李振宇
- 作品数：16 被引量：87H指数：5
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：湖北省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- VEGF_(165)和VEGF_(165)b真核表达质粒的构建和鉴定被引量：2
- 2011年
- 目的:构建人血管内皮生长因子(VEGF)165和VEGF165b真核表达质粒,为VEGF165和VEGF165b功能研究奠定基础。方法:应用RT-PCR方法从人肺腺癌A549细胞中获得并扩增VEGF165cDNA,双酶切后与真核表达载体pcDNA3.0连接,构建重组质粒pcDNA3.0-VEGF165,酶切、PCR及测序鉴定。以pcDNA3.0-VEGF165为模板,酶切重组的方法定点突变,获得VEGF165b cDNA全长,构建pcDNA3.0-VEGF165b,酶切、PCR和测序鉴定。将构建的VEGF165b真核表达质粒转染A549细胞,检测细胞内VEGF165b的表达变化。结果:酶切PCR和测序结果显示pcDNA3.0-VEGF165产物大小约690bp,pcDNA3.0-VEGF165b为597bp,两个重组质粒插入基因片段序列正确,无突变。VEGF165b转染A549细胞后,VEGF165b的表达增加。结论:成功构建了VEGF165和VEGF165b的真核表达质粒。
- 陈静李振宇朱芳陈叶珊罗鸣
- 关键词：血管内皮生长因子基因克隆
- 蛋白激酶CK2抑制剂对H460细胞内活性氧水平及DNA双链断裂影响被引量：2
- 2016年
- 目的：观察蛋白激酶CK2抑制剂对人肺癌细胞系H460细胞内活性氧水平及DNA双链断裂损伤的影响。方法使用终浓度为0、12.5、25.0、50.0μmol／L的蛋白激酶CK2抑制剂醌茜素分别作用H460细胞24 h，检测CK2各亚基蛋白及mRNA水平变化。不同浓度梯度醌茜素作用4、24 h后，采用流式细胞仪检测H460细胞内活性氧水平变化。通过免疫荧光法检测CK2抑制剂对H460细胞γ.H2 AX表达的影响，并计算细胞内γ.H2 AX焦点的平均值。采用方差分析和t检验。结果醌茜素对H460细胞 CK2各亚基蛋白或 mRNA 水平无明显影响（ CK2α，0μmol ∶12.5μmol／L， P＝0.966；0μmol／L ∶25μmol／L，P＝0.355；0μmol／L ∶50μmol／L，P＝0.864， CK2α’，0μmol／L ∶12.5μmol／L，P＝0.409；0μmol／L ∶25μmol／L， P＝0.833；0μmol／L ∶50μmol／L， P＝0.0．746， CK2β，0μmol／L ∶12.5μmol／L， P＝0.532；0μmol／L ∶25μmol／L， P＝0.830；0μmol／L ∶50μmol／L， P＝0.061）。随着醌茜素浓度增加及作用时间延长，H460细胞内活性氧水平明显升高。不同浓度醌茜素可增加细胞内γ.H2 AX焦点数，并呈剂量和时间依赖性（醌茜素作用时间4 h或24 h，0μmol／L ∶12.5μmol／L，12.5μmol／L ∶25μmol／L，25μmol／L ∶50μmol／L，P均＝0.000，浓度为12.5μmol／L，25μmol／L或50μmol／L，4 h ∶24 h，P均＝0.000）。结论醌茜素可通过抑制蛋白激酶CK2活性增加肺癌H460细胞内活性氧水平及DNA双链断裂损伤，该研究为醌茜素作为一种有潜力的肺癌放射增敏剂提供了理论基础。
- 张盛李倩雯李珂周方正李振宇董晓荣刘莉伍钢孟睿
- 关键词：蛋白激酶CK2活性氧DNA双链断裂
- 5－氮杂胞苷和白桦脂酸诱导膀胱癌细胞T24中内皮生长因子异构体差异性表达被引量：2
- 2011年
- 目的:观察5-氮杂胞苷及转录因子Sp1(special Protein 1)抑制剂白桦脂酸(betulinic acid)对T24人膀胱癌细胞株血管内皮生长因子(vascular erndothelial growth factor,VEGF)及其异构体表达的影响,揭示VEGF基因异构体表达的变化规律。方法:分别以不同浓度的5-氮杂胞苷、白桦脂酸作用于T24细胞,RT-PCR检测细胞内总VEGF、刺激性异构体VEGF_(165)和VEGF_(121)、抑制性异构体VEGF_(165)b的mRNA表达变化;构建VEGF_(165)b表达质粒稳定转染T24细胞,RT-PCR检测外源性VEGF_(165)b对VEGF_(165)表达的影响。结果:5-氮杂胞苷作用T24细胞后,细胞总VEGF mRNA及其刺激性异构体VEGF_(165)和VEGF_(121),表达明显增加,而抑制性异构体VEGF_(165)b表达减少;以白桦脂酸作用T24细胞后,细胞内总VEGF及刺激性异构体表达减少,但抑制性异构体VEGF_(165)b表达增加;而稳定转染VEGF_(165)b表达质粒的T24细胞,VEGF_(165)表达减少。结论:人膀胱癌细胞株T24受干预后,VEGF及其异构体基因的变化有一定规律。当细胞内总VEGF表达增加时,刺激性异构体表达增加而抑制性异构体表达减少;而总VEGF表达减少时,刺激性异构体表达减少而抑制性异构体表达增加。此外,VEGF_(165)b可拮抗VEGF_(165)的表达。
- 李贵玲李振宇陈静
- 关键词：膀胱癌5-氮杂胞苷白桦脂酸选择性剪切
- VEGF_(165)在HepG2体外形成血管生成拟态中的作用被引量：1
- 2010年
- 目的探讨VEGF165在人肝癌细胞株HepG2体外形成血管生成拟态(Vasculogenic mimicry,VM)中的作用。方法三维细胞培养HepG2,观察其形成血管样通道的能力;构建pcDNA3.0-VEGF165和pcDNA3.0-VEGF165b真核表达质粒,以Lipofectamine2000转染HepG2细胞,RT-PCR及Westernblot检测转染后各组细胞VEGF165和VEGF165b的表达;三维培养转染后HepG2细胞,观察各组细胞形成血管生成拟态的能力。结果 HepG2细胞在三维细胞培养系统中可形成血管样通道;VEGF165及VEGF165b真核表达质粒转染HepG2细胞后,RT-PCR及Western blot均示VEGF165和VEGF165b表达分别上调,而转染VEGF165b质粒组VEGF165表达下调;三维细胞培养转染后的HepG2细胞,各组形成血管生成拟态的能力无明显区别。结论 HepG2细胞可于三维培养系统中形成管道结构,但VEGF165对HepG2细胞体外形成血管生成拟态的能力无明显影响。
- 伍钢朱芳李振宇薛军彭纲任精华
- 关键词：VEGF165肝癌血管生成拟态
- 食管鳞癌中HIF-1α和EGFR及VEGF_(165b)的表达及相关性被引量：2
- 2009年
- 目的检测食管鳞癌组织中乏氧诱导因子-1α(HIF-1α)、表皮生长因子受体(EGFR)和血管内皮生长因子165b(VEGF165b)的表达,并探讨三者间在食管鳞癌发生发展中的关系。方法应用免疫组织化学SP法检测143例食管鳞状细胞癌组织中HIF-1α、EGFR和VEGF165b的表达。结果食管鳞癌组织中HIF-1α、EGFR和VEGF165b的阳性表达率分别为43.4%、58.0%和13.3%;其中HIF-1α阳性表达率与EGFR阳性表达率呈正相关关系(r=0.272,P=0.001),与VEGF165b阳性表达率呈负相关关系(r=-0.203,P=0.015)。结论HIF-1α、EGFR和VEGF165b在食管鳞癌的发生发展中起重要作用,食管鳞癌中HIF-1α的表达与EGFR及VEGF165b的表达存在相关性。
- 胡建莉陈萍刘伟李振宇陈叶珊伍钢
- 关键词：食管肿瘤HIF-1ΑEGFRVEGF165B
- 蛋白激酶CK2抑制剂对肺癌细胞系放射敏感性的影响被引量：1
- 2015年
- 目的：探讨蛋白激酶CK2抑制剂对肺癌细胞系放射敏感性的影响。方法通过蛋白印迹法检测蛋白激酶CK2α、β亚基在不同肺癌细胞系中的表达情况。平板克隆形成试验检测CK2激酶抑制剂醌茜素对肺腺癌细胞A549和大细胞肺癌细胞H460对X线的放射敏感性影响。流式细胞术检测醌茜素与X线联合作用对A549、H460细胞凋亡及周期分布影响。组间比较采用方差分析和成组t检验。结果蛋白激酶CK2α、β亚基在对放射不敏感的A549、H1650、H460细胞中高表达，而在放射敏感的小细胞肺癌H446细胞中低表达。使用醌茜素预处理的A549、H460细胞存活分数（ SF）明显低于未处理组，25μmol／L的增敏比（ D0值比）分别为2．771、2．463。醌茜素可引起细胞凋亡增加，但X线联合醌茜素与单独醌茜素作用相比未增加A549细胞和H460细胞凋亡（ X线照射＋醌茜素：单独醌茜素，A549细胞P＝0．487和H460细胞P＝0．254），然而X线联合醌茜素与单独X线照射或醌茜素作用相比可明显引起其G2＋M期阻滞（ X线照射＋醌茜素：单独X线照射，A549细胞P＝0．000，H460细胞P＝0．0024；X线照射＋醌茜素：单独X线照射，A549细胞P＝0．000，H460细胞P＝0．000）。结论通过醌茜素抑制蛋白激酶CK2活性可增加NSCLC细胞的放射敏感性。
- 李倩雯李珂张盛杨天洋周瑜李振宇周方正马虹董晓荣刘莉伍钢孟睿
- 关键词：肺癌细胞系放射增敏蛋白激酶CK2
- 蛋白激酶CK2抑制剂-醌茜素在非小细胞肺癌中的抗肿瘤作用被引量：5
- 2016年
- 目的:研究蛋白激酶CK2抑制剂-醌茜素在非小细胞肺癌中的抗肿瘤作用,探讨蛋白激酶CK2成为非小细胞肺癌治疗新靶点的可能。方法:使用MTT法检测细胞增殖,研究醌茜素对非小细胞肺癌细胞A549、H460细胞增殖的影响,探究醌茜素作用于A549、H460增殖的可能途径。使用流式细胞术检测醌茜素作用于A549、H460后,细胞的凋亡以及周期的变化。使用Trans-well迁移实验检测细胞迁移能力,探究醌茜素对A549、H460迁移的影响。结果:醌茜素能够抑制A549、H460细胞的增殖,并且该抑制作用具有时间依赖性及浓度依赖性(P<0.01,P<0.01)。在25μmol·L-1及50μmol·L-1浓度下,醌茜素能够促进细胞A549、H460凋亡(P<0.01,P<0.01;P<0.01,P<0.01)。在实验条件下,醌茜素对A549的周期影响差异没有统计学意义,但醌茜素在50μmol·L-1浓度下对H460具有周期阻滞作用,G2/M期的比例明显增加(P<0.01)。醌茜素能够显著抑制A549、H460细胞的迁移活动。结论:蛋白激酶CK2抑制剂-醌茜素能够抑制非小细胞肺癌细胞系A549、H460增殖、迁移,促进其凋亡,发挥抗肿瘤作用,有可能成为一种具有潜力的非小细胞肺癌分子靶向治疗的新型药物。
- 李珂周瑜张盛李倩文李振宇周方正伍钢孟睿
- 关键词：蛋白激酶CK2非小细胞肺癌
- 放射联合内皮抑素对人鼻咽癌细胞系VEGF表达及放射敏感性作用的研究
- 2010年
- 在所有内源性血管生成抑制因子中，内皮抑素拥有最广的抗瘤谱和最小的毒性，且不产生耐药性。内皮抑素与放疗联合应用可改善放疗疗效，增强抗瘤效应，而不增加毒副反应。笔者将重组人血管内皮抑素和放射进行不同方案的联合，体外探讨其对鼻咽癌细胞血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）表达及放射敏感性的作用。
- 杜宇伍钢任精华李贵玲曹如波李振宇
- 关键词：重组人血管内皮抑素人鼻咽癌细胞系VEGF表达内源性血管生成抑制因子抗瘤效应
- 食管鳞癌中VEGF_(165b)、HIF-1α的表达及临床意义被引量：6
- 2010年
- 目的检测食管鳞癌组织中VEGF165b和HIF-1α的表达及与临床病理特征的关系。方法应用免疫组织化学SP法检测143例食管鳞状细胞癌组织中VEGF165b和HIF-1α的表达。结果VEGF165b和HIF-1α在食管鳞癌组织中的阳性表达率分别为13.3%和43.4%;VEGF165b阳性表达率与HIF-1α阳性表达率呈负相关关系(P=0.035)。HIF-1α阳性表达率与饮酒程度、分期、纵隔淋巴结转移及肿瘤的分化程度呈正相关(P<0.05)。结论VEGF165b和HIF-1α在食管癌的发生发展和淋巴转移中起重要的作用,VEGF165b的表达与HIF-1α存在相关性,饮酒是食管癌的重要危险因素。VEGF165b可能成为治疗的靶点。
- 胡建莉陈萍刘伟李振宇陈叶珊伍钢
- 关键词：食管肿瘤VEGF165BHIF-1Α饮酒
- 局部晚期鼻咽癌放疗同步PF方案或顺铂单药的临床对照研究被引量：8
- 2012年
- 目的对比观察顺铂(DDP)单药用于局部晚期鼻咽癌同步放化疗与DDP联合氟尿嘧啶(5-FU)方案(PF方案)同步放化疗的有效性和安全性。方法 76例局部晚期鼻咽癌分为两组,40例接受PF方案同步放化疗(5-FU 500mg/m2静滴,d1～d5;DDP 80mg/m2静滴,d1,21天为1周期),36例接受DDP单药同步放化疗(DDP 40mg/m2静滴,每周1次,共7次)。鼻咽部病灶及颈部阳性淋巴结给予放疗总量为70Gy,颈部预防性照射给予放疗量50Gy。结果全部患者均可评价疗效和毒副反应,PF方案组及DDP单药组有效率均为100%。PF方案组的1、3年生存率分别为100%、85%,DDP单药组分别为100%、89%(P>0.05);PF方案组与DDP单药组的3年无进展生存率分别为77.5%和75.0%(P>0.05);PF方案组的中位生存时间为50.6个月,DDP单药组为48.0个月(P>0.05)。两组毒副反应以恶心呕吐、口腔黏膜炎及白细胞减少为主,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 DDP单药与PF方案用于局部晚期鼻咽癌同步放化疗的疗效相近,患者均可耐受,但DDP单药组反应较轻。
- 孙志华李振宇陈叶珊姜瑶伍钢
- 关键词：局部晚期鼻咽癌同步放化疗
