彭海燕
- 作品数：4 被引量：9H指数：2
- 供职机构：广西医科大学附属肿瘤医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广西壮族自治区自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 低氧诱导因子-1α mRNA在克唑替尼诱导H2228细胞凋亡中的作用被引量：2
- 2014年
- 目的探讨低氧诱导因子-1α(HIF-1α)在克唑替尼诱导EML4-ALK阳性肺腺癌细胞株H2228凋亡中的作用。方法 (1)用10、30、90、270、810 nmol/L浓度梯度的克唑替尼处理H2228细胞48 h,MTT比色法测定细胞增殖能力。(2)用100、200、300 nmol/L克唑替尼处理H2228细胞48 h,Annexin V流式细胞仪检测凋亡细胞。(3)RT-PCR实验:1采用50、100、200、400、800μmol/L浓度的低氧模拟剂氯化钴(CoCl2)作用H2228细胞24 h,观察HIF-1α的mRNA表达水平变化。2常氧对照组(0.5%DMSO培养基48 h)、常氧+克唑替尼组(0.5%DMSO培养基24 h+500 nmol/L克唑替尼24 h)、低氧对照组(200μm/L CoCl224 h+0.5%DMSO培养基24 h)、低氧+克唑替尼组(200μm/L CoCl224 h+500 nmol/L克唑替尼24 h),采用RT-PCR方法检测各组细胞HIF-1α、Akt、VEGF mRNA的表达水平。结果 (1)MTT实验结果示:随着克唑替尼药物浓度升高,H2228细胞增殖抑制率逐渐升高,呈剂量依赖性,半增殖抑制浓度(IC50)为335 nmol/L。(2)凋亡实验结果示:H2228细胞凋亡率随克唑替尼浓度增加而升高,呈剂量依赖性。(3)RT-PCR实验结果示:1随着CoCl2浓度的增加,HIF-1α的mRNA表达水平逐渐下降,呈剂量及时间依赖性,于200μm/L浓度时下降最明显。2与对照组相比,无论是在常氧还是低氧,克唑替尼组H2228细胞HIF-1α、Akt的mRNA表达均上调,VEGF的表达下调。与常氧+克唑替尼组比较,低氧+克唑替尼组HIF-1αmRNA上调更明显(P<0.05)。结论克唑替尼对肺腺癌细胞株H2228的增殖抑制和诱导凋亡作用呈剂量依赖性,HIF-1αmRNA的上调在克唑替尼诱导肺癌细胞凋亡过程中发挥重要作用。
- 潘星辰周韶璋戴辉韦江彭海燕宋向群
- 关键词：低氧诱导因子-1Α凋亡
- EML4-ALK融合基因阳性人肺腺癌H2228细胞株对克唑替尼耐药前后stat3/survivin信号通路的检测
- 目的:探讨EML4-ALK融合基因阳性人肺腺癌H2228细胞株对克唑替尼(crizotinib)耐药前后stat3/survivin信号通路的变化及其调控机制。 方法:采用噻唑蓝(MTT)法检测克唑替尼对H2228细胞...
- 彭海燕
- 关键词：人肺腺癌信号通路
- 文献传递
- mTOR信号通路在克唑替尼诱导的EML4-ALK融合基因阳性肺癌细胞株H2228凋亡中的作用被引量：3
- 2014年
- 目的:探讨以磷脂酰肌醇3-激酶相关激酶蛋白家族成员哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)为中心的信号通路在克唑替尼(crizotinib)诱导的棘皮动物微管结合蛋白样蛋白4-间变性淋巴瘤激酶(EML4-ALK)融合基因阳性的非小细胞肺癌细胞株H2228凋亡中的作用。方法:根据不同的实验目的处理H2228细胞后,荧光定量PCR检测基因状态,MTT法检测细胞抑制率;流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期;Western blotting检测细胞mTOR信号通路中关键蛋白的表达及活化水平。结果:Crizotinib对H2228细胞有促凋亡作用,呈时间和剂量依赖性,且能使H2228细胞阻滞在G1期。在使用crizotinib处理的凋亡细胞株中发现mTOR活化水平降低,mTOR上、下游关键蛋白的活化水平都呈下降趋势,肺癌细胞株H2228中特殊表达的融合蛋白EML4-ALK变异体3表达量未受影响,但其活化形式p-ALK明显受到抑制。结论:初步证实mTOR信号通路在crizotinib诱导含有EML4-ALK融合基因的肺癌细胞H2228凋亡中有一定作用,为crizotinib的作用机制提供了依据。
- 戴辉宋向群潘星辰彭海燕韦江周韶璋
- 关键词：EML4-ALK融合基因哺乳动物雷帕霉素靶蛋白
- EML4-ALK融合基因阳性表达的人肺腺癌H2228细胞对克唑替尼耐药后BIM信号通路的影响被引量：4
- 2015年
- 目的建立人肺腺癌H2228克唑替尼耐药细胞株,探讨克唑替尼(crizotinib)诱导EML4-ALK融合基因阳性表达的人肺腺癌细胞H2228在BIM信号通路中的作用。方法克唑替尼按50 nmol/L、100 nmol/L、200 nmol/L、500 nmol/L、1 000 nmol/L的浓度逐步递增法诱导人肺腺癌H2228细胞株获得性耐药;分别采用MTT法和流式细胞术检测H2228和H2228/CR细胞在不同浓度克唑替尼作用后的IC50和细胞凋亡率;采用Western blot法检测H2228和H2228/CR细胞在BIM信号通路关键分子ALK、p-ALK、ERK、p-ERK及BIM蛋白表达的变化。结果成功诱导克唑替尼耐药细胞株H2228/CR;MTT法检测H2228/CR细胞和H2228细胞的IC50分别为3 418 nmol/L、335 nmol/L,H2228/CR细胞的耐药指数为10.20,H2228/CR细胞在不同浓度克唑替尼作用下的增殖抑制率低于H2228细胞(P<0.05);流式细胞术检测显示克唑替尼对H2228细胞有促凋亡作用,且呈时间依赖性(P<0.05),H2228/CR细胞的凋亡率明显低于H2228细胞的凋亡率(P<0.05);Western blot法检测显示H2228/CR细胞的p-ALK、p-ERK的表达不受抑制,BIM蛋白表达无上调趋势。结论实验表明H2228/CR耐药细胞中的BIM蛋白的表达与其耐药有关。初步阐明EML4-ALK阳性表达的非小细胞肺癌克唑替尼耐药产生的可能机制,BIM在诱导EML4-ALK阳性表达的人肺腺癌细胞株H2228对克唑替尼产生耐药发挥重要作用,提示BIM可作为克服克唑替尼耐药的一个靶点。
- 韦江彭海燕苏翠云宋向群王惠临宁瑞玲周韶璋
- 关键词：EML4-ALK融合基因获得性耐药BIM
