张福良
- 作品数：36 被引量：125H指数：6
- 供职机构：安阳工学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划河南省科技攻关计划广东省农业科技攻关项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学文化科学医药卫生更多>>
- 应用荧光定量PCR对PCV2在不同类型猪群血液中感染情况的调查
- 2017年
- 应用荧光定量PCR对某规模化养猪场340头份不同类型猪群猪只血液中PCV2感染的情况进行了调查。结果表明,所有被检测的猪群均存在PCV2感染,不同类型猪群的感染率为100%,全场猪的平均感染率为76.8%(261/340)。其中,生长肥育猪群PCV2感染率最高为90%,而种公猪群感染率最低为30%。在病毒荷载量方面,整个猪群的血液中病毒荷载量处于103~104copies/μL之间。
- 张福良王国栋靳国旺
- 关键词：猪圆环病毒2型荧光定量PCR感染率
- 基于TaqMan探针的猪圆环病毒1型实时荧光定量PCR检测方法的建立被引量：5
- 2007年
- 采用PCR方法克隆了猪圆环病毒1型(PCV1)ORF2基因,构建了重组质粒pMD-ORF2并将其作为标准阳性模板。通过对反应条件进行优化,以定量的10倍系列稀释的质粒pMD-ORF2为标准品进行荧光定量PCR扩增,建立了检测PCV1的荧光定量PCR方法。结果显示,该方法的检测灵敏度可达1.0×101拷贝/μL;对起始浓度为1.0×107、1.0×106、1.0×105拷贝/μL标准品的最终实际测得值分别为1.001×107、0.869×106和0.988×105拷贝/μL,变异系数分别为4.758%、1.865%和3.836%。表明,此方法具有良好的准确性和重现性。
- 张福良宋长绪朱道中徐维加
- 关键词：猪圆环病毒1型实时荧光定量PCRTAQMAN探针
- 猪圆环病毒2型荧光定量PCR检测方法的建立
- 通过条件优化,以定量的10倍系列稀释的质粒pMD-ORF2为标准品进行荧光定量PCR扩增并制作标准曲线建立了PCV2的荧光定量PCR检测方法.结果表明，该方法检测灵敏度可达1.0×100拷贝/μL,线性范围为109～10...
- 张福良宋长绪杨鸣琦朱道中蒋智勇林志雄刘燕玲宋志军
- 关键词：猪疾病圆环病毒ORF2荧光定量检测TAQMAN探针
- 文献传递
- 用于鉴别猪水泡病毒、口蹄疫病毒与塞尼卡谷病毒的三重荧光RT-PCR检测试剂盒
- 本发明公开了用于鉴别猪水泡病毒、口蹄疫病毒和塞尼卡谷病毒的三重荧光RT‑PCR检测试剂盒，提供了用于检测猪水泡病毒VP1、口蹄疫病毒5’UTR与猪塞尼卡谷病毒聚合酶3D基因的特异性引物对和MGB探针，以及包括它们的试剂盒...
- 连凯琪张杰周玲玲张明亮宋玉伟王国栋张福良关现军王双山
- 文献传递
- 猪圆环病毒2型荧光定量PCR检测方法的建立被引量：18
- 2006年
- 通过条件优化，以定量的10倍系列稀释质粒pMD—ORF2（含PCV2-ORF2全基因）为标准品，进行荧光定量PCR扩增并制作标准曲线，建立了猪圆环病毒2型（PCV2）的荧光定量PCR检测方法。该方法检测灵敏度可达1．0×10^6拷贝／μL，线性范围为10^9～10^0，达10个数量级；对起始浓度为1．0×10^6、1．0×10^5、1．0×10^4拷贝／μL的标准品的最终实际测得值分别为1．000×10^6、0．935×10^5、0．987×10^4拷贝／μL，变异系数分别为2．527％、2．067％、2．092％。该方法的检测灵敏度与套式PCR（nPCR）相当，甚而高于常规PCR。
- 张福良宋长绪杨鸣琦朱道中蒋智勇林志雄刘燕玲宋志军
- 关键词：猪圆环病毒2型荧光定量PCRTAQMAN探针
- 抗肿瘤抗生素研究进展被引量：6
- 2005年
- 对烯二炔类、糖肽类、蒽环类、苯并二吡咯类、核苷类、β-内酰胺类、苯醌类等7类抗肿瘤抗生素的研 究开发、作用机制、药效及临床应用现状进行了综述,提出今后抗肿瘤抗生素的研究应在新的分子靶点寻找、前药 研究、多药耐药性克服等方面有所加强。
- 杨鸣琦张福良路宏朝
- 关键词：抗肿瘤抗生素药效分子靶点
- 猪流行性腹泻病毒截短M基因克隆、生物信息学分析及其截短片段表达
- 2022年
- 【目的】探索猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)截短M蛋白的序列结构特征与原核表达情况。【方法】根据已公布的PEDV M基因序列设计1对特异性引物,以从阳性病料提取的RNA为模板,通过RT-PCR扩增并克隆PEDV截短的M基因(rM),应用在线生物信息学软件预测rM蛋白的结构特征。将得到的截短的M基因克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,构建原核表达质粒pET-28a-rM,将鉴定正确的pET-28a-rM转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,成功构建重组菌株BL21(pET-28a-rM),并对重组菌株进行IPTG诱导表达,优化重组蛋白的表达条件,重组蛋白经亲和层析纯化后进行SDS-PAGE及Western blotting检测,同时应用重组蛋白制备兔抗rM多克隆抗体。【结果】试验克隆得到大小为366 bp的截短的M基因,重组蛋白由121个氨基酸组成,预测蛋白分子质量大小约为12.8 ku。该蛋白的二级结构由无规则卷曲、延伸链、β-转角和α-螺旋组成,占比分别为48.76%、33.88%、9.09%和8.26%。该蛋白不含信号肽,但有跨膜区,包含21个磷酸化位点。SDS-PAGE结果显示,重组蛋白大小约为15 ku,以包涵体蛋白形式存在,在37℃、1 mmol/L IPTG诱导12 h时蛋白的表达量最高。Western blotting检测结果表明,重组蛋白与PEDV阳性血清具有较好的反应原性,纯化的重组蛋白免疫新西兰大白兔获得的高免血清效价高于1∶51200。【结论】本研究成功克隆PEDV截短的M基因,对rM蛋白进行了生物信息学分析,获得了高纯度的rM蛋白,为猪流行性腹泻治疗及检测用生物制品的开发奠定了基础。
- 张明亮耿亚春连凯琪马磊常莹王双山张福良
- 关键词：M基因生物信息学分析原核表达
- 一种猪干扰素α突变体YNS及其制备方法和应用
- 本发明属于干扰素领域，涉及突变体干扰素的制备，特别是指一种猪干扰素α突变体YNS及其制备方法和应用。利用基因工程方法，将天然猪α干扰素基因进行改造，改造的氨基酸位点为H58→Y、E59→N及L61→S，将改造后的基因克隆...
- 梁秀丽张红垒魏战勇夏璐王朋涛张福良王雪平龙福庆张春霞卢川原
- 文献传递
- 豫北地区猪圆环病毒2型感染的血清学调查被引量：9
- 2008年
- [目的]明确河南省豫北地区PCV2感染的流行情况,以便控制PCV2感染的流行。[方法]从河南省豫北地区安阳、鹤壁、新乡、濮阳4市的猪场采集不同日龄猪群血清样品338份,用间接ELISA方法进行猪圆环病毒2型(PCV2)感染的血清抗体检测。[结果]结果表明:PCV2血清抗体阳性率:哺乳仔猪为16.0%(8/50);断奶仔猪为49.5%(53/117);生长肥育猪为51.4%(36/70);种公猪为18.1%(4/22);后备母猪为20.6%(7/34);经产母猪为54.5%(29/55);阳性率为70.4%(19/27),338份血清总阳性率为40.6%(137/338)。[结论]河南省豫北地区养猪业已受到猪圆环病毒2型的感染,应引起高度重视。
- 欧阳素贞张福良王双山
- 关键词：猪圆环病毒2型血清学调查抗体检测ELISA
- 两株不同来源的猪圆环病毒1型ORF2基因的克隆与序列分析被引量：1
- 2006年
- 根据GenBank中猪圆环病毒1型（PCV1）ORF2基因序列，设计了1对引物，应用PCR方法从PK-15细胞和疑似患断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）的仔猪组织病料中分别扩增出了PCV1 ORF2全基因（702bp）。将此基因片段克隆入pMD18-T载体，筛选获得了重组质粒pMD-PCV1-ORF2，并对其进行了测序与分析。结果表明：所克隆的PK-15来源和组织病料来源的ORF2基因的同源性为99．4％，二者与GenBank中登录的PCV1 ORF2基因的同源性为97．3％～99．9％，与PCV2 ORF2基因的同源性为67．9％～68．4％，二者编码的蛋白在几个功能区比较保守。抗原表位预测表明，PCV1 ORF2编码的蛋白具有良好的免疫原性。
- 张福良孙丽华宋长绪杨鸣琦郝永清刘燕玲武占银
- 关键词：猪圆环病毒1型ORF2基因克隆
