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不同异源启动子与MDVgB启动子及其复合启动子的活性比较被引量：1: 2006年; 为了选择适宜的启动子调控外源基因的表达,以改善马立克氏病病毒为载体的重组病毒的免疫保护力。将hCMV立即早期启动子及增强子、SV40早晚期启动子及增强子或hCMV立即早期增强子的部分序列分别与马立克氏病病毒(MDV)自身的囊膜糖蛋白B基因(gB)启动子核心部分在体外杂合,分别构建复合启动子PhCMV-gB、PSV-gB或Pen-gB;将这些启动子与虫荧光素酶报告基因相连,构建表达载体。利用脂质体将以上质粒与内标质粒(pSV-β-LacZ)共转染鸡胚成纤维次代细胞,于转染后48h,将细胞刮下来,利用荧光素酶测定试剂盒和β-半乳糖苷酶测定试剂盒分别测定转染细胞的荧光素酶和β-半乳糖苷酶的活性,通过荧光素酶和β-半乳糖苷酶活性的比值获得虫荧光素酶的相对活性,利用虫荧光素酶的相对活性进行启动子的活性比较。结果表明,复合启动子相对马立克氏病病毒自身的gB启动子,活性有不同程度的提高,其中复合启动子PhCMV-gB的活性最高,而复合启动子PSV-gB和Pen-gB的活性相当;但与商业强启动子相比,复合启动子活性要弱一些或相当。因此,从某种意义上讲,这些复合启动子既具有gB启动子的一些特性,又有商业强启动子的一些特性,为以马立克氏病毒为载体的新兴疫苗的开发奠定了基础。; 邱亚峰葛菲菲徐学清陈溥言; 关键词：马立克氏病病毒虫荧光素酶

猪α1-干扰素的基因改造与高效原核表达被引量：29: 2004年; poIFN α1基因中含有大量的大肠杆菌稀有密码子 ,为了获得高表达 ,使用了大肠杆菌的偏爱密码子 ,人工合成了poIFN α1成熟蛋白编码基因。在保留编码蛋白序列的同时 ,使其 5′端A +T的含量增加到最大限度 ,并将其终止密码子改为TAA。将合成的poIFN α1成熟蛋白编码基因插入原核单纯表达载体pRLC中 ,转化大肠杆菌DH5α。实现了poIFN α1在大肠杆菌中的高效表达 ,表达产物以包涵体形式存在。纯化的包涵体经含DTT的 6mol L盐酸胍的变性液溶解及含GSH GSSG的复性液复性处理 ,复性后的表达产物浓缩后经凝胶层析纯化 ,细胞病变抑制法测定表明 ,重组poIFN α1具有较高的抗病毒活性 ,约为 6 4x10 6 u mg。; 曹瑞兵徐学清周斌陈德胜陈溥言; 关键词：基因原核表达大肠杆菌包涵体抗病毒活性

法氏囊病病毒vp2基因在酵母中的分泌表达及鉴定被引量：1: 2004年; 应用 Pichia 酵母表达系统高效分泌表达了传染性传染性法氏囊病病毒 vp2 基因片段。首先用 Primer5.0 设计 1 对引物 P1、P2,以插入 IBDV vp2 基因的 PMD18-T-VP2 载体为模板,扩增出带有终止密码子的 1.4 kb 片段,将此片段正向亚克隆到酵母表达载体pPICZα-A上,将构建好的重组载体pPICZα-A-VP2用SacⅠ内切酶线性化后,电击转化整合入 Pichia PastorisX-33 酵母菌,经高浓度 ZeocinTM 筛选、表型鉴定、诱导表达及表达产物的鉴定,得到高效表达 vp2 基因的酵母工程菌 X-33/ pPICZα-A-VP2。工程菌 72h 培养上清的 SDS-PAGE 电泳与免疫印迹结果显示,vp2 基因表达产物大小约为 55 kDa,比预期的 41kDa 大。凝胶薄层扫描结合 Bradford 蛋白质总含量测定结果表明,表达产物占工程菌培养上清总蛋白的 28%,表达量可达 23 mg/ L。间接 ELISA 结果表明重组表达产物能够有效地区分法氏囊病病毒标准阳性与阴性血清。; 贾赟张素芳周斌徐学清曹瑞兵赵玉军陈溥言; 关键词：传染性法氏囊病病毒 PICHIA

棕点湍蛙抗菌肽及其基因和在制药中的应用: 本发明涉及一种棕点湍蛙抗菌肽及其基因和在制药中的应用，属于生物医学领域。该抗菌肽是从中国两栖类动物棕点湍蛙基因编码的一种单链多肽，分子量2666.4道尔顿，等电点9.70，多肽全序列一级结构为：Phe Leu Pro M...; 赖仞徐学清梁建国韩曜平杨海龙李建许; 文献传递

表达LaCZ基因的重组CVI988病毒的构建及特性研究: 马立克氏病(MD)是一种鸡的淋巴增生性肿瘤疾病,是由马立克氏病病毒血清1型(Marek'sdiseasevirusserotype1,MDV1)引起的,但是,可以由致弱的或天然不致病的疫苗株进行防制.疫苗株分为三种类型:...; 邱亚峰葛菲菲张雪莲徐学清陈溥言; 关键词：重组病毒马立克氏病毒 LACZ基因启动子; 文献传递

猪瘟病毒E2蛋白A/D抗原区基因在酵母中的分泌表达与鉴定被引量：3: 2004年; 基于猪瘟病毒主要保护性抗原 E2 囊膜糖蛋白有两个相对独立的抗原结构单位--B/C 抗原区和 A/D 抗原区,设计一对特异性的引物扩增猪瘟病毒 E2 蛋白的 A/D 抗原区基因, 并将 PCR 产物克隆入含有强启动子 PAOX1和α-MF 信号肽序列的巴斯德毕赤酵母表达载体 pPICZαC 中,构建成重组质粒 pPICZα-AD,酶切线性化后电穿孔导入巴斯德毕赤酵母 X33菌中,经 ZeocinTM筛选得到 5 株高拷贝转化子,甲醇诱导表达。SDS-PAGE 和 Western blot试验表明酵母培养上清液中含有具有良好反应原性的 E2 蛋白,蛋白表达量达 175.8μg/mL。N-糖基化分析显示该表达蛋白在分泌过程中发生糖基化。该研究为研制防治猪瘟的亚单位疫苗与诊断试剂盒奠定基础。; 徐学清张素芳郑其升苏小运任雪枫陈溥言; 关键词：猪瘟病毒毕赤酵母

日本脑炎病毒E基因抗原域Ⅲ的克隆及高效表达被引量：5: 2004年; 根据GenBank公布的日本脑炎病毒 (Japaneseencephalitisvirus ,JEV)SA14 14 2减毒株的核苷酸序列 ,设计并合成一对特异性引物 ,应用RT PCR方法扩增出编码JEV囊膜蛋白抗原域Ⅲ的基因 (EⅢ) ,将其连接入pMD18 T载体 ,经测序后克隆入原核表达载体pET 32a (+) ,构建原核表达载体pET EⅢ 。阳性质粒转化感受态大肠杆菌BL2 1(DE3) ,经IPTG诱导 ,JEV EⅢ 基因获得表达 ,经细胞定位分析 ,目的蛋白以包涵体的形式存在于大肠杆菌中。通过改变IPTG的浓度和诱导时间 ,确定了表达EⅢ 蛋白的最佳诱导条件 :IPTG终浓度为 0 1mmol·L-1,诱导时间为 3h。在大肠杆菌中的最高表达量占菌体总蛋白的 5 4 9%。Western blot分析表明表达产物具有良好的免疫学活性。利用纯化的表达产物作抗原包被酶标板 ,可以明显地区分JEV阴、阳性血清 ,并且不与猪伪狂犬病病毒、猪圆环病毒、猪呼吸与繁殖障碍综合征病毒、猪细小病毒、猪瘟病毒的阳性血清发生反应。结论 :重组JEVEⅢ 蛋白可以用于检测猪血清中JEV抗体水平。; 郑其升杨松徐学清曹瑞兵陈德胜陈溥言; 关键词：日本脑炎病毒囊膜蛋白克隆原核表达

猪细小病毒VP2蛋白主要抗原表位基因真核表达载体的构建及表达被引量：7: 2004年; Using a pair of specific primers designed according to the relevant nucleotide sequences from GenBank, the main antigen domain for VP2 gene of Porcine parvovirus was ampilified with PCR method using the genomic DNA as template. The PCR product was cloned into the expression vector pIREShyg to get a recombinant eukaryotic expression plasmid pIREShyg-VP2, which was then transfected into the CHO-K1 cells. The expressed product was detected by IFA after the positive cell clone was selected with hygromycin. The result revealed that the main antigen domain for VP2 gene of porcine parvovirus was stably expressed in CHO-K1 cells.; 任雪枫胡志华谈国蕾周斌徐学清郑其升张晓勇陈德胜陈溥言; 关键词：猪细小病毒 VP2蛋白潮霉素 CHO-K1细胞

棕点湍蛙活性多肽及其基因和在制药中的应用: 本发明涉及一种活性多肽及其基因和在制药中的应用，属于生物医学领域。该活性多肽是从中国两栖类动物棕点湍蛙基因编码的一种单链多肽，分子量2664.36道尔顿，等电点9.70，多肽全序列一级结构为：Phe Leu Pro Le...; 赖仞徐学清梁建国韩曜平杨海龙李建许; 文献传递

马立克氏病病毒CVI988株病毒囊膜糖蛋白B基因启动子的克隆、及活性分析: 为了选择适宜的启动子调控外源基因的表达,以改善马立克氏病毒为载体的重组病毒的免疫保护力,克隆了马立克氏病病毒(MDV)CVI988株病毒囊膜糖蛋白B基因启动子(gB启动子),通过测序分析发现克隆的gB启动子与Genban...; 邱亚峰葛菲菲徐学清陈溥言; 关键词：马立克氏病毒启动子转录转染活性分析; 文献传递

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徐学清

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