动子活性,顺式激活下游基因转录表达,提示该变异可能与慢性乙肝重症化发生机制相关。
- 江玲许智慧刘妍李晓东姚伟明李韦杰戴久增辛绍杰徐东平
- 关键词：肝功能衰竭启动区DNA复制
