曲守方
- 作品数：132 被引量：185H指数：5
- 供职机构：中国食品药品检定研究院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家科技重大专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生机械工程农业科学生物学更多>>
- 液相芯片技术检测地中海贫血国家参考品被引量：1
- 2020年
- 目的采用基于液相芯片技术的地中海贫血(α/β型)基因检测试剂盒,对地中海贫血核酸检测国家参考品进行检测,评价该技术方法试剂盒的质量。方法对32例地中海贫血核酸国家参考品进行PCR扩增,将PCR产物杂交后,使用Luminex Magpix平台进行地中海贫血基因突变的检测,通过判断其检测结果与国家参考品是否一致来评估该方法检测国家参考品的准确性。结果 32例国家参考品检测结果准确,试剂盒检测范围内的国家阳性参考品均为相应基因型别,范围外的国家阳性参考品和国家阴性参考品均为野生型,检测限不高于25ng。结论基于液相芯片技术的地中海贫血(α/β型)基因检测试剂盒(PCR-流式荧光杂交法),完善了地中海贫血基因突变的检测方法,能够符合地中海贫血核酸检测国家参考品的要求。
- 张文新林卫萍孙楠高飞孙晶黄杰曲守方
- 关键词：液相芯片技术地中海贫血国家参考品突变
- 测序仪性能评价用脱氧核糖核酸国家参考品的建立
- 2021年
- 目的建立测序仪性能评价用脱氧核糖核酸国家参考品。方法分别将扩增培养后的永生化的人细胞系、培养达到10^(8)数量级的转染HPV11质粒的细菌、大肠杆菌和欧陆森氏菌高GC菌株收集后提取基因组DNA,然后进行DNA浓度测定。接着将人基因组DNA、HPV病毒基因组DNA、大肠杆菌基因组DNA和高GC菌株基因组DNA分别按照20、5、50、50 ng/μl终浓度要求,进行分装,制备国家参考品。在不同的基因测序仪进行上机测序,包括BGISEQ-500、NextSeq CN500、NovaSeq 6000和BioelectronSeq 4000等。构建人全基因组变异标准集和一致性序列。采用不同测序平台进行协作标定,评价变异标准集和一致性序列的适用性。结果制备的国家参考品经不同平台测序后构建了人全基因组变异标准集和一致性序列。经过不同测序平台标定,结果符合人全基因组变异标准集和一致性序列的要求。结论测序仪性能评价用脱氧核糖核酸国家参考品可以用于高通量基因测序仪的性能评价,为产品注册检定及上市后监督管理提供依据。
- 曲守方黄传峰孙楠于婷黄杰
- 关键词：单核苷酸多态性
- 胎儿染色体非整倍体21三体、18三体和13三体检测试剂盒(高通量测序法)行业标准的制定被引量：5
- 2020年
- 目的制定胎儿染色体非整倍体21三体、18三体和13三体检测试剂盒(高通量测序法)行业标准,使用BioelectronSeq 4000等不同测序平台的试剂盒进行验证,评价标准的可行性。方法使用高通量测序用外周血胎儿染色体非整倍体(T21、T18和T13)国家参考品,按照拟定行业标准的要求进行验证。首先提取国家参考品的血浆游离DNA,制备文库,上机测序,通过生物信息软件分析获得染色体数目的结果。结果胎儿游离DNA浓度为10%和5%的国家阳性参考品结果均为相应染色体三体;40个3.5%浓度的国家检测限参考品,其中至少20个参考品结果为相应染色体三体;嵌合比例为70%和30%的国家嵌合体参考品均为相应染色体三体;国家微缺失微重复参考品中18号染色体微重复的参考品均为18三体,其余参考品结果均不是21、18和13三体;染色体正常或其他染色体异常的国家阴性参考品,结果均不是21、18和13三体。结论制定的行业标准可以用于该类产品试剂盒的质量评价,为产品注册检验及上市后监督管理提供依据。
- 张文新于婷孙楠陈样宜高飞黄杰曲守方
- 关键词：染色体非整倍体胎儿游离DNA
- 耳聋基因突变检测试剂盒行业标准的建立
- 2020年
- 目的建立耳聋基因突变检测试剂盒行业标准。方法选择8个厂家生产的10种耳聋基因突变检测试剂盒,按照拟定的行业标准,检测耳聋基因突变检测国家参考品和企业参考品,对外观、检测限、准确性、特异性和重复性项目进行验证。结果全部试剂盒外观和重复性均满足要求。准确性项目中,除已知突变外,厂家C还检出国家参考品P19的299M杂合突变、国家参考品P9、P16的1555突变,不满足要求。特异性项目中,厂家C检出国家参考品P14存在1555突变,不满足要求;检测限项目中,根据实验结果、会议讨论及网上征求意见,确定了不同原理试剂盒的检测限指标。结论大部分验证结果均能满足拟定行标中的要求,表明行业标准各指标具有一定的合理性,可操作性强。耳聋基因突变检测试剂盒行业标准的建立将有助于提升这类试剂盒质量,同时将为生产检验流通等领域的监管提供依据。
- 张娟丽曲守方孙楠张文新孙晶于婷黄杰
- 关键词：试剂盒
- 游离前列腺特异性抗原第2次国际标准品协作标定
- 2020年
- 目的参加游离前列腺特异性抗原(free prostate specific antigen,free PSA)第2次国际标准品候选品(批号:17/102)的协作标定。方法按照世界卫生组织(WHO)研究方案,采用多种化学发光法、时间分辨免疫荧光法、酶联免疫荧光法和流式荧光发光法进行标定。结果全球8个国家10个实验室提交了数据。经标定,free PSA第2次国际标准品候选品的免疫效价几何均值为0.545μg/安瓿(95%置信区间0.508~0.586μg/安瓿,n=21,GCV 17.0%),稳健均值为0.533μg/安瓿;且稳定性和均匀性满足要求。本实验室提交的免疫效价几何均值为0.547μg/安瓿(95%置信区间0.480~0.624μg/安瓿,n=10,GCV 20.1%),与WHO总结数据的相对偏差仅为0.4%。结论经WHO生物标准专家委员会审核通过,最终确定候选品(17/102)可作为第2次free PSA国际标准品使用,每安瓿效价定为0.53μg。
- 于婷孙楠曲守方孙晶杨振
- 关键词：游离前列腺特异性抗原国际标准品化学发光法时间分辨免疫荧光法
- 高通量基因测序仪行业标准的验证被引量：1
- 2021年
- 目的按照制定的高通量基因测序仪行业标准的性能指标,使用测序通量<20 Gb/run且≥2 Gb/run高通量基因测序仪进行验证。方法取测序仪性能评价用脱氧核糖核酸国家参考品的DNA,经过DNA片段化处理、末端修复、接头连接和文库扩增等步骤后构建文库;然后将文库PCR扩增;最后使用测序反应通用试剂盒(半导体法)和BES4000基因测序仪进行测序。结果测序覆盖率为99.99%,测序平均深度为166×。国家参考品中人基因组DNA样本的比对率为86.14%,碱基测序准确率为98.97%;SNP、Indel准确率为95.40%;SNP、Indel灵敏度为85.75%。人基因组DNA、人乳头瘤病毒11型基因组DNA、大肠杆菌基因组DNA和高GC含量细菌基因组DNA样本的一致序列准确率分别为99.94%、100%、99.95%和99.88%。国家参考品进行三次重复测序,重复性结果均符合要求。结论制定的行业标准可以用于高通量基因测序仪的性能评价,为产品注册检定及上市后监督管理提供依据。
- 孙楠曲守方陈样宜高飞张文新于婷黄杰
- 关键词：单核苷酸多态性
- ROS1融合基因检测方法的建立
- 2016年
- 目的:建立检测ROS1融合基因的荧光PCR法,为肺癌病人的个体化药物治疗提供新的检测试剂盒。方法:根据人类ROS1基因的外显子和融合伙伴基因的外显子序列设计引物和探针,建立ROS1融合基因的荧光PCR法。然后采用不同ROS1基因融合的假病毒质粒作为质控品,评价方法的准确性、检测限和特异性。检测350例临床样本,并与直接测序结果进行比较,评价方法的临床适用性。结果:建立的ROS1融合基因PCR-荧光探针法,能准确检测出14种不同的ROS1融合基因;检测限是不高于总量0.01μg的RNA模板;正常人RNA的结果显示为融合突变阴性。临床样本的结果与测序结果的一致性好,Kappa值为1.00。结论:建立的ROS1融合基因检测方法具有很好的准确性、检测限和特异性,并且具有很好的临床适用性。
- 黄杰朱毅于婷张喆李丽琼高尚先曲守方
- 关键词：融合基因
- BCR-ABL融合基因检测试剂盒质控品的建立被引量：3
- 2016年
- 目的:建立BCR-ABL融合基因质控品,评价人类BCR-ABL融合基因突变检测试剂盒的性能。方法:根据人类BCR-ABL e1a2和e14a2型融合基因m RNA序列,设计覆盖断裂点序列,合成目的融合基因序列。用限制性内切酶BglⅡ和HindⅢ对含有目的融合基因的质粒和表达载体进行酶切,连接酶切产物。将连接产物转化DH5α感受态细胞,筛选单个阳性菌落进行验证。将正确的单个菌落进行超声诱导,制备假病毒溶液。用荧光逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法对假病毒溶液提取的RNA进行检测。结果:PCR结果和测序结果表明成功构建人类BCR-ABL融合基因e1a2和e14a2型假病毒质粒;荧光RT-PCR结果表明构建的e1a2和e14a2型假病毒质粒能够表达目的 RNA,并且能被市售试剂盒正确检出,可以作为RNA质控品。结论:本研究建立人类BCR-ABL融合基因RNA质控品,用于评价BCR-ABL融合基因突变检测试剂盒的性能,为BCR-ABL融合基因相关白血病的临床诊断及靶向治疗提供指导。
- 曲守方于婷张娟丽胡小许郭李平赵金银高尚先黄杰
- 关键词：BCR-ABLRNA检测
- 甲状旁腺激素测定试剂盒行业标准的验证被引量：2
- 2019年
- 目的制定甲状旁腺激素测定试剂盒行业标准,采用标准适用的化学发光法试剂盒进行验证,评价标准的适用性。方法采用磁微粒化学发光法、化学发光微粒子免疫检测法等5种不同厂家的试剂盒,按照拟定行业标准的要求和试验方法,对检出限、线性、准确度、精密度、特异性等项目进行验证。结果试剂盒的检出限不高于13.7 pg/mL;准确度、线性、精密度和特异性等其他项目均能满足拟定甲状旁腺激素测定试剂盒行业标准的要求。结论制订甲状旁腺激素测定试剂盒行业标准能够规范甲状旁腺激素测定试剂盒的技术要求,为甲状旁腺激素的检测工作及上市后的监督管理提供依据。
- 曲守方于婷孙楠黄杰
- 关键词：甲状旁腺激素化学发光检出限精密度特异性
- 高危型人乳头瘤病毒E6/E7质控品的建立被引量：4
- 2015年
- 目的:建立高危型人乳头瘤病毒(HPV)E6/E7质控品,用于评价高危型HPV E6/E7 mRNA检测试剂盒的性能。方法:根据高危型HPV 16和HPV 18的E6/E7基因序列设计引物,从感染HPV 16和HPV 18宫颈上皮细胞中提取DNA作为模板,通过PCR扩增获得带有目的基因的产物。采用限制性内切酶对带有目的基因的PCR产物和表达载体分别进行酶切,将目的基因与表达载体连接,然后转化DH5α感受态细胞,筛选出阳性菌落进行测序。然后将阳性菌液进行超声诱导,制备假病毒溶液。采用荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法对假病毒溶液提取的RNA进行鉴定。结果:通过序列测定和荧光定量RT-PCR法检测,结果表明成功建立了高危型HPV E6/E7假病毒质控品。结论:本研究建立了HPV E6/E7质控品的方法,可为高危型HPV E6/E7 mRNA检测试剂的质量控制提供质控品。
- 黄杰于婷赵金银郭李平高尚先曲守方
- 关键词：早期基因信使核糖核酸质控品MRNA检测
