张晓明
- 作品数：16 被引量：21H指数：3
- 供职机构：广州动物园更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 小熊猫源犬瘟热病毒DNA疫苗构建及其在真核细胞的表达
- 2015年
- 根据Gen Bank中发表的犬瘟热病毒(CDV)的基因组序列设计了H和F基因的2对引物,通过RT-PCR扩增出从发病小熊猫分离的CDV的H和F基因,并将其克隆入到18T-simple载体上进行测序。使用Kpn I和Xho I限制性内切酶对重组载体进行双酶切并将目的基因克隆到pcDNA 3.1表达载体上,构建完成后转染293T细胞,转染48 h后,再利用RT-PCR和Western-blot检测目的基因的转录和目的蛋白的表达。结果表明,表达载体经转染后,在293T细胞中,目的基因均能得到转录而且正确表达。这为下一步基因疫苗的研究奠定了良好的基础。
- 张晓明陈武彭仕明
- 关键词：犬瘟热病毒DNA疫苗真核表达
- 虎源传染性鼻气管炎病毒巢式PCR检测方法的建立被引量：3
- 2015年
- 为了建立虎源传染性鼻气管炎病毒巢式PCR(nested PCR)的快速鉴定方法,根据虎源传染性鼻气管炎病毒(FHV-1)的gD蛋白基因序列设计套式引物,进行特异性、敏感性和重复性实验,特异性试验表明,该方法可以特异扩增出FHV-1的gD基因片断,从猫泛白细胞减少症病毒、猫支原体和阴性对照的VERO细胞均未扩增出该条带,敏感性试验表明,nested PCR检测极限是1×10~2 copies/μl,而一步法PCR的有效扩增最低极限是1×10~5 copies/μl,前者的敏感性明显高于后者,重复性实验表明,不同情况下3次重复性试验,结果相同。用nested PCR对疑似感染FHV-1的样品进行检测,实验结果与病毒分离鉴定结果一致。本研究建立的nested PCR适用于野生猫科动物FHV-1感染的快速诊断与流行病学调查。
- 李林翔韦增晖张晓明彭仕明陈武
- 关键词：巢式PCRGD基因
- 华南虎和东北虎β-干扰素基因的克隆与遗传进化分析被引量：2
- 2015年
- 采集新鲜东北虎与华南虎的血液,提取基因组DNA,采用PCR技术扩增β-干扰素（IFN-β）基因,克隆到p MD19-T载体上,转化大肠杆菌DH5α,进行菌液PCR鉴定,筛选阳性重组克隆。核苷酸序列分析证实,所克隆到的老虎IFN-β基因全长561 bp,编码187个氨基酸,核苷酸序列同源性为99.3%～99.5%。同时将核苷酸序列与其他几种哺乳动物进行遗传进化分析,其同源性在60.8%～98.4%。东北虎和华南虎及其他8种动物的IFN-β基因序列分析和系统进化分析表明,IFN-β基因存在种属的差异性,亲缘关系越近,同源性越高;老虎IFN-β基因的成功克隆,为进一步研究猫科动物IFN-β基因表达、生物学活性和应用奠定基础。
- 李林翔程松张晓明韦增晖陈武
- 关键词：华南虎东北虎克隆测序进化分析
- 犬瘟热病毒DNA疫苗构建及其在真核细胞的表达
- 目的 构建包含有犬瘟热病毒(CDV)H、F和N基因的真核表达载体，为制备犬瘟热病毒DNA疫苗做准备.方法 根据Genbank中CDV的基因组序列设计了H、F和N基因的3对引物，通过RT-PCR扩增病毒基因组，扩增H、F、...
- 苏乔张晓明苏力蔡勤辉陈武陈虹黄晓卉王东罗满林
- 关键词：犬瘟热病毒DNA疫苗真核表达
- 表达大熊猫犬瘟热病毒H、F基因重组山羊痘病毒的疫苗、其制备方法及免疫应用方法
- 本发明公开了一种表达大熊猫犬瘟热病毒H和F基因重组山羊痘病毒的疫苗，疫苗中含有以山羊痘病毒为载体，分别转染表达大熊猫犬瘟热病毒H或F基因的重组转移载体质粒pTK‑H‑Eg或pTK‑F‑Eg而获得的重组山羊痘病毒vpTK‑...
- 陈武程松罗满林郑敏黄勉吴其锐彭仕明单芬李婉萍张晓明植广林张马龙陈绚姣党楠楠梁玉珍左珂菁李少基
- 文献传递
- 一种刨花润楠的组培繁殖方法
- 本发明涉及一种刨花润楠的组织培养方法，属于植物组织培养技术领域；该方法是通过外植体处理、消毒，不同激素种类及浓度水平配比优化，以刨花润楠种子为外植体，经过不定芽诱导、芽增殖培养和生根培养，形成完整植株。该发明弥补了以刨花...
- 邓小梅陈怡佳陈晓阳湛欣张晓明
- 文献传递
- 一种米老排成年优良单株的离体植株再生方法
- 本发明公开了一种米老排成年优良单株的离体植株再生方法，属于植物的组织培养技术领域。该方法通过基本培养基设置、不同激素成份及浓度水平配比优化，以成年优株基部萌枝为外植体，经腋芽诱导、腋芽增殖和生根培养，形成完整植株，移栽到...
- 邓小梅陈怡佳陈晓阳湛欣张晓明
- 文献传递
- 表达大熊猫犬瘟热病毒H、F基因重组山羊痘病毒的疫苗、其制备方法及免疫应用方法
- 本发明公开了一种表达大熊猫犬瘟热病毒H或F基因重组山羊痘病毒的疫苗，疫苗中含有以山羊痘病毒为载体，分别转染表达大熊猫犬瘟热病毒H或F基因的重组转移载体质粒pTKHEg或pTKFEg而获得的重组山羊痘病毒vpTKHEg或v...
- 陈武程松罗满林郑敏黄勉吴其锐彭仕明单芬李婉萍张晓明植广林张马龙陈绚姣党楠楠梁玉珍左珂菁李少基
- 一种米老排成年优良单株的离体植株再生方法
- 本发明公开了一种米老排成年优良单株的离体植株再生方法，属于植物的组织培养技术领域。该方法通过基本培养基设置、不同激素成份及浓度水平配比优化，以成年优株基部萌枝为外植体，经腋芽诱导、腋芽增殖和生根培养，形成完整植株，移栽到...
- 邓小梅陈怡佳陈晓阳湛欣张晓明
- 文献传递
- 虎源传染性鼻气管炎病毒gD基因重组真核表达载体的构建被引量：5
- 2014年
- 根据从虎气管组织扩增获得的猫传染性鼻气管炎病毒相关核酸序列,设计扩增编码虎源猫传染性鼻气管炎病毒gD蛋白基因片段的引物,通过PCR扩增出gD基因片段,并成功插入到pMD18-T Simple载体中,筛选获得重组质粒,命名为18T-gD。重组质粒通过HindⅢ和XhoⅠ酶切后,插入pcDNA 3.1(+)真核表达载体构建出gD基因的重组真核表达质粒pcDNA-gD。用脂质体将重组真核表达质粒pcDNA-gD转染293T细胞,通过RT-PCR和Western blot检测,结果显示gD基因在真核细胞中得到正确转录和表达,所表达蛋白分子质量约为42.29ku,为虎源猫传染性鼻气管炎基因疫苗的研究奠定了基础。
- 张晓明胡俊彭仕明陈武
- 关键词：GD基因聚合酶链反应真核表达
