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梅山猪骨髓间充干细胞的分离培养及生物学特性研究: 本研究采用全骨髓法分离培养的BMSCs从生长规律来看，存在早期生长延缓和晚期生长抑制现象，并具有多向分化潜能，分离方法简便，为BMSCs的进一步实验研究提供了良好的细胞模型。; 樊懿萱张艳丽杨岳王子玉宋辉钟部帅孟立王锋; 关键词：骨髓间充质干细胞体外分离培养梅山猪生物学特性

金标孕酮单克隆抗体复合物的制备及鉴定: 2010年; 为了获得高质量的金标孕酮单抗,通过采用柠檬酸三钠还原法,制备出符合要求的30nm胶体金溶液,在此基础上摸索胶体金标记孕酮单克隆抗体的最佳条件,并对其进行质量鉴定。结果发现,用柠檬酸三钠还原法制备的30nm胶体金溶液呈深红色,透射电镜观察,胶体金颗粒大小基本一致;胶体金标记孕酮单克隆抗体的最低稳定浓度为16μg/mL,最适稳定浓度为19.2μg/mL,最适标记pH为8.5。制备的金标抗体复合物经电镜观察,周围有一层明显的低电子密度晕圈,且其D520nm值在0.2～0.4之间。; 许欣孟立王子玉王锋; 关键词：胶体金

转座子Tol2的特性及其在转基因动物中的应用被引量：3: 2009年; Tol2转座子是hAT转座子家族中的一员,是目前发现的唯一一个可以编码具有完整转座酶功能的自主性转座子。已证实Tol2转座子在斑马鱼、鼠、人等多种动物细胞中都具有转座活性,有可能作为脊椎动物特有的转座子系统,在转基因方面具有重要的应用前景。综述了Tol2转座子的结构、转座机制和在脊椎动物转基因生产中的最新研究进展,以期为今后这方面的研究提供参考。; 孟立张艳丽范钦龙黄荣王子玉王锋; 关键词：转基因脊椎动物

高繁殖力黄淮山羊大卵泡颗粒细胞上调表达基因的研究被引量：1: 2010年; 旨在对山羊卵巢有腔卵泡发育中基因表达特点进行研究。本研究应用抑制消减杂交技术(SSH)对黄淮山羊卵泡期卵巢非闭锁大卵泡(6 mm)和小卵泡(4 mm)颗粒细胞内差异表达基因进行了研究,建立了消减cDNA文库,通过斑点杂交分析,从正向文库中随机挑取96个克隆进行差异表达的筛选,结果发现,其中有8个与已知功能基因高度相似,12个全新的表达序列标签(EST)。结果显示,这些基因可能影响着山羊卵泡的发育成熟和排卵。; 庞训胜王子玉应诗家张艳丽吴勇聪闫益波孟立钟部帅王锋; 关键词：黄淮山羊卵泡颗粒细胞抑制消减杂交

诱导性多能干细胞的研究进展及其在再生医学上的应用被引量：2: 2010年; 通过特定转录因子的过表达使体细胞重编程为诱导性多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPS细胞),这一成果引起了整个生命科学领域的广泛关注.由于iPS细胞不仅具有与人类胚胎干细胞(embryonicstem cell,ES细胞)相似的基本特征,而且与ES细胞相比,不存在免疫排斥和伦理道德问题,因此,具有重要的临床应用潜能.目前,iPS细胞主要用于细胞分化和移植,并可提供体外的疾病模型,以便于研究疾病形成的机制、筛选新药以及开发新的治疗方法.从iPS细胞的产生、诱导方法、生物学特征和在再生医学中的应用作以综述.; 樊懿萱张艳丽宋辉闫益波贾若欣孟立王锋; 关键词：诱导性多能干细胞胚胎干细胞重编程

SB转座子介导的hLF乳腺表达载体的构建及鉴定: 引言"睡美人"(sleeping beauty,SB)转座子是Tcl/mariner转座因子超家族中的一员,是应用于脊椎动物中的第一个功能性Ⅱ型转座子,具有易生产、易标准化、分子纯度高、安全性高以及可将外源基因稳定整合到...; 宋洋张艳丽王子玉钟部帅孟立闫益波王锋; 文献传递

梅山猪骨髓间充质干细胞的分离培养及生物学特性分析被引量：6: 2011年; 为建立梅山猪骨髓间充质干细胞(BMSC)体外分离培养方法及对梅山猪BMSC的生物学特性进行分析,本研究采用全骨髓法分离培养并传代梅山猪BMSC,倒置相差显微镜下观察细胞形态,以计数法检测细胞增殖状况,流式细胞术检测细胞周期,细胞压片进行染色体分析,免疫细胞化学和RT-PCR法检测细胞表面标志和转录因子的表达情况,并检测成骨和成脂分化能力。结果显示:梅山猪BMSC体外生长良好,细胞形态呈成纤维细胞样,具有稳定分裂增殖能力;CD29、CD44、CD90等表面标志基因及Fou5F1、Sox2、Nanog等转录因子基因表达呈阳性,CD45、Lin28表达呈阴性;在特定诱导液作用下,BMSC可分化为成骨样细胞及成脂肪样细胞。采用全骨髓法成功分离培养出大量纯度较高的梅山猪BMSC,其生长状态良好,可作为后续BMSC相关研究的种子细胞。; 樊懿萱张艳丽杨岳王子玉宋辉闫益波钟部帅孟立聂海涛葛婷王锋; 关键词：骨髓间充质干细胞体外分离培养梅山猪生物学特性

人乳铁蛋白cDNA乳腺特异性表达载体的构建及其生物学功能分析: 本试验的目的是构建人乳铁蛋白(hLF)基因的乳腺特异性表达载体并验证其在乳腺细胞中的表达情况。本载体以山羊β-casein基因上游包括启动子、外显子1、内含子1、部分外显子2作为5’端调控序列,下游包括部分外显子7、内含...; 孟立张艳丽许欣钟部帅闫益波黄荣宋洋王子玉王锋; 关键词：HLF 生物学功能; 文献传递

精子载体法在转基因家畜中的应用与前景被引量：3: 2010年; 论文综述了精子载体法在家畜(猪、牛、羊)遗传育种、乳腺生物反应器和异种器官移植中的应用,并对其今后发展方向进行了展望。; 黄荣闫益波王子玉张艳丽宋洋孟立王锋; 关键词：精子转基因

人乳铁蛋白cDNA基因乳腺表达载体的构建与鉴定被引量：1: 2011年; 为了构建人乳铁蛋白基因（hLF）的乳腺表达载体并验证其在乳腺细胞中的表达情况,本载体以山羊β-casein基因上游包括启动子、外显子1、内含子1、部分外显子2作为5′端调控序列,下游包括部分外显子7、内含子7、外显子8、内含子8、外显子9及3′部分基因组片段作为3′端调控序列,长度分别为6.2 kb和7.1 kb,将hLF基因（目的基因）和Neo基因（筛选标记）分别插入到5′端调控序列和3′端调控序列的下游,构建成pBC1-hLF-Neo载体,其全长为25.348 kb。为了检测该载体的生物学功能,用脂质体介导法将其分别导入到山羊乳腺上皮细胞GMC和小鼠乳腺癌细胞株C127中进行表达验证,经G418抗性筛选8~10 d,得到了药物抗性细胞克隆,经催乳素、胰岛素及氢化可的松诱导培养,通过RT-PCR、Western blotting以及重组hLF抑菌圈试验表明,山羊β-casein基因启动子驱动的hLF基因能够在C127和GMC乳腺上皮细胞中转录翻译,且重组hLF具有抑制大肠杆菌生长的生物活性,这为下一步建立稳定整合hLF基因奶山羊胎儿成纤维细胞系奠定了基础。; 孟立张艳丽许欣王子玉闫益波庞训胜钟部帅黄荣宋洋王金玉王锋; 关键词：HLF 生物学功能

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