张珊珊
- 作品数：9 被引量：18H指数：3
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- 腺病毒介导VEGF165基因转移对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用被引量：6
- 2008年
- 目的研究腺病毒介导的血管内皮生长因子(VEGF)165基因转移对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)的神经保护作用。方法采用细菌内同源重组技术构建Ad-VEGF腺病毒重组载体。7日龄Sprague-Dawley大鼠随机分成4组,假手术组(n=20)、HIBD组(n=25)、病毒缓冲液移植组(Buffer组,n=20),Ad-VEGF移植组(Ad-VEGF组,n=25)。使用Rice法制成HIBD模型,Ad-VEGF移植组和Buffer组在HIBD后3d于大鼠左侧感觉运动皮层区分别立体定位注射2 μL重组体腺病毒悬液或病毒缓冲液;移植后7d采用RT-PCR法检测鼠脑VEGF165 mRNA的表达;采用原位缺口末端标记法(TUNEL法)检测鼠脑皮质神经元凋亡情况;采用免疫组织化学法分别检测VEGF蛋白表达及CD34表达计数大脑皮质微血管密度;30日龄时采用放射型迷宫觅水试验进行行为学测试,35日龄采用苏木精-伊红染色观察鼠脑组织病理学。结果Ad-VEGF组VEGF165基因表达较HIBD组及Buffer组明显增高(P<0.05);Ad-VEGF组脑细胞凋亡数目较HIBD组及Buffer组减少(P<0.05);Ad-VEGF组平均大脑皮质微血管数及VEGF蛋白表达较HIBD组及Buffer组明显增多(P<0.05);Ad-VEGF组行为学测试成绩较HIBD组及Buffer组改善(P<0.05);Ad-VEGF组鼠脑皮层神经元变性坏死较HIBD组及Buffer组减轻。结论腺病毒载体介导的VEGF165基因转移可增加新生鼠脑组织VEGF165 mRNA及VEGF蛋白的表达,减少脑细胞凋亡、增加新生脑血管形成,减轻缺氧缺血性脑损伤,改善远期学习记忆功能。
- 张珊珊郑湘榕杨于嘉钟乐王霞谢岷余小河
- 关键词：缺氧缺血性脑损伤血管内皮生长因子基因转移新生大鼠
- VEGF转染NSCs移植对新生脑瘫大鼠的神经保护作用
- 目的研究血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)_(165)基因转染神经干细胞(neural stem cells,NSCs)移植对新生脑瘫(cerebraI p...
- 谭洁璐郑湘榕张珊珊
- 低氧反应元件对神经干细胞转染hVEGF165基因表达的调控作用
- 目的 利用携带低氧反应元件(hypoxia response element,HRE)调控血管内皮生长因子165(vascular endothelial growth factor,VEGF)基因的慢病毒表达载体转染体...
- 谭丹凤郑湘榕张珊珊杨于嘉尹飞王霞钟乐余小河
- HRE.ppET-1调控血管内皮生长因子基因在内皮细胞的靶向性表达被引量：1
- 2008年
- 试图探讨缺氧反应元件(hypoxia-responsive element,HRE)增强人前内皮素原-1基因(human preproendothelin-1,ppET-1)启动子在缺氧条件下靶向调控血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)基因在内皮细胞中的表达,以提高基因治疗的效果.构建真核表达载体pEGFP-HRE.ppET-1,pcDNA3.1-VEGF+Pa(VA),pcDNA3.1-ppET-1+VEGF+Pa(PVA),pcDNA3.1-HRE.ppET-1+VEGF+Pa(HPVA),脂质体转染离体培养的脐静脉内皮细胞(HUVEC)和肝细胞,荧光显微镜下观察GFP表达,验证HRE.ppET-1调控元件在内皮细胞中的特异性.培养基中加入100μmol/L的氯化钴模拟细胞体外缺氧环境.载体转染后,RT-PCR和Western blot半定量分别检测各载体VEGFmRNA和蛋白水平在常氧及缺氧条件下的表达差异.应用Elisa定量检测细胞上清VEGF蛋白的表达量,分析各载体的表达水平.使用MTT实验检测细胞增殖率.GFP的表达显示HRE.ppET-1调控元件在内皮细胞中可有效转录外源基因,在非内皮细胞中表达极弱.RT-PCR,Western Blot及Elisa的检测结果均表明缺氧条件下HPVA组以及PVA组中,VEGF的表达均较常氧条件下增强(P<0.05).MTT实验检测显示HPVA转染的缺氧条件下的HUVEC增殖率超过其常氧未转染对照组.结果显示,HRE.ppET-1调控元件具有内皮细胞表达特异性,并能在缺氧条件下显著提高VEGF的表达,刺激内皮细胞的增殖,为进一步开展内皮细胞的靶向基因治疗研究奠定良好基础.
- 郑湘榕张珊珊杨于嘉王霞钟乐余小河
- 关键词：缺氧反应元件血管内皮生长因子内皮细胞
- 内皮细胞特异性表达血管内皮生长因子基因载体的构建及表达特性验证(英文)被引量：2
- 2010年
- 目的构建在内皮细胞特异性表达人血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)基因的真核表达载体,验证HRE.ppET-1调控元件的内皮细胞表达特异性。方法用聚合酶链反应(PCR)方法直接合成缺氧反应元件(hypoxia-responsive element,HRE),人前内皮素原-1基因(human preproendothe-lin-1,ppET-1)启动子、VEGF元件,通过PCR、酶切、连接等一系列核酸分子操作,将各元件亚克隆至pcD-NA3.1载体上,最终组合而成真核表达载体pcDNA3.1-VEGF+Pa,pcDNA3.1(-CMV)-ppET-1+VEGF+Pa,pcDNA3.1(-CMV)-HRE+ppET-1+VEGF+Pa;脂质体转染离体培养的脐静脉内皮细胞(HUVEC)和肝细胞,荧光显微镜下观察GFP表达,验证HRE.ppET-1调控元件在内皮细胞中的特异性。结果各载体经酶切鉴定和测序证实。GFP的表达显示HRE.ppET-1调控元件在内皮细胞中可有效转录外源基因,在非内皮细胞中表达极弱。结论成功构建能在内皮细胞特异性表达人VEGF基因的真核表达载体;HRE.ppET-1调控元件具有内皮细胞表达特异性,为进一步利用VEGF进行缺血性脑损伤的基因治疗奠定良好基础。
- 郑湘榕张珊珊杨于嘉谭洁璐
- 关键词：缺氧反应元件血管内皮生长因子内皮细胞
- 大鼠胎脑神经干细胞的分离培养及电穿孔转染被引量：7
- 2009年
- 目的分离培养大鼠胎脑神经干细胞（NSC），研究电穿孔技术在NSC中的转染效率。方法从SD胎鼠脑组织中分离、培养和扩增NSC，利用免疫荧光组织化学技术对NSC及其分化细胞进行鉴定。使用电穿孔技术将质粒pEGFP．N1转染人NSC，利用其表达的绿色荧光蛋白（GFP）作为转染成功的报告物或标记物，在荧光显微镜下根据发出绿色荧光的NSC数量，计算出转染效率。结果从SD胎鼠脑组织中分离的细胞在体外可长时间自我增殖，原代及传代克隆细胞均表达NSC的特异性抗原巢蛋白，且诱导分化后可表达星形胶质细胞的特异性抗原-胶质纤维酸性蛋白（GFAP）和神经元的特异性抗原．神经元特异性烯醇化酶（NSE）。用电穿孔技术转染神经干细胞，其效率为17．9％～69．1％，平均30．5％。结论本实验成功分离出具有自我增殖和多向分化潜能的胎鼠NSC，并证实电穿孔技术可对其进行高效转染，为进一步研究NSC的转基因治疗提供实验基础。
- 刘春江尹飞郑湘榕张珊珊谭洁璐
- 关键词：神经干细胞电穿孔转染
- HRE调控VEGF表达转染NSCs的实验研究
- ：获得表达血管内皮生长因子(VEGF)的基因工程神经干细胞(NSCs),研究缺氧反应元件(HRE)在缺氧条件下是否能提高VEGF基因的表达,以期为缺氧缺血性脑损伤寻求一种安全、高效的基因治疗方法.方法：分离胎龄14d的S...
- 谭丹凤郑湘榕张珊珊
- 关键词：缺氧缺血性脑损伤神经干细胞缺氧反应元件
- 慢病毒介导HRE调控VEGF基因转染神经干细胞的实验研究
- 目的 构建具有缺氧诱导特性的高表达血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的基因工程神经干细胞(neural stem cells,NSCs),体外实验分析低氧反...
- 郑湘榕谭丹凤张珊珊杨于嘉尹飞王霞钟乐余小河
- 腺病毒载体介导血管内皮生长因子165基因治疗新生大鼠缺氧缺血性脑损伤被引量：3
- 2009年
- 目的研究腺病毒介导血管内皮生长因子（VEGF）。基因转移对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）的治疗作用。方法采用细菌内同源重组技术构建腺病毒重组载体Ad—VEGF。7日龄SD大鼠随机分成3组：假手术组（20只）、H1BD（20只）、Ad—VEGF移植组（Ad—VEGF组，20只），Ad．VEGF移植组在HIBD后3d于大鼠左侧感觉运动皮层区（坐标AP：＋0．3mm，ML：-2mm，DV：-1．5mm）立体定位注射2μl重组体腺病毒悬液。移植后7d采用免疫组织化学法检测鼠脑VEGF蛋白；采用原位缺口末端标记法（TUNEL法）检测鼠脑神经元凋亡情况；大鼠3～4周龄时采用T迷宫觅食实验及足错误、姿势反射、肢体放置实验对其学习记忆、空间能力和感觉运动功能等行为学进行评估；采用尼氏染色法检测鼠脑海马CA1区和皮层单位面积内神经元数目。结果免疫组织化学法结果显示皮层与海马Ad—VEGF组VEGF阳性细胞数均明显多于HIBD组（68．09±3．37比24．65±3．37，68．37±3．17比25．14±1．86，均P〈0．05）。TUNEL结果显示Ad—VEGF组鼠脑神经元凋亡数目明显低于HIBD组（151．4±21．7比264．4±16．3，P〈0．05）；行为学检测结果显示Ad—VEGF组的各项行为学测试成绩均较HIBD组有明显改善（均P〈0．05），尼氏染色结果显示Ad-VEGF组鼠脑海马CA1区和皮层单位面积内神经元数目明显多于HIBD组（70．6±2．3比55．3±2．1，95．1±2．8比70、1±2．7，均P（O．05）。结论腺病毒载体介导的VEGF165基因治疗可增加VEGF蛋白的表达，减少脑细胞凋亡、改善脑损伤后的远期行为学功能，减轻缺氧缺血后的脑损伤，具有神经保护作用。
- 郑湘榕张珊珊尹飞杨于嘉钟乐王霞余小河
- 关键词：血管内皮生长因子类基因治疗
