普燕 作品数:29 被引量:68 H指数:5 供职机构: 新疆大学生命科学与技术学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 新疆维吾尔自治区自然科学基金 博士科研启动基金 更多>> 相关领域: 轻工技术与工程 生物学 文化科学 医药卫生 更多>>
重组凝乳酶的表达、纯化和酶学特性研究 凝乳酶是一种能专一性切割乳液中κ酪蛋白的酶,随着K酪蛋白的切割,酪蛋白颗粒在乳液中的稳态被破坏,进而酪蛋白凝聚沉淀并与乳清分离。利用这一特性,凝乳酶被广泛用于干酪加工初期的凝乳过程。适合于干酪制作的凝乳酶要具备高凝乳活力... 普燕关键词:原核表达 酶学特性 蛋白纯化 文献传递 牛凝乳酶原基因在毕赤酵母中的表达及其酶学特性的研究 2014年 凝乳酶是制造干酪的关键酶。为获得高活性的牛凝乳酶(chymosin,B—chy),用电脉冲法将线性化的pGAPZctA—B—pchy重组表达载体转化到毕赤酵母GS115中。该菌株在以葡萄糖为碳源的YPD培养基中可分泌表达牛凝乳酶原。SDS—PAGE分析表明所表达的牛凝乳酶,分子量约为37ku,符合预期大小。发酵培养96h后,酶活力达到96SU/mL。酶学特性分析表明,其最适凝乳温度为60℃,在pH2~6、小于50℃的温度范围内稳定。Ca2+浓度为40mmol/L时,钙促酶反应活性达到最高,此后随着Ca2+浓度的增加酶活力逐渐降低。金属离子Al3+、Mn2+、Fe2+、Mg2+和K+对酶活力具有显著的促进作用,而Co2+、Zn2+、Cu2+、Ni+对酶活力具有显著的抑制作用。本研究优化了凝乳酶的表达条件,为凝乳酶工业化生产提供了理论基础。 杨艺 普燕 张富春关键词:毕赤酵母 分泌表达 酶学特性 金属离子 原核表达重组牛凝乳酶的纯化 被引量:2 2017年 原核表达获得的重组牛凝乳酶与商品重组牛凝乳酶有相似的酶学特性,具商业潜力,故进一步研究其纯化方法。使用离心与饱和硫酸铵沉淀,成功纯化出有活性的重组牛凝乳酶。蛋白最终回收率为1.82%,总活力比纯化前提高了73.3%,比活力提高了95.3倍。同时,讨论了如何提高包涵体复性率与产物回收率,为今后该酶的工业化生产提供技术参考。 普燕 李轶杰 张富春关键词:原核表达 纯化 比活力 基因工程表达牛凝乳酶的初步研究 凝乳酶是干酪生产中使乳液凝固的关键性酶,专一性裂解牛乳中κ-酪蛋白多肽链的105~106位的苯丙氨酸和甲硫氨酸之间的肽键,对干酪的质构形成及干酪特有风味形成有非常重要的作用。随着世界范围内凝乳酶需求量的不断攀升,欧美发达... 普燕 张富春关键词:原核表达 真核表达 文献传递 油莎草实时荧光定量PCR内参基因的选择 被引量:1 2016年 目的筛选不同生长时期的油莎草地上茎的内参基因,为分析其基因的表达提供支持.方法以生长40 d的油莎草幼苗10:00,12:00,14:00,16:00,18:00,20:00六个时间点的地上茎为材料;以及生长天数为20,30,40,50,55,65,75,85,95,105,115,125,135,145 d的油莎草地上茎为材料,采用实时荧光定量PCR(Quantitative real-time PCR,RT-q PCR)技术,分析其18S r RNA,GAPDH-两个候选基因.结论筛选出18S r RNA作为分析油莎草地上茎不同时期基因表达量的内参基因. 敬思群 于红 郭改 涂亦娴 普燕关键词:油莎草 荧光定量PCR 内参基因 六氢β-酸环糊精包合物的抑菌活性及其稳定性 被引量:3 2018年 以金黄色葡萄球菌和大肠杆菌为供试菌,测试了六氢β-酸环糊精包合物抑菌活性及其稳定性。采用滤纸片法测定7种环糊精包合物的抑菌活性,采用2倍稀释法测定了六氢β-酸-2,6-二甲基-β-CD、六氢β-酸-2-甲基-β-CD和六氢β-酸-羟丙基-β-CD包合物的最低抑菌质量浓度,并考察了温度、p H、紫外线对上述3种包合物抑菌稳定性的影响。结果表明:7种环糊精包合物均有不同程度的抑菌活性,其中,六氢β-酸-2,6-二甲基-β-CD、六氢β-酸-2-甲基-β-CD和六氢β-酸-羟丙基-β-CD包合物抑菌效果最好,最低抑菌质量浓度均为8 mg/L。在p H〉6条件下,3种包合物的抑菌活性增强,在p H〈6条件下,其抑菌活性减弱;温度(20~120℃)和紫外线(辐照180min以内)对3种包合物抑菌活性无影响。 徐海宁 普燕 刘玉梅关键词:六氢Β-酸 抑菌活性 稳定性 生物工程 利用开菲尔粒制作发酵乳饮料工艺技术研究 被引量:1 2016年 采用响应面法对开菲尔发酵乳饮料工艺进行优化。在单因素试验基础上,选择开菲尔粒接种量、发酵时间和发酵温度为自变量,以发酵乳饮料酸度及感官评价值确定的复合指标为响应值,利用Box-Benhnken中心组合方法进行三因素三水平的试验设计,并做响应面分析,建立数学回归模型。结果表明,曲面回归方程拟合性好,利用开菲尔粒制作发酵乳饮料的最优工艺条件为:开菲尔的接种量2.8%,发酵时间22 h,发酵温度22℃。在优化条件下经3次重复试验验证,预测值与验证试验平均值接近。说明该工艺稳定、可行。 曹凯 邢军 普燕 张瑞关键词:开菲尔粒 发酵乳饮料 响应面分析法 原核表达重组牛凝乳酶原及重组牛凝乳酶酶学特性 被引量:4 2013年 摘要凝乳酶能够专一性裂解κ-酪蛋白,是制造干酪的关键酶。运用大肠杆菌表达系统对牛凝乳酶原进行了原核表达和初步纯化,活化重组凝乳酶原及测定凝乳活性,对重组凝乳酶的酶学特性进行分析。结果表明i大肠杆菌表达的重组蛋白约占菌体总蛋白的66.3%,每升培养液可纯化约200mg的重组凝乳酶原,活化后的凝乳酶活力可达600000SU/g。经测定凝乳酶最适作用温度为57~62℃,并在pH2~7、低于40℃的温度范围内稳定。金属离子中Al3+,Fe3+和Cu2+能显著增强酶活;胃蛋白酶抑制剂pepstatinA对酶有明显的抑制作用。 普燕 李轶杰 张富春关键词:凝乳酶 原核表达 酶学特性 一种鹰嘴豆奶酪型月饼及其制备方法 本发明公开了一种鹰嘴豆奶酪型月饼,所述的鹰嘴豆奶酪型月饼由皮料、馅料和奶酪料心组成,皮料占月饼重量的15-25%;馅料占月饼重量的15-25%;奶酪料心占月饼重量的50-70%;其中,皮料中按照重量组份计含有40-80份... 刘军 张富春 普燕 马纪 刘忠渊重组凝乳酶的原核表达及其抗体的制备 凝乳酶以凝乳酶原(prochymosin,pCHY)的形式分泌,在酸性条件下自剪切成有活性的凝乳酶。它对干酪的质构形成及干酪特有风味的形成有非常重要的作用。随着世界范围内奶酪需求量的不断攀升,欧美发达国家通过对凝乳酶基因... 李新苹 刘欢欢 普燕 李轶杰 张富春关键词:凝乳酶原 基因重组 密码子优化 文献传递