帖儒修
- 作品数：18 被引量：58H指数：5
- 供职机构：第三军医大学大坪医院野战外科研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- Lipocalin-2基因表达产物对人胚肾细胞增殖的影响被引量：2
- 2008年
- 目的构建Lipocalin-2(Lcn-2)基因真核表达质粒PL-2,并检测其及前期原核表达的重组Lcn-2蛋白对人胚肾细胞HEK293增殖的影响。方法利用RT-PCR从鼠巨噬细胞RAW264.7中扩增Lcn-2基因,克隆入真核表达质粒pEGFP-C1中,构建重组质粒PL-2。转染HEK293细胞,通过荧光观察和RT-PCR鉴定Lcn-2基因的表达。将重组质粒PL-2和前期原核表达的重组Lcn-2蛋白作用于HEK293细胞,通过MTT法检测细胞增殖情况,Westernblot法检测细胞增殖核抗原(PCNA)的表达。结果重组真核表达质粒PL-2经酶切和测序鉴定,证明构建正确。经荧光观察和RT-PCR鉴定,转染重组质粒PL-2的HEK293细胞中有Lcn-2基因的表达。加入重组Lcn-2蛋白后,HEK293细胞较对照组明显增殖,细胞中PCNA的表达也较对照组明显升高,而重组质粒PL-2对HEK293细胞增殖以及细胞中PCNA的表达均无影响。结论已成功构建了Lcn-2基因真核表达质粒,其对HEK293细胞的增殖无影响,而原核表达的重组Lcn-2蛋白对HEK293细胞的增殖有一定的促进作用,推测Lcn-2基因的表达产物可能通过与细胞膜受体结合促进HEK293细胞的增殖。
- 帖儒修朱道银李娜王爽
- 关键词：真核表达原核表达人胚肾细胞增殖
- 流式细胞仪分析76例成人急性粒细胞白血病免疫分型特点被引量：5
- 2010年
- 目的探讨流式细胞仪在急性粒细胞白血病(acute myeloid leukemia,AML)免疫分型中的特点和规律。方法利用流式细胞术中CD45/SSC双参数散点图设门法,对四色荧光素(FITC、PE、PC5、ECD)标记的骨髓血细胞免疫表型分析。取初发患者骨髓单细胞悬液100μl加入到测试管中,再加入特定抗体,室温避光1 h,然后经溶血处理,上机检测。每管均设置同型对照。结果在76例AML中,髓系相关抗原MPO、CD33、CD65表达最高,总阳性率分别为96.1%、94.7%和93.4%,CD13、CD15、CD16的表达率较低,总阳性率分别为50.0%、63.2%和89.5%;CD14、CD64在M4、M4EO、M5中阳性率最高;CD41、CD61在M7中的阳性率最高;CD34在M1和部分M2中强表达,但总阳性率约为46.1%。结论本研究成功分析不同亚型AML的CD45/SSC散点图异常细胞分布的特定位置,同时结合各种不同系列分化特异性抗原的表达综合分析,实现与FAB法在AML分型比较符合率高达97%。
- 张可珺帖儒修陈伟邓少丽陈鸣
- 关键词：白血病流式细胞术免疫分型
- 小鼠Ipr1基因与EGFP基因融合表达载体的构建及其在鼠巨噬细胞中的表达被引量：5
- 2008年
- 目的:构建小鼠胞内病原体抗性基因1(Ipr1)基因与EGFP基因融合表达载体,观察小鼠Ipr1基因在小鼠巨噬细胞株RAW 264.7中的表达。方法:从C57BL/6J小鼠胸腺组织提取总RNA,以RT-PCR法调取Ipr1基因编码序列,克隆至pEGFP-C1载体中,筛选阳性克隆作PCR、酶切及测序鉴定后得到pEGFP-Ipr1,脂质体瞬时转染小鼠巨噬细胞株RAW 264.7,以空质粒pEGFP-C1转染组作为对照。采用RT-PCR法检测Ipr1的RNA水平表达及用激光共聚焦显微镜观察融合蛋白的表达及细胞内定位。结果:扩增出小鼠Ipr1基因编码序列,经PCR、酶切及测序鉴定证明得到正确的重组质粒pEGFP-Ipr1,脂质体瞬时转染小鼠巨噬细胞株RAW 264.7得到了成功表达,Ipr1基因表达产物定位于细胞核内。结论:成功地调取小鼠Ipr1基因,构建了小鼠Ipr1基因与EGFP基因融合表达载体并在小鼠巨噬细胞株RAW 264.7得到了成功表达。Ipr1编码蛋白定位于细胞核内,提示其是一种调节蛋白。
- 李娜朱道银帖儒修王瑜伟
- 关键词：结核病绿色荧光蛋白
- 流式细胞术干/祖细胞分类计数在自体造血干细胞移植治疗恶性血液系统疾病中的应用被引量：3
- 2011年
- 目的建立流式细胞术干/祖细胞分类计数方法,探讨其在自体造血干细胞移植治疗恶性血液系统疾病中的应用价值。方法以抗CD45-PC5/CD34-PE/CD38-FITC建立三色流式细胞术造血干/祖细胞分类计数方法,对患者自体干细胞移植动员效果、单采物质量及回输单采细胞进行定量检测。结果动员后样品检测分析发现,87.5%的患者动员效果较好,单个核细胞含量均在70.0%以上;CD34+细胞总数大于4×106/kg体质量者占90.0%。干细胞冻存样品检测分析发现,CD34+细胞数量冻存后存在一定衰减,但衰减量小于10.0%,经t检验证实冻存前后差异无统计学意义(P>0.05)。结论流式细胞术干/祖细胞分类计数在自体造血干细胞移植治疗恶性血液系统疾病中得到有效应用,单采细胞标本的定量检测为临床判断动员后单采时机、单采细胞质量、单采获得CD43+CD38-造血干细胞量、实际回输患者的CD43+CD38-造血干细胞量均提供了直接的科学数据。
- 刘媛吴丽娟刘毓刚帖儒修
- 关键词：流式细胞术造血干细胞造血祖细胞自体干细胞移植
- 慢性肾功能衰竭患者外周血T淋巴细胞亚群的变迁被引量：3
- 2011年
- 目的了解慢性肾功能衰竭(CRF)患者外周血T淋巴细胞亚群的变化规律,探讨CRF患者的免疫功能状态。方法采用三色流式细胞学检测技术,检测34例CRF患者,34例非CRF患者和194例健康体检者的外周血T淋巴细胞亚群水平,并对其结果进行比较分析。结果 CRF组总T细胞、T4细胞、T8细胞的百分含量(%)依次为62.69±2.00、35.69±1.38和20.90±1.58;T4/T8比值2.19±0.24,总T细胞、T4细胞、T8细胞的绝对含量(×109/L)依次为0.88±0.08、0.50±0.05和0.30±0.03。与非CRF组和对照组比较发现,患者总T细胞、T4细胞、T8细胞绝对含量的减少(P<0.01,P<0.05),总T细胞、T8细胞在淋巴细胞中所占比例的减少(P<0.01,P<0.05),T4/T8比值升高(P<0.01)。结论 CRF患者机体免疫功能紊乱,且以T8细胞功能减低和T4细胞功能相对亢进为特征。流式检测CRF患者T淋巴细胞亚群有助于病情和疗效监测。
- 刘霞胡宗海刘毓刚帖儒修吴丽娟
- 关键词：慢性肾功能衰竭T淋巴细胞亚群流式细胞术免疫功能
- 活化T淋巴细胞亚群检测在肾移植术后急性排斥反应和CMV感染鉴别中的应用被引量：3
- 2011年
- 目的探讨活化T淋巴细胞亚群在肾移植急性排斥反应(AR)和巨细胞病毒(CMV)感染鉴别诊断中的价值和意义。方法采用回顾性调查法,分析移植肾功能正常组(稳定组)、AR组、CMV感染组、健康对照组外周血CD25+HLA-DR-T淋巴细胞和CD25-HLA-DR+T淋巴细胞亚群的含量;外周血活化T淋巴细胞亚群检测采用FSC/SSC设门的三色流式细胞术。结果 AR组患者外周血CD3+CD25-HLA-DR+淋巴细胞亚群和CD3+CD25+HLA-DR-淋巴细胞亚群的百分含量及绝对含量均较对照组明显升高(P<0.01或P<0.05),而CMV感染组仅CD3+CD25-HLA-DR+淋巴细胞亚群的百分含量和绝对含量较对照组升高(P<0.01)。AR组和CMV感染组比较发现,两组患者外周血CD3+CD25-HLA-DR+淋巴细胞亚群之间差异无统计学意义(P>0.05),AR组CD3+CD25+HLA-DR-淋巴细胞亚群的百分含量和绝对含量均较CVM感染组高(P<0.01或P<0.05)。结论外周血CD25+HLA-DR-T淋巴细胞和CD25-HLA-DR+淋巴细胞亚群含量的测定可以用于肾移植患者术后AR和CMV感染的诊断与鉴别。
- 胡晓云吴丽娟刘毓刚帖儒修
- 关键词：肾移植急性排斥反应活化淋巴细胞
- 人颗粒溶素活性肽和小鼠白细胞介素-12基因真核穿梭共表达质粒的构建与真核表达
- 2009年
- 目的构建含分枝杆菌复制子Orim,可分泌表达人颗粒溶素相对分子质量为9000的活性肽与小鼠白细胞介素-12(mIL-12)的真核穿梭共表达质粒,并检测其蛋白表达。方法以含有颗粒溶素cDNA序列的质粒为模板,通过PCR扩增获得相对分子质量为9000的颗粒溶素活性肽基因片段后,定向插入真核表达载体pBudCE4.1中,获得重组表达质粒pBudCE4.1-S9K,经双酶切及插入片段测序对质粒进行鉴定。同时,将mIL-12亚克隆入pBudCE4.1另一多克隆位点,构建真核共表达质粒pBudCE41-S9K/mlL-12。然后,将分支杆菌复制子Orim亚克隆入真核共表达质粒pBudCE4.1-S9K/mlL-12,形成穿梭共表达质粒。采用RT-PCR、免疫细胞化学法,检测颗粒溶素活性肽在RAW264.7细胞的瞬时表达与分泌。ELISA检测mIL-12的表达。结果酶切、PCR及测序鉴定证实,颗粒溶素活性肽基因插入片段正确;RT-PCR和免疫细胞化学检测表明其可以在细胞中瞬时表达;ELISA检测细胞培养上清有mIL-12表达。结论成功构建穿梭共表达质粒pBM9,并能体外表达。
- 张黎王瑜伟何永林帖儒修
- 关键词：颗粒溶素白细胞介素12真核表达
- 结核分枝杆菌RpfA蛋白的原核表达、鉴定和纯化被引量：1
- 2008年
- 目的:构建结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)复活促进因子A(Resuscitation-promoting factor,ARpfA)的原核表达质粒,并在大肠杆菌中表达和纯化。方法:采用聚合酶链反应(PCR)方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA中扩增出RpfA基因(1 224bp),然后用双内切酶消化后,与同样酶消化的pET32aα(+)载体连接,转入大肠杆菌Top10;阳性克隆用酶切和DNA测序鉴定。测序正确后,将重组质粒转化到的大肠杆菌BL21中,经IPTG诱导,由T7启动子调控表达了RpfA蛋白;利用His-tag in-gel Stain对表达蛋白进行鉴定,最后对目的蛋白进行纯化。结果:双酶切鉴定所切下的片段大小与理论值相符,测序结果与文献报道一致。经SDS-PAGE分析和His-tag in-gel Stain鉴定均发现66ku处有特异性蛋白条带。结论:成功克隆并构建了RpfA基因的重组表达质粒pET32α(+)-RpfA,并获得了高纯度的重组蛋白,为以后的深入研究奠定了基础。
- 徐蕾帖儒修王爽王瑜伟李娜何永林蒋仁举
- 关键词：结核分枝杆菌克隆纯化
- 结核分枝杆菌阿拉伯糖基转移酶AftA的原核表达及鉴定被引量：2
- 2008年
- 目的构建高效表达菌株,以大量表达结核分枝杆菌AftA蛋白,为后续的抗结核药物的筛选奠定基础。方法采用PCR法从结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA中扩增出AftA的基因片段,将其插入原核表达质粒PQE30,构建重组质粒PQE30-aftA。将PQE30-aftA转化大肠杆菌,用IPTG诱导目的基因表达。Western-blotting免疫印迹法鉴定后纯化该表达产物。结果经核苷酸序列测定和酶切鉴定结果表明,成功构建了重组质粒PQE30-aftA。在大肠杆菌M15中用IPTG诱导表达后,获得了AftA蛋白。蛋白经SDS-PAGE分析约为69.5kD。免疫印迹分析证实目的蛋白与阳性结核病患者抗血清产生特异性反应。结论成功制备出重组的AftA蛋白,为新型抗结核药物的筛选奠定了物质基础。
- 王爽朱道银帖儒修李娜王渝伟
- 关键词：结核分枝杆菌原核表达
- 1例慢性粒细胞白血病慢性期和急变期骨髓白细胞免疫表型的变化被引量：3
- 2013年
- 目的通过对1例典型慢性粒细胞性白血病患者慢性期(CML-CP)和急变期(CML-BP)骨髓髓系细胞免疫表型变化特征的描述,探讨流式检测骨髓细胞免疫表型在疾病诊断、预后中的意义。方法利用流式细胞术对1位CML患者慢性期及急变期骨髓白细胞免疫表型进行对比分析,并结合临床表现、外周血象、骨髓血细胞形态、FISH及FQ-PCR等相关检测结果。结果与CML-CP相比,CML-BP时该患者脾脏进行性增大;外周血象出现83%的异常原始细胞,FISH显示BCR-ABL阳性细胞比例由83%增加到99%;FQ-PCR显示BCR-BAL融合基因拷贝数增加;骨髓原始粒细胞由0.5%增加到79.5%。FCM显示:在CML-CP时,异常原始细胞CD34阳性,但髓系抗原CD33、CD65、CD16和CD14在该群细胞膜表面表达均为阴性,CD34阳性细胞胞浆中cMPO阴性,而CD33强表达;在CML-BP时,非原始粒细胞强表达膜CD33,同时发现有胞浆CD3跨系表达存在。结论 CML-CP时,CML多能干细胞可能存在异常分化过程;CML-BP时,CD33异常表达提示其参与CML急变的过程,CD33在CML-BP原始粒细胞胞浆表达可能具有普遍规律,这将有助于鉴别原发AML和CML-BP。
- 张可珺帖儒修杨绍俊李响陈鸣
- 关键词：流式细胞术慢性粒细胞白血病
