曹丙蕾
- 作品数：23 被引量：51H指数：4
- 供职机构：济南出入境检验检疫局更多>>
- 发文基金：国家质检总局科技计划项目山东出入境检验检疫局科研项目山东省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：农业科学轻工技术与工程医药卫生更多>>
- 后海穴免疫与常规免疫奶牛乳腺炎三联灭活苗的效力比较
- 2008年
- 以荷斯坦奶牛为试验动物,分别在后海穴、臀肌和皮下接种乳腺炎灭活疫苗,比较其免疫效力,结果显示后海穴免疫首先能节省疫苗用量,同时还可以提前产生免疫力,显著提高血清中的抗体水平(P<0.01);其次,接种疫苗时因针刺穴位的作用,显著提高了血液中的白细胞总数和淋巴细胞数,增强了免疫细胞的功能;最后显著降低乳汁中的体细胞数(P<0.01)。
- 曹丙蕾赵宏坤王长法高运东杨少华杨宏军仲跻峰
- 关键词：奶牛乳腺炎免疫途径
- 表面离子共振技术检测禽法氏囊病毒的非诊断性方法
- 本发明公开了一种表面离子共振技术检测禽法氏囊病毒的非诊断性方法，包括下列步骤：（1）鼠抗抗体的偶联：鼠抗抗体与表面离子共振系统中的生物传感器芯片偶联；（2）禽法氏囊单克隆抗体的捕获及捕获浓度的确定；（3）样品的检测：将待...
- 孙涛曹丙蕾孙明君徐彪房保海王群
- 文献传递
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒山东分离株N蛋白基因的原核表达及其单克隆抗体的制备与鉴定被引量：4
- 2014年
- 采集某发病猪场病料进行疑似PRRSV分离鉴定,经克隆测序获得一株美洲型的高致病性PRRSV SD-TA株分离株,并对其N蛋白(核衣壳蛋白)基因设计引物进行克隆转化,构建重组质粒pET-30a-ORF7,鉴定后经诱导表达纯化获得大小约为21KD(含6×His标签蛋白)的重组N蛋白。将纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,经间接ELISA检测后取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,并对融合细胞上清进行抗体检测,通过有限稀释法,获得了2株能稳定分泌抗N蛋白抗体的杂交瘤细胞株,命名为6D10和3H5,经鉴定后两者均为IgG1型,且识别于不同的抗原位点,经Western-blot和IFA检测,单抗6D10和3H5均能与N蛋白发生特异性反应,与无关蛋白无交叉反应,且均能与PRRSV经典株(VR株)和高致病性变异株(SD-TA株)感染的Marc-145细胞产生特异性反应。
- 曹丙蕾张群凌宗帅邱洪凯杨超然
- 关键词：单克隆抗体抗原位点WESTERN-BLOTIFA
- 猪流行性腹泻焦磷酸测序检测方法的建立
- 2016年
- 本研究旨在建立一种基于RT-PCR的焦磷酸测序方法,以便对猪流行性腹泻(PED)进行高效准确地检测。利用PSQ Assay Design SW软件分析了猪流行性腹泻病毒(PEDV)N蛋白基因的保守区域,设计了一对扩增引物及一条测序引物,建立了PEDV N蛋白基因的焦磷酸测序检测方法。实验结果表明,该方法可以直接通过PSQ的序列结果直观地判定PEDV,大大提高了PEDV的检出率和准确性。该方法特异性强,不与其他猪源病毒发生交叉反应,最低核酸检测限为0.05 pg/μL。本研究所建立的焦磷酸测序方法灵敏度高、稳定性好,能从基因序列水平上精确鉴定PEDV,避免了假阳性结果的出现,对于PED的快速确诊具有重要意义。
- 曹丙蕾邱洪凯孙涛凌宗帅张群
- 关键词：猪流行性腹泻猪流行性腹泻病毒RT-PCR焦磷酸测序
- 山羊IL-18成熟蛋白在昆虫细胞／杆状病毒中的表达及其活性分析被引量：1
- 2011年
- 目的:在昆虫细胞/杆状病毒中表达山羊白介素18(gIL-18)成熟蛋白,并对其生物学活性进行分析。方法:将编码山羊白介素18(gIL-18)成熟蛋白的基因克隆到杆状病毒转移载体pFastBac Dual上,构建重组质粒pFastBac Dual-gIL18,将该重组质粒转化至DH10Bac感受态细胞,经三重抗性与蓝白斑筛选,获得杆状病毒重组质粒Bacmid-gIL18,在Cellfectin作用下,将Bacmid-gIL18转染昆虫细胞sf9,收获感染后不同时间段的细胞,进行SDS-PAGE、Western blot检测和生物学活性分析。结果:重组蛋白获得正确表达具有良好的免疫原性;生物学活性分析表明,重组蛋白能够促进淋巴细胞增殖、诱导淋巴细胞分泌IFN-γ。结论:用昆虫细胞/杆状病毒系统成功表达了gIL-18成熟蛋白,且具有良好的免疫原性和生物学活性,从而为进一步研究gIL-18作为免疫调节剂和免疫佐剂在生产上的应用奠定了基础。
- 王婷婷王希辉范忠玲陈金龙曹丙蕾孔娜胡敬东赵宏坤
- 关键词：杆状病毒昆虫细胞生物学活性
- 金黄色葡萄球菌聚集因子A基因与牛IL-18基因真核共表达载体的构建与表达被引量：1
- 2010年
- 参照聚集因子A(Clumping factor A,ClfA)和牛白介素18(BoIL-18)cDNA序列分别设计引物进行扩增,将ClfA基因和BoIL-18基因分别插入到真核双表达载体pBUDCE4.1的CMV和EF-1α2个启动子的下游,构建携带2个目的基因的重组真核双表达载体pBUDCE/ClfA/BoIL-18。在Cellfectin Reagent的作用下转染293T细胞,用间接免疫荧光试验检测ClfA和BoIl-18蛋白。结果表明,重组质粒pBUDCE/ClfA/BoIL-18在293T细胞中同时表达了ClfA和BoIL-18蛋白。该重组载体的成功构建为研究ClfA和BoIL-18重组共表达产物的生物学活性及其防治奶牛金黄色葡萄球菌性乳腺炎的作用奠定基础。
- 陈智刘少宁曹丙蕾孔娜李宏梅胡敬东赵宏坤
- 关键词：金黄色葡萄球菌乳腺炎真核表达
- O型FMDV VP1基因与山羊IL-18基因在昆虫细胞中的共表达与活性检测
- 2011年
- 以杆状病毒pFastBacTM Dual为载体,将O型口蹄疫病毒(FMDV)VP1基因和山羊白介素18(gIL-18)基因,分别插入到双表达载体的P10启动子和多角体蛋白启动子PH的下游,构建重组质粒pFastBacTMDual-gIL18-VP1,然后转化DH10Bac感受态细胞,经三重抗性与蓝白斑筛选,获得杆状病毒重组质粒Bacmid-gIL18-VP1,并利用昆虫细胞进行转染。间接免疫荧光试验(IFA)检测表明gIL-18基因和VP1基因同时在同一细胞中独立表达。将共表达产物进行生物学活性分析表明,重组蛋白能够诱导山羊脾淋巴细胞生成IFN-γ抑制水疱性口炎病毒(VSV)在牛肾细胞(MDBK)上生长。本试验用Bac-to-Bac系统成功构建了同时含有gIL-18基因和VP1基因的重组杆状病毒,并在昆虫细胞中得到了高效表达,且具有良好的生物学活性,从而为下一步研究gIL-18在口蹄疫(FMD)中的免疫调节作用奠定了坚实的基础。
- 王婷婷范忠玲王希辉陈金龙曹丙蕾孔娜胡敬东赵宏坤
- 关键词：VP1基因共表达SF9细胞
- A型禽流感病毒通用型核酸检测标准样品的研制及不确定度分析
- 利用基因克隆和体外转录技术,制备A型禽流感病毒通用核酸检测阳性标准样品.根据禽流感基质蛋白基因M的序列,设计全长开放阅读框的克隆引物,RT-PCR获得相应片段,连接至PGEM-T载体,测序后采用体外转录方法制备RNA纯品...
- 孙涛雷质文邓明俊王群郑小龙梁成珠曹丙蕾凌宗帅
- PRRSV SD-TA变异毒株的分离及序列分析被引量：2
- 2010年
- 从猪＂高热病＂病料中分离到一株猪繁殖与呼吸综合征病毒（SD-TA株）,该病毒能够被抗PRRSV N蛋白单克隆抗体所识别。根据GenBank PRRSV经典株（VR-2332）和变异株（JXA1）基因序列分别设计合成了10对引物,利用RT-PCR扩增其基因序列,分别得到了预期的基因片段,将扩增的cDNA片段克隆入pMD18-T载体并测序。应用DNASTAR软件分析,与国内外已发表毒株的序列进行比较。结果显示,与美洲型相比,PRRSV SD-TA株相应基因核苷酸同源性为89.3%-99.1%,并且在Nsp2上缺失了30个氨基酸;与欧洲型代表毒株LV株相比同源性为59.9%。遗传关系表明：SD-TA株属于高致病性变异株。
- 邱洪凯曹丙蕾肖一红周恩民
- 关键词：PRRSV间接免疫荧光基因变异分析
- 仔猪流行性腹泻综合防控方案被引量：3
- 2015年
- 猪流行性腹泻（PED）是由猪流行性腹泻病毒（PEDV）引起的以仔猪高发病率、高死亡率为主要特征的急性高度接触性传染病[1]。2011年猪流行性腹泻病毒在全国大流行，导致许多大规模养殖公司的仔猪均出现流行性腹泻症状，其临床表现为呕吐、水样腹泻和最终脱水死亡，给整个养猪业带来巨大的经济损失。因此，对仔猪流行性腹泻病毒的防控成为当务之急。为此笔者根据对猪场仔猪发病的调查及与实验室诊断相结合，谈谈当前猪流行性腹泻的综合防控对策，供同行参考。
- 邱洪凯曹丙蕾闫文娟胡顺娜王涛
- 关键词：猪流行性腹泻病毒接触性传染病大规模养殖腹泻症状水样腹泻
