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热休克蛋白90α在人肝癌细胞外的表达及其对侵袭迁移能力的影响: 目的:探讨细胞外热休克蛋白（HSP）90α参与肝癌细胞转移潜能形成的可能分子机制。方法:采用免疫印记法,检测HSP90α在不同转移潜能肝癌细胞外的表达。选取高转移潜能肝癌细胞MHCC97-H为对象,应用不透细胞膜的小分子...; 李卫华陈广原余湘文彭妙官石永英卫建筠; 关键词：热休克蛋白90Α 热休克蛋白70 基质金属蛋白酶2 肿瘤转移; 文献传递

乙型肝炎病毒X蛋白对肝癌细胞热休克蛋白90α基因表达的影响: 2011年; 乙型肝炎病毒X蛋白（HBx）与肝细胞癌的发生高度相关。我们前期研究发现，热休克蛋白（heat shock protein，HSP）90α在转染HBVX基因的人肝癌HepG2细胞中异常过表达。体外抑制HSP90α基因的表达可明显抑制肝癌细胞的侵袭、转移能力。有研究结果显示HSP90α基因5′侧翼区序列对于HSP90α在肝癌细胞中的高表达起重要作用。我们研究了HBx对HepG2细胞HSP90α基因表达的调控作用，现报道如下。; 李卫华陈广原余湘文邓雪峰黄娟妮; 关键词：肝细胞基因表达信号通路

乙型肝炎病毒X基因转染人肝癌细胞株双向凝胶电泳图谱分析被引量：1: 2008年; 目的研究转染HBVX基因的人肝癌细胞株中蛋白质表达谱的改变，为筛查在HBV相关性肝细胞癌发生中发挥重要作用的关键蛋白质分子奠定基础。方法利用分子生物学方法建立稳定表达HBVX蛋白（HBx）的肝癌细胞株HepG2-HBx，同时设空载体pcDNA3转染细胞HepG2-pcDNA3及HBV全基因转染的人肝癌细胞株HepG2．2．15为对照。PCR法扩增Neo基因检测质粒DNA片段的插入，免疫印迹法检测HBx蛋白的表达。利用固相pH梯度双向凝胶电泳分离3种肝癌细胞株HepG2-pcDNA3、HepG2-HBx和HepG2．2．15的总蛋白，用图像分析软件比较、分析、识别细胞间的差异表达蛋白质。统计学分析采用t检验。结果获得分辨率高、重复性好的3种细胞的双向电泳（2-DE）图谱。软件分析表明，HepG2-pcDNA3、HepG2-HBx和HepG2．2．15细胞的2-DE凝胶可识别蛋白点分别为（2095±137）、（2188±105）和（2109±20）个。比较HepG2-pcDNA3与HepG2-HBx细胞的2-DE图谱发现37个差异显著的蛋白点，其中21个在HepG2-HBx表达上调，16个下调，6个表达量差异在5倍以上（t一0．027，P〈o．05）；HepG2．2．15与HepG2-HBx细胞相比，有38个差异显著的蛋白点，其中35个在HepG2-HBx细胞中上调，3个下调，14个表达量差异在5倍以上（t=0．031，P〈0．05）。结论HBx基因转染引起人肝癌细胞株蛋白质表达谱的变化，可能与感染的肝细胞发生恶性转化的分子生物学机制有关。; 李卫华缪晓辉戚中田朱诗应赵克开; 关键词：蛋白质类转染

乙型肝炎病毒X蛋白对人肝癌细胞hsp90α基因表达调控机制研究被引量：7: 2013年; 目的:探讨乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBx)参与人肝癌细胞hsp90α基因表达的调控机制。方法:采用半定量RT-PCR、蛋白质印迹法及荧光素酶活性检测技术,检测不同剂量HBx表达载体转染的HepG2细胞中hsp90α基因mRNA和蛋白表达及启动子活性的变化,并观察转录因子c-Myc阻断剂10058-F4对上述效应的影响。采用启动子实验分析c-Myc对hsp90α基因启动子的激活作用。RT-PCR和蛋白质印迹法检测表达HBx的HepG2细胞中c-Myc mRNA和蛋白表达情况;蛋白质印迹法及ELISA分析细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)和磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)表达水平及内源性ERK的活性。结果:HBx基因转染HepG2细胞中hsp90α基因的mRNA和蛋白表达水平以及启动子活性呈剂量-依赖性增强,P=0.006 1;c-Myc阻断剂抑制了HBx对hsp90α基因表达的上调效应。c-Myc通过与c-Myc位点(-1094/-1088)结合转录激活hsp90α基因启动子活性。HBx使HepG2细胞中c-Myc mRNA和蛋白表达增强,并伴有ERK1/2蛋白磷酸化水平增加,ERK活性明显提高,P=0.032。结论:HBx通过ERK信号通路反式激活肝癌细胞c-Myc介导的hsp90α基因启动子活性,从而上调hsp90α基因表达。; 李卫华陈广原余湘文石永英彭妙官李慧卫建筠; 关键词：人肝癌细胞株乙型肝炎病毒X蛋白

乙型肝炎病毒X蛋白对肝癌细胞生长的影响被引量：8: 2008年; 目的探讨乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitis Bvirus Xprotein,HBx)对肝癌细胞恶性程度的影响。方法构建携带HBVx基因真核表达载体pcDNA3/HBx,以脂质体介导转染HepG2肝癌细胞,建立可稳定表达HBx的肝癌细胞系HepG2-HBx细胞,同时设空载体pcDNA3转染细胞HepG2-pcDNA3及未转染HepG2细胞为对照组。PCR法扩增Neo基因检测插入的质粒DNA片段,免疫荧光检测HBx的表达。通过生长曲线测定、平板克隆形成实验、MTT比色实验、Hoechst33342核形态学染色观察及流式细胞仪测定,了解稳定转染细胞的生物学行为变化。结果与对照组相比,转染pcDNA3/HBx的HepG2-HBx细胞生长速度加快,其倍增时间缩短(28h对32.5h或34h,P<0.05),克隆形成率增加[(10.12±0.23)%对(5.33±0.19)%或(5.19±0.28)%,P<0.05],细胞周期分析显示由G0/G1期-S期的进程明显加快。细胞凋亡检测显示HepG2-HBx细胞可抵抗放线菌素D(ActD)诱导的凋亡作用。结论HBx可提高肝癌细胞的增殖活性,并增强肝癌细胞的抗凋亡能力,增加了肝癌细胞的恶性表型。; 李卫华缪晓辉戚中田朱诗应赵克开; 关键词：肝癌细胞乙型肝炎病毒 X蛋白细胞周期细胞凋亡

应用蛋白质组学技术筛选乙型肝炎病毒X蛋白作用相关蛋白质: 2010年; 目的应用比较蛋白质组学方法寻找HBVX蛋白（HBx）作用相关蛋白，揭示HBx在肝细胞癌发生、发展中作用的分子机制。方法以转染HBx基因的人肝癌细胞株HepG2-Px和转染空白载体的人肝癌细胞株HepG2P。为研究对象，应用二维凝胶电泳技术分离2种细胞的总蛋白质，图像分析识别差异表达的蛋白质点，通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱及电喷雾电离串联质谱对差异表达的蛋白质点进行鉴定，蛋白质免疫印迹法验证部分差异表达的蛋白质在2株细胞中的表达水平。数据比较采用t检验。结果得到分辨率较高、重复性较好的2株细胞系的二维凝胶电泳图谱，质谱分析共鉴定32个HBx作用相关蛋白，包括25个在HepG2-Px中表达上凋的蛋白瓶，如热休克蛋白90AB1、Bcl-2相关抗原-2，细胞核磷酸化蛋白、细胞内氯离子通道-1、基质金属蛋白酶3和黑色素瘤相关抗原12等，7个表达下调的蛋白质，如Wnt5a等。蛋白质印迹验证了部分差异表达蛋白在2株细胞中的表达水平。结论筛选出的差异表达蛋白主要涉及宿主细胞的基因转录、信号转导、细胞生长和增殖、细胞周期、细胞凋亡、DNA修复和细胞代谢、免疫应答等过程。提示这些与HBx相互作用的蛋白质可能与肝细胞癌的发生、发展相关，为揭示HBx的作用机制提供了线索。; 李卫华缪晓辉戚中田倪武赵克开朱诗应; 关键词：肝炎病毒乙型病毒蛋白质组学质谱分析法印迹法蛋白质

热休克蛋白90α在人类肝癌细胞外的表达及其对侵袭、迁移能力的影响被引量：10: 2014年; 目的探讨细胞外热休克蛋白90α（HSP90α参与肝癌细胞转移的可能分子机制。方法采用免疫印迹法检测HSP90α在低、高转移性肝癌MHCC97-L和MHCC97-H细胞外的表达。选取高转移潜能MHCC97-H细胞，应用不穿透细胞膜的小分子抑制剂抑制细胞外HSP90α表达，体外侵袭实验观察细胞侵袭、迁移能力的变化，明胶酶谱法分析基质金属蛋白酶2（MMP-2）活性的改变。免疫印迹和免疫共沉淀法检测细胞外辅助分子伴侣HSP70和MMP-2的表达及其与HSP90d的相互作用。利用RNA干扰技术下调细胞HSP70表达，观察细胞外HSP90仅与MMP-2相互作用及其细胞转移潜能的变化。结果HSP90d在不同转移潜能肝癌细胞内外均表达，且与肝癌细胞转移潜能呈正相关。MHCC97-H细胞经特异性HSP90抑制剂二甲氨基乙氨基-17-去甲氧基格尔德霉素-N-氧化物（DMAG—N—oxide）作用24h后，穿过上室基底膜的细胞数较未处理组和空白对照组明显下降（P〈0．01），分别为（28．11±3．56）、（80．12±4．16）、（82．24±4．12）个。体外侵袭实验显示，穿过Matrigel人工基底膜的细胞数低于未处理组和空白对照组，分别为（36．54±4．12）、（95．12±3．48）、（101．11±3．36）个，差异有统计学意义（P=0．017），并伴有细胞外MMP-2活性减低。HSP70和MMP-2均可在MHCC97-H细胞外表达，且能与HSP90α相互结合。小分子干扰RNA（siRNA）能有效抑制细胞HSP70表达，MHCC97-H细胞外HSP90d和MMP-2相互作用减弱，MMP-2活性下降，细胞侵袭、迁移能力受抑制。同时联合应用MMP-2抑制剂，具有协同抑制效应。结论细胞外HSP90饯可能通过与HSP70形成伴侣复合体介导MMP-2成熟活化，增强肝癌细胞侵袭、迁移运动，提示其可能是潜在的对肝癌转移实施防治的靶点。; 李卫华陈广原余湘文彭妙官石永英卫建筠; 关键词：肝细胞 HSP70热休克蛋白质类基质金属蛋白酶2 肿瘤转移

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李卫华

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