张松涛
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
- 供职机构：山东大学生命科学学院微生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：山东省科技攻关计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- Ezrin的原核表达及与其相互作用蛋白的研究被引量：1
- 2009年
- 目的体外筛选人胰腺癌细胞中与Ezrin蛋白相互作用的蛋白。方法提取人胰腺癌Panc-1细胞总RNA,RT-PCR法扩增Ezrin基因。将扩增得到的Ezrin基因片段和pET15b质粒转化E.coli DH5α,获得pET15b-Ezrin重组质粒,双酶切后测序鉴定。将测序正确的重组质粒转化至E.coli BL21-CodonPlus(DE3)-RIL,以异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,对表达产物进行Ni2+-NTA亲和层析和分子筛纯化后,行SDS-PAGE、MALDI-TOF-MS/MS质谱分析和蛋白质印迹鉴定。裂解Panc-1细胞,获得总蛋白提取液,采用Pull-down方法体外筛选与Ezrin重组蛋白相互作用的蛋白,并对筛选出的目的蛋白进行双向凝胶电泳和MALDI-TOF-MS/MS质谱鉴定。结果RT-PCR扩增出的Ezrin基因片段(1761bp)与理论DNA表达片段大小一致,测序鉴定显示克隆的Ezrin基因序列与GenBank报道序列相符。SDS-PAGE、质谱分析和蛋白质印迹分析显示纯化后Ezrin重组蛋白相对分子质量为69400,与质谱分析的相对分子质量结果相符,为带有His-6标签的特异蛋白。双向凝胶电泳和质谱鉴定结果共筛选出可与Ezrin重组蛋白相互作用的7种蛋白,其分别为RNA-binding motif protein39(RBM39)、Transgelin(TAGLN)、Albumin(ALBU)、Formin-1(FMN1)、Rho GTPases(RHGBA)、Tetratricopeptide repeat protein16 (TTC16)、Syntaxin-binding protein1(STXBP1)。结论在大肠杆菌中成功表达、纯化了Ezrin蛋白,并在体外成功筛选出可信的与Ezrin蛋白相互作用的蛋白。
- 周小艳韩金祥崔亚洲张松涛钟宁宋冠华
- 关键词：细胞支架蛋白质类胰腺肿瘤
- 超嗜热古菌遗传操作系统研究进展被引量：1
- 2009年
- 遗传操作系统,是研究基因和基因产物功能的一个极为重要的工具。超嗜热古菌遗传操作系统方面的研究落后于甲烷菌及嗜盐古菌中的研究,主要原因是选择标记的缺乏。然而,近十年来,在以硫化叶菌(Sulfolobus)为代表的超嗜热泉古菌和Thermococcus kodakaraensis为代表的超嗜热广古菌中,遗传操作系统研究取得了很大的进展。本文主要对这两种超嗜热古菌的遗传操作系统进展以及应用进行概述。
- 王飞雁张松涛黄奇洪申玉龙倪金凤
- 关键词：超嗜热古菌遗传操作系统SULFOLOBUSTHERMOCOCCUS
- 硫化叶菌Sulfolobus tokodaii解旋酶HerA的生化性质研究及体内功能的初步分析
- 古菌是与真核生物和细菌并列的第三种生命形式,被认为是真核生物和细菌的嵌合体,其代谢方式类似于细菌而遗传信息的加工则和真核生物类似。古菌大多数生活在高温、高压、极端pH、强离子辐射等极端环境下,其基因组更容易遭受环境的胁迫...
- 张松涛
- 关键词：双链断裂古菌解旋酶HERA遗传操作系统
- 文献传递
