- 脑内移植基因修饰细胞治疗帕金森病被引量：7
- 1997年
- 由于供体来源困难,脑移植治疗帕金森病在临床上的应用受到限制。作者将酪氨酸羟化酶(TH)基因导入NIH-3T3细胞,这种经TH基因修饰的细胞,呈TH免疫组化阳性反应,并能产生左旋多巴。将其作为供体移植治疗帕金森病模型大鼠。移植后第3、6、9和12天,旋转行为分别改善52.6%、68.4%、63.2%、44.7%。作者认为,本实验结果具有潜在的临床应用价值。
- 唐镇生应其龙彭鲁英江澄川宋后燕
- 关键词：震颤性麻痹基因治疗基因转移
- 重组尿激酶型纤溶酶原激活物受体在酵母系统中的表达及鉴定被引量：1
- 1998年
- 构建截断型可溶性尿激酶型纤溶酶原激活物受体（ｕ－ＰＡＲ）的原核及酵母表达质粒并分别在大肠杆菌和Ｐｉｃｈｉａｐａｓｔｏｒｉｓ酵母中高效表达．利用ＰＣＲ扩增截断型可溶性ｕ－ＰＡＲｃＤＮＡ片段，并分别连入酵母及原核表达载体中，构建成表达质粒．后者经诱导表达的蛋白被用于免疫家兔，获得抗ｕ－ＰＡＲ的抗血清，用于对酵母表达产物的鉴定．前者在甲醇的诱导下表达，产物分泌至培养液中．结果表明，原核表达的ｕ－ＰＡＲ蛋白免疫家兔后获得高效价的抗血清，利用此抗血清所作Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ证实酵母表达蛋白具有ｕ－ＰＡＲ的免疫原性，表观分子量４０ｋＤ左右．Ｍｕｔ－表型在第５ｄ为最高（２．５μｇ／ｍｌ），Ｍｕｔ＋表型在第４ｄ为最高（７．５μｇ／ｍｌ）．因此，构建的可溶性ｕ－ＰＡＲ表达质粒在Ｐｉｃｈｉａｐａｓｔｏｒｉｓ酵母细胞获得表达，为进一步竞争拮抗受体功能的研究奠定了基础．
- 唐辉滨何诚彭鲁英于伟英应其龙朱运松
- 关键词：肿瘤酵母
- 绿色荧光蛋白cDNA与Ⅰ型人酪氨酸羟化酶cDNA双基因在体外及大鼠脑内的表达被引量：1
- 1999年
- 酪氨酸羟化酶（ｔｙｒｏｓｉｎｅｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅ；ＴＨ）是儿茶酚氨类神经递质合成过程中的限速酶，脑内移植经ＴＨ基因修饰的细胞，能改善帕金森病动物模型的病理行为［１］，但帕金森病的发病机制比较复杂，单纯补充一个ＴＨ基因不能完全缓解症状，用多因子基因...
- 应其龙朱君明宋后燕
- 关键词：酪氨酸羟化酶CDNA震颤性麻痹基因治疗
- 脑内移植GFP基因修饰细胞的研究被引量：6
- 1999年
- 目的为确定外源GFP基因能否作为标记基因来追踪细胞在植入脑内后的生长情况。方法构建GFP基因真核表达质粒，导入PA317细胞，筛选出GFP高表达的PA317细胞克隆，移植入SD大鼠纹状体，作相应部位的组织冰冻切片，用荧光显微镜观察GFP在脑内的表达。结果GFP高表达的PA317细胞克隆，发出强绿色荧光，被移植入SD大鼠纹状体后．仍发出绿色荧光。结论GFP基因可以作为标记基因追踪细胞在植入脑内后的生长情况。
- 应其龙朱君明宋后燕
- 关键词：绿色荧光蛋白基因修饰脑组织移植GFP
- GFP,TH双基因在NIH-3T3细胞及帕金森病大鼠脑内的表达被引量：6
- 1999年
- 目的以绿色荧光蛋白（ＧＦＰ）作为一个标记，观察ＧＦＰ标记的ＨＴＨ１基因修饰的ＮＩＨ－３Ｔ３细胞在体外及植入脑内后的生长情况，判断ＧＦＰ基因能否作为一种新的筛选标记基因。方法构建同时表达ＧＦＰ和ＨＴＨ１双基因的多基因表达载体ＧＣ－ＧＦＰ－Ｐ－ＨＴＨ１－ＳＮ。并转染ＮＩＨ－３Ｔ３细胞，且移植入Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ病模型大鼠纹状体内。结果用荧光显微镜、流式细胞仪、免疫组化、ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ等方法均检测到ＧＦＰ、ＨＴＨ１在体外和脑内的表达。结论ＧＦＰ可作为一个筛选标记基因，可对目的基因或植入细胞的其他功能性产物的表达进行观察和检测。
- 朱君明唐镇生江澄川应其龙宋后燕
- 关键词：绿色荧光蛋白
- 脑源性神经生长因子和酪氨酸羟化酶双基因在帕金森病大鼠脑内的共表达被引量：3
- 1999年
- 帕金森病（Ｐａｒｋｉｎｓｏｎｓｄｉｓｅａｓｅ，ＰＤ）发病机理研究提示：中脑黑质多巴胺（ｄｏｐａｍｉｎｅ，ＤＡ）神经元退化变性，导致中枢神经递质ＤＡ的合成和分泌显著减少，而出现临床症状。残存的ＤＡ神经元进一步退化变性是其病情进行性加重的病理基础。然而...
- 朱君明唐镇生唐镇生应其龙
- 关键词：震颤性麻痹BDNF酪氨酸羟化酶
- 胚脑神经元冻存和培养的研究进展
- 1994年
- 影响胚脑神经元冻存效果的关键因素有:冷冻保护剂及其浓度、降温和复温速率、储存温度等。以10％DMSO作为冷冻保护剂,以接近1—2℃/分的速率降温,37℃水浴中快速复苏,储存在液氮中,能较好的保证冻存神经元的存活率。冻存的胚脑神经元,培养后继续存活的细胞数比未经冻存的明显减少,但生长、分化情况却无显著差别,仍保持了神经元的形态学特征和特异性酶的表达及递质合成的功能,并能在宿主脑内继续生长、发育、发生整合。
- 应其龙唐镇生江澄川
- 关键词：神经元胚脑冷冻保存
- 胚脑组织冷冻保存
- 1995年
- 影响胚脑组织冷冻保存效果的关键因素有:冷冻保护剂的使用及其浓度、降温和复温速率、储存温度等。经冻存的胚脑组织,复苏后虽然不同程度的受到冻—融损伤,但仍保持了在体外继续生长、分化、特异性酶的表达及分泌递质的特性,移植入宿主脑内后也能继续存活、重新建立突触联系并发挥功能。
- 应其龙
- 关键词：胚胎脑组织冷冻保存
- 人酪氨酸羟化酶基因真核表达载体的构建及在哺乳动物细胞中的表达
- 1995年
- 用限制性内切酶EcoRI从pKS(-)HTH_1切下全长为1.9 kb的人酪氨酸羟化酶基因,在T_4DNA连接酶的作用下连接在真核表达载体pCDNA_3的EcoR Ⅰ位点,构建成重组质粒pcD-NA_3HTH_1,该质粒转染COS-7细胞,免疫荧光组织化学染色证实酪氨酸羟化酶在其中的表达。
- 崔宁宋后燕应其龙江澄川唐镇生
- 关键词：酪氨酸羟化酶CDNA质粒真核表达载体哺乳动物
- 基因治疗帕金森病的实验研究
- 1995年
- 本研究把Ⅰ型人酪氨酸羟化酶(human tyrosine hydroxylase type Ⅰ;HTH_1)cDNA连接到逆转录病毒载体LNSX上,构建成真核表达载体 LNSHTH_1,然后通过in vivo途径转染帕金森病模型鼠的纹状体细胞。外源的HTH_1基因在宿主脑内得到了表达,并使其病理行为改善约70％。这种新的基因治疗帕金森病的方式,有其独特的优越性。
- 唐镇生应其龙江澄川宋后燕崔宁
- 关键词：基因疗法基因转移震颤麻痹
