慕生枝
- 作品数：6 被引量：17H指数：3
- 供职机构：重庆医科大学附属第二医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- 乙型肝炎病毒PreS1基因的原核表达及免疫学性质鉴定被引量：1
- 2007年
- 目的构建含乙型肝炎病毒(HBV)PreS1基因的原核表达载体,获得高纯度、有生物活性的PreS1重组蛋白。方法采用PCR法扩增PreS1及其N末端和C末端部分基因序列,克隆入原核表达载体pGST-MOLUC。重组质粒经IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE电泳分析和Western blot检测。用谷胱甘肽-Sepharose 4B凝胶亲和层析纯化的重组融合蛋白免疫新西兰家兔,制备GST-PreS1融合蛋白的抗血清。进一步用ELISA分析融合蛋白特异抑制HBV病毒与抗体结合的能力。结果重组质粒转化宿主菌后成功诱导出Mr39000、31000和32000的GST-PreS1、GST-PreS1N及GST-PreS1C融合蛋白,均与预期相对分子质量相符。Western blot检测获得特异的杂交条带。采用谷胱甘肽-Sepharose 4B凝胶纯化的融合蛋白纯度约为90%左右。融合蛋白免疫家兔后抗体滴度达到10-7。病毒捕获ELISA实验表明,融合蛋白能特异抑制病毒与家兔免疫血清结合。结论GST-PreS1融合蛋白能够在大肠杆菌中高效表达,其纯化产物是研究PreS1基因在HBV感染过程中作用的有用工具。
- 张君慕生枝陈维贤黄英黄爱龙唐霓
- 关键词：乙型肝炎病毒原核表达
- 抗CP4-EPSPS单克隆抗体的制备和生物学特性的鉴定被引量：8
- 2007年
- 目的制备可用于胶体金快速检测试条的抗CP4-EPSPS(5-enolpyruvlshimimate-3-phosphate synthase)单克隆抗体(mAb),并鉴定其特性。方法以重组蛋白CP4-EPSPS免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗CP4-EPSPS的mAb,以间接ELISA法和Western blot进行mAb特异性鉴定;同时采用间接ELISA法鉴定mAb的Ig亚类,检测mAb的效价及相对亲和力,并进行mAb结合表位分析。结果获得2株可分泌特异性mAb的杂交瘤细胞(Ⅲ5A3,Ⅲ13A2)。其抗体亚类均为IgG1;腹水效价分别为1∶106和1∶108;相对亲和力Ⅲ5A3在105以上,Ⅲ13A2在106以上。ELISA相加实验结果显示2株mAb识别相同或相近的抗原表位。结论成功地制备出抗CP4-EPSPS的2株mAb,为建立快速特异检测转基因植物(GMO)的实验方法提供了有力的工具。
- 敬凌霞蔡雪飞慕生枝刘湘张君唐霓郑建黄爱龙
- 关键词：单克隆抗体生物学特性GMO
- 乙型肝炎病毒PreS1单克隆抗体的制备及特性研究
- 目的：乙型肝炎病毒(HBV)感染危害巨大，慢性乙肝至今仍缺乏有效的治疗手段和解决方案，HBV感染机制的研究进展相对滞后是严重影响新型治疗方法和药物研发的重要原因之一。PreS1在HBV感染过程中具有很重要的作用，对于研究...
- 慕生枝
- 关键词：乙型肝炎病毒PRES1蛋白纯化杂交瘤单克隆抗体
- 文献传递
- 丙型肝炎病毒5’非翻译区不同结构域对其启动子活性的影响被引量：4
- 2006年
- 在前期工作已证实HCV基因组5’UTRDNA序列具有启动子活性的基础上,分别构建5’UTR不同结构域的DNA序列驱动虫荧光素酶基因表达的质粒pGL3-5’UTR,转染HepG2细胞以及用全长的5’UTRcDNA构建质粒分别转染HepG2、Hela、HEK293、L02细胞,用双荧光素酶检测系统检测虫荧光素酶的表达水平,逆转录聚合酶链反应检测虫荧光素酶基因mRNA水平,并与相应对照作比较。结果显示当四个结构域都具备时,荧光素酶相对活性为5.91±0.65,为SV40启动子的18.7%;失去结构域I以后,荧光素酶相对活性为9.52±0.32;失去结构域I和II以后,荧光素酶相对活性为2.64±0.25;失去结构域III和IV以后,荧光素酶相对活性为0.32±0.09;失去结构域IV以后,荧光素酶相对活性为2.72±0.45,逆转录聚合酶链反应结果与之相符;全长5’UTRcDNA在L02、hepG2、HEK293、Hela细胞中荧光素酶相对活性分别为0.75,0.49,0.23,0.14。结果提示结构域III是HCV5’UTRDNA序列具备启动子活性的核心结构,结构域I对其5’UTRDNA序列的启动子活性具有抑制效应,而结构域II和IV可增强5’UTRDNA序列的启动子活性;HCV5’UTRcDNA的启动子功能无组织特异性,但在正常的肝细胞(L02)中表达最高。
- 陈娟陈维贤慕生枝张君黄爱龙
- 关键词：结构域启动子活性
- 乙型肝炎病毒前S1抗原的研究进展被引量：3
- 2007年
- 慢性乙型肝炎是当前最严重的健康问题之一，乙型肝炎的广泛传播已经成为一个危害广大人民群众健康的社会公众性问题。乙型肝炎是由乙型肝炎病毒（HBV）感染人肝细胞引起，已有研究表明，HBV具有严格的宿主易感性和肝细胞嗜性。乙型肝炎病毒前S1蛋白（pre-S1）是HBV外膜蛋白的重要组成部分，是HBV基因pre—S1区编码的产物。大量研究认为pre—S1在HBV附着、入侵肝细胞以及HBV复制过程中起着重要作用。本文就将对pre—S1进行综述。
- 慕生枝黄爱龙
- 关键词：HBVPRE-S1
- 乙型肝炎病毒PreS1抗原的研究进展被引量：1
- 2007年
- HBV是部分双链的DNA病毒,病毒基因组约3.2 kb大小,结构紧密,含有S,C,P和X四个开放阅读框(Open reading frame,ORF),分别编码外膜蛋白、核壳蛋白、DNA多聚酶和X蛋白[1].HBV病毒吸附蛋白存在于病毒包膜的3个相关蛋白:大蛋白(LHBs)、中蛋白(MHBs)和主蛋白(SHBs),3种蛋白C端有相同的序列,主蛋白由S基因编码,226个氨基酸组成;中蛋白由S及pre-S2基因区编码,281个氨基酸组成;……
- 慕生枝黄爱龙
