徐志辉
- 作品数：5 被引量：10H指数：2
- 供职机构：徐州医学院更多>>
- 发文基金：江苏省普通高校研究生科研创新计划项目江苏省“青蓝工程”基金江苏省高校自然科学研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 乙型肝炎病毒X基因促TRAIL诱导Huh7细胞凋亡的机制被引量：2
- 2012年
- 目的探讨乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)X基因(HBX)促肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF relatedapoptosis inducing ligand,TRAIL)蛋白诱导人肝癌细胞Huh7凋亡的机制。方法应用脂质体转染法将pcDNA3.1-HBX、pcDNA3.1分别转染Huh7细胞,建立稳定表达HBX的细胞模型Huh7-HBX和空载体对照细胞模型Huh7-3.1;运用TRAIL蛋白分别作用Huh7-HBX细胞、Huh7-3.1及Huh7细胞后,采用CCK8、流式细胞术检测细胞增殖和凋亡情况;Western blot检测死亡受体4(deathreceptor 4,DR4)和死亡受体5(death receptor 5,DR5)的表达情况;分光光度法检测细胞caspase8和caspase3活性。结果 RT-PCR及Western blot证实成功构建细胞株Huh7-HBX;CCK8和流式细胞术检测结果均显示Huh7-HBX细胞的凋亡率明显高于Huh7-3.1及Huh7(P<0.05);Western blot显示Huh7-HBX细胞的DR4、DR5的表达量明显高于Huh7-3.1及Huh7细胞(P<0.05);caspase活性检测结果显示,Huh7-HBX细胞caspase8及caspase3的活性明显高于Huh7-3.1及Huh7(P<0.05)。结论 HBX能够通过上调Huh-7细胞表面死亡受体DR4、DR5的表达,进而促进TRAIL蛋白诱导的细胞凋亡,为进一步研究HBX的促凋亡机制提供实验依据。
- 尤红娟刘雯赵金金徐志辉李向阳刘转转汤仁仙郑葵阳
- 关键词：乙型肝炎病毒X基因肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体凋亡
- TRAIL联合白藜芦醇协同诱导人肝癌Huh7细胞凋亡的机制初探被引量：4
- 2013年
- 目的观察肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor related to apoptosis inducing ligand,TRAIL)联合白藜芦醇(resveratrol,Res)对人肝癌细胞凋亡的影响。方法流式细胞术检测细胞凋亡;CCK8法检测细胞增殖;Western blot检测细胞内Bax、Bcl-2蛋白的表达;分光光度法检测细胞内caspase3、caspase8的相对活性。结果 TRAIL联合Res作用Huh7细胞,联合用药组与对照组及单独用药组相比:肝癌细胞Huh7的凋亡率明显增加;促凋亡蛋白Bax表达明显增加,而凋亡抑制蛋白Bcl-2表达明显减少;caspase3、caspase8的相对活性明显升高。结论 TRAIL联合Res对诱导人肝癌Huh7细胞凋亡具有明显的协同效果,其机制可能与Bax表达增加、Bcl-2表达减少及caspase活性升高有关。
- 刘雯尤红娟徐志辉赵金金李向阳刘晓梅周峰张鹏郑葵阳汤仁仙
- 关键词：TRAIL白藜芦醇肝癌凋亡
- 人可溶性TRAIL蛋白表达及纯化条件优化
- 2014年
- 目的：优化人可溶性TRAIL蛋白生产菌发酵及纯化条件，从而提高TRAIL的产量及活性。方法①探索6种不同培养液、培养液pH值、异丙基硫代半乳糖苷（ IPTG）诱导浓度及时间，选择最佳发酵条件；②联合镍离子亲和层析及超滤法纯化人可溶性TRAIL蛋白。结果①人可溶性TRAIL的最佳发酵条件为pH7．4的YPD培养液，所用IPTG的最佳浓度为0．2 mmol/L，最佳诱导时间为6 h；②经镍离子亲和层析和超滤联合作用可得纯度极高的蛋白。结论成功完成了人可溶性TRAIL发酵及纯化条件的优化，为今后大量提取TRAIL蛋白奠定了基础。
- 赵金金徐志辉胡磊罗文雅胡威尤红娟李向阳颜超郑葵阳汤仁仙
- 关键词：TRAIL原核表达纯化
- 人可溶性TRAIL原核表达载体的构建和蛋白表达、纯化及活性鉴定被引量：1
- 2012年
- 目的建立高效表达可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)蛋白的原核表达载体,获得高生物学活性的TRAIL蛋白。方法取健康人外周血提取总RNA,RT-PCR扩增TRAIL基因的胞外区片段,克隆入原核表达载体pET30a中,经双酶切、PCR及测序鉴定阳性克隆。重组载体转化感受态细胞BL21,优化蛋白表达条件;亲和层析法纯化重组蛋白;SDS-PAGE蛋白电泳、Western blot鉴定。重组蛋白与TRAIL蛋白标准品分别作用Huh-7细胞,CCK8、流式细胞术检测蛋白生物学作用。结果 DNA测序结果证实成功构建重组质粒pET30a/TRAIL,SDS-PAGE蛋白电泳、Western blot显示pET30a/TRAIL诱导的为可溶性的His-rTRAIL。CCK8、流式细胞术检测结果显示,与TRAIL蛋白标准品相比,His-rTRAIL对Huh-7细胞具有良好的促凋亡作用。结论成功构建高效表达可溶性TRAIL蛋白的原核表达载体pET30a/TRAIL,表达的可溶性蛋白His-rTRAIL具有高度的生物学作用,为肿瘤的生物学治疗提供新的实验依据。
- 尤红娟刘雯赵金金徐志辉党景东刘转转郑葵阳汤仁仙
- 关键词：肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体克隆原核表达凋亡
- TRAIL联合水飞蓟素对人肝癌Huh7细胞凋亡的影响被引量：4
- 2014年
- 目的探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)联合水飞蓟素(Sili)对人肝癌Huh7细胞凋亡的影响。方法 CCK8法检测细胞增殖抑制;分光光度法检测细胞caspase-3、caspase-8、caspase-9相对活性;Western blot检测细胞表面死亡受体4(DR4)、死亡受体5(DR5)的表达。结果 Sili与TRAIL联合作用Huh7细胞后,联合用药组与对照组及单独用药组相比,Huh7细胞的增殖率明显下降;caspase-3、caspase-8、caspase-9的相对活性明显提高。Sili作用Huh7细胞后能明显提高DR4、DR5蛋白表达。结论 Sili可通过上调死亡受体DR4、DR5表达而促进TRAIL诱导的Huh7细胞凋亡,为肝细胞癌的临床治疗提供了新的思路和方法。
- 徐志辉赵金金尤红娟胡磊罗文雅李向阳郑葵阳陈明汤仁仙
- 关键词：TRAIL水飞蓟素肝细胞癌凋亡
