孙黎
- 作品数：22 被引量：59H指数：6
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 利用CRISPR/Cas9技术构建人MCT1基因敲除结肠癌RKO稳定细胞系及其生物学功能检测被引量：1
- 2022年
- 目的利用CRISPR/Cas9基因编辑技术在人结肠癌细胞系RKO中稳定敲除MCT1基因,并检测其生物学功能。方法将CRISPRv2-MCT1-KO#1、CRISPRv2-MCT1-KO#2质粒转染至RKO细胞中,48 h后用含嘌呤霉素的培养液进行筛选,挑取单克隆细胞;利用Western blot和DNA测序技术检测MCT1基因表达情况;利用免疫荧光技术检测MCT1蛋白表达分布变化;通过乳酸试剂盒检测细胞内乳酸水平;通过细胞克隆形成实验以及CCK-8实验检测细胞增殖能力;通过GSEA软件分析MCT1基因在结肠癌中可能参与的信号通路。结果 CRISPRv2-MCT1-KO质粒成功构建;Western blot和DNA测序结果显示稳定敲除MCT1基因的人结肠癌RKO细胞构建成功;与对照组相比,MCT1基因敲除细胞的细胞膜上不能观察到MCT1蛋白,且细胞内乳酸水平明显降低(P<0.01);MCT1基因敲除后RKO细胞增殖能力明显减弱(P<0.01);GSEA分析显示,MCT1可能通过氧化磷酸化、MYC信号通路促进结肠癌发生发展。结论通过CRISPR/Cas9技术成功构建MCT1基因稳定敲除的结肠癌RKO细胞系,可能成为研究MCT1基因在结肠癌发生发展中作用的有效工具。
- 佘晓伟孙黎胡俊波徐丰
- 关键词：乳酸
- KDM4A调控肝癌细胞增殖的机制研究
- 目的:探讨组蛋白去甲基化酶KDM4A(JMJD2A)调控肝癌细胞增殖的作用及机制。方法:293T细胞中包装慢病毒(Lenti-shKDM4A#1, Lenti-shKDM4A#2, Lenti-shctr,Lenti-H...
- 孙黎黄婷婷戴宇翃邹曼邱红
- 关键词：肝癌AKT
- 文献传递
- 微小RNA-29b通过靶向调节Tribbles假激酶2的表达促进结直肠肿瘤的衰老被引量：1
- 2019年
- 目的探讨结直肠肿瘤中微小RNA(miRNA,miR)-29b对Tribbles假激酶2(TRIB2)调节的机制.方法利用网上在线数据库分析潜在结合TRIB2的3'端非编码区(3'UTR)的miRNA,选取其中评分最高的miR-29b进行研究;利用真核细胞转染技术,干扰结直肠肿瘤细胞中miR-29b的表达;蛋白质印迹法(Western blot)以及实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测各组细胞中TRIB2的蛋白及mRNA表达差异;利用双荧光素酶报告基因实验确认miR-29b结合在TRIB2-3'UTR上的具体位置;β-半乳糖苷酶染色法检测miR-29b对结直肠肿瘤细胞衰老的影响.统计学分析均应用SPSS 24.0软件进行,两组间统计学差异通过双尾t检验进行分析.结果在结肠癌细胞株中过表达miR-29b后,与对照组比较,TRIB2的mRNA水平下降至(63.468±4.154)%和(43.145±7.523)%(t=5.351,P<0.01和t=6.074,P<0.01);转入针对miR-29b的inhibitor后,TRIB2的mRNA水平则升高至(205.033±27.070)%和(233.353±18.649)%(t=4.663,P<0.01和t=9.411,P<0.01).与上述结果一致,转入miR-29b则抑制,inhibitor则上调TRIB2的蛋白水平.而在结肠癌细胞中过表达miR-29b后,野生型TRIB2-3'UTR质粒的荧光素酶活性分别下降至(53.531±3.787)%和(45.051±1.728)%(t=6.928,P<0.01和t=15.570,P<0.01),而突变型TRIB2-3'UTR质粒的荧光素酶活性只有轻微下降[下降至(87.366±3.825)%和(92.839±3.171)%,t=5.578,P<0.01和t=2.245,P>0.05].过表达miR-29b后,结肠癌细胞中衰老的细胞比例从41.473%升高至62.085%(χ^2=19.731,P<0.01),同时过表达TRIB2后,则下降至46.866%(χ^2=12.031,P<0.01).结论miR-29b可靶向调控TRIB2的表达,促进结直肠肿瘤的衰老.
- 侯振林王桂华胡俊波王晶孙黎
- 关键词：结直肠癌细胞衰老
- 依托泊苷、伊立替康分别联合顺铂方案不同序贯顺序治疗广泛期小细胞肺癌的回顾性分析被引量：4
- 2013年
- 目的:回顾性比较依托泊苷联合顺铂(EP)与伊立替康联合顺铂(IP)不同序贯顺序治疗广泛期小细胞肺癌(E-SCLC)的优劣性。方法:共90例E-SCLC初治患者。A组一线接受EP方案(依托泊苷:100 mg·m-2,静滴,d1～d3,顺铂:75 mg·m-2,静滴,d1,每3周重复),直到疾病进展,换用IP方案(伊立替康:60 mg·m-2,静滴,d1,d8,d15,顺铂:75 mg·m-2,静滴,d1,每3周重复)序贯治疗;B组序贯顺序与A组相反;统计并比较两组疗效及毒副反应。结果:A组59人,B组31人。两组的总生存时间为12.0月及13.6月,二次进展时间为6.6月及8.4月,一线无疾病生存时间(PFS)为5.1月及6.1月,二线PFS为2.9月及3.2月,均无统计学差异。EP与IP方案的一、二线治疗总反应率(一线:76.27%∶80.65%;二线27.25%∶36.84%)及肿瘤控制率(一线:89.83%∶93.55%;二线85.71%∶73.68%)均无统计学差异。一线治疗中EP方案3/4级中性粒细胞减少(66%∶35%,P=0.003)的发生率高于IP方案,3/4级腹泻(24%∶32%,P=0.012)及呕吐反应(10%∶19%,P=0.005)的发生率低于IP方案。二线治疗时IP方案3/4级中性粒细胞减少发生率增加(58%∶33%,P=0.034)。IP方案作为一线治疗的3/4级中性粒细胞减少(29%∶58%,P=0.017)发生率明显低于作为二线治疗的发生率。结论:有超过60%的患者能接受二线治疗。两种序贯方式近、远期疗效相当。IP作为一线治疗的序贯治疗方案毒副作用更小。IP序贯EP方案是更值得推荐的序贯方案。
- 彭慧庄亮魏瑶孙黎郭秋云邱红
- 关键词：广泛期小细胞肺癌序贯化疗依托泊苷伊立替康
- 穿膜融合多肽TAT-N24增强K562细胞对伊马替尼的敏感性
- 2018年
- 目的探讨穿膜融合多肽TAT-24增强K562细胞(慢性粒细胞白血病细胞)对伊马替尼敏感性的作用。方法常规培养K562细胞,并分为空白组、伊马替尼组(0.5μmol/L)、DMSO组、TAT-N24(100μg/mL)组、TAT-N24(100μg/mL)+伊马替尼(0.5μmol/L)组进行细胞处理。采用BrdU/PI双掺法检测细胞增殖,AnnexinⅤ/PI法检测细胞凋亡,Western blot检测Bcl-2、Ki-67的表达。结果细胞DNA合成检测显示TAT-N24和伊马替尼对K562细胞的增殖均具有一定的抑制作用(P<0.05),且TAT-N24同伊马替尼联用能够较单用显著抑制K562细胞增殖(P<0.01)。细胞凋亡分析显示,各组凋亡细胞比例分别为:空白组(4.82±0.31)%、DMSO组(4.12±0.47)%、TAT-N24组(5.12±0.45)%、伊马替尼组(9.64±1.07)%、TAT-N24+伊马替尼组(20.43±2.37)%;伊马替尼能够诱导K562细胞凋亡(P<0.05),TAT-N24对K562细胞凋亡无明显影响,但TAT-N24能显著增强伊马替尼对K562细胞凋亡的诱导作用(P<0.01),增强K562细胞对伊马替尼的敏感性。通过对各组细胞Ki-67和Bcl-2蛋白的检测进一步证实,联用TAT-24和伊马替尼能显著降低Bcl-2的表达,增强K562细胞对伊马替尼的敏感性。结论融合多肽TAT-24能够有效增强K562细胞对伊马替尼的敏感性。
- 孙黎王桂华来森艳徐丰胡俊波
- 关键词：慢性粒细胞白血病伊马替尼
- KDM4A调控肝癌细胞增殖机制被引量：1
- 2019年
- 目的探讨组蛋白赖氨酸去甲基化酶KDM4A(JMJD2A)调控肝癌细胞增殖的作用及机制。方法293T细胞中包装慢病毒(Lenti-shKDM4A#1,Lenti-shKDM4A#2,Lenti-shctr,Lenti-HA-Myr-AKT,Lenti-HA-vector)。在肝癌细胞系Hep3B中建立KDM4A稳定低表达细胞系及对照细胞系。克隆形成实验检测KDM4A低表达之后细胞增殖状况变化。WesternBlot分析KDM4A对AKT通路激活的影响;通过在KDM4A低表达细胞中稳定表达Myr-AKT,观察AKT信号"Rescue"后细胞生长状态,确定KDM4A依赖于Akt调节肝癌细胞增殖。结果两个KDM4A低表达Hep3B细胞系shKDM4A#1(P<0.01)和shKDM4A#2(P<0.001)克隆形成数目较对照组明显减少。KDM4A低表达后AKT磷酸化水平降低,AKT下游信号P-GSK-3b(ser9)蛋白表达水平显著下降。而在shKDM4A低表达细胞中表达Myr-AKT能够逆转KDM4A对Hep3B细胞增殖的影响。结论KDM4A能够通过激活AKT调控肝癌细胞增殖。
- 孙黎戴宇翃邹曼邱红
- 关键词：肝癌AKT
- 新型冠状病毒气溶胶传播途径的思考及防控建议被引量：10
- 2020年
- 本文于2020年3月14日优先发布于中华眼科杂志官网。2019年12月新型冠状病毒疫情暴发,目前正处于抗击疫情的关键阶段。以往流行病学及动物实验结果表明,部分病毒可以通过气溶胶传播。临床观察发现,新型冠状病毒也具有气溶胶传播的风险,应引起公众广泛关注。本文根据气溶胶的传播特征、以气溶胶为传播途径的疾病病原学特征,探讨新型冠状病毒气溶胶传播途径的可能性,并提出与气溶胶传播相应的防护策略,警示医护人员和普通群众在日常工作及生活中应更加全面防范新型冠状病毒肺炎,为抗击疫情发挥积极作用。
- 余怡娴孙黎姚可娄晓彤梁昕赵博闻牟潜学杜皓赵寅张虹
- 关键词：冠状病毒属病毒性气雾剂疾病传播传染性
- TAT-N24穿膜融合多肽的表达与鉴定被引量：8
- 2010年
- 目的表达并纯化TAT-N24穿膜融合多肽,初步探讨其生物学活性。方法构建pTAT-HA-N24原核表达载体,在BL21大肠埃希菌中表达并纯化TAT-N24融合多肽,利用SDS凝胶电泳检测纯化蛋白的纯度,利用免疫细胞化学和流式细胞术检测TAT-N24融合蛋白的穿膜能力和生物学活性。结果在原核表达系统中成功构建并表达纯化了TAT-N24穿膜融合多肽,其在6 mol/L尿素和DMSO中均具有较好的溶解性,纯化的融合多肽经SDS凝胶电泳分析未见明显杂蛋白混入,利用免疫细胞化学染色可见TAT-N24处理结肠HT29细胞12 h后90%以上的细胞中可检测到TAT-N24,流式细胞术检测细胞周期可见TAT-N24能够有效地诱导细胞周期阻滞,抑制结肠癌细胞生长。结论TAT-N24具有高效的穿膜能力,并能有效抑制结肠癌细胞增殖,可望开发成为有效的肿瘤分子治疗药物。
- 王桂华孙黎邓豫李小兰曹小年来森艳陶德定胡俊波
- 关键词：HT29细胞
- 下调P55PIK基因表达对乳腺癌MDA-MB-231细胞体外增殖和迁移能力的影响被引量：2
- 2012年
- 目的通过RNA干扰(RNA interference,RNAi)抑制P55PIK基因表达,观察下调P55PIK对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231体外增殖和迁移能力的影响。方法利用脂质体将特异性针对P55PIK的siRNA瞬时转染P55PIK高表达细胞株MDA-MB-231,以转染无关序列siRNA(siRNA-NC)和未转染细胞作为对照。通过Western blot检测其对P55PIK表达的下调效果,MTT法和Transwell实验分别检测MDA-MB-231细胞的增殖和迁移能力。结果 siRNA-P55PIK明显下调MDA-MB-231细胞中P55PIK蛋白的表达;MTT检测显示下调P55PIK后,MDA-MB-231生长明显受到抑制;Transwell实验显示siRNA-P55PIK组穿膜细胞数为(5.2±1.3),显著低于siRNA-NC组(18.6±3.8)和空白对照组(18.4±4.3)(P<0.05)。结论应用RNAi抑制P55PIK基因的表达可抑制MDA-MB-231细胞体外增殖和迁移能力,为乳腺癌的靶向治疗提供了新思路。
- 李襄胡艺冰孙黎曹小年王桂华丁庆庆吴亚群胡俊波
- 关键词：乳腺癌RNA干扰增殖迁移
- 高表达GRIM-19诱导结肠癌SW480细胞凋亡被引量：1
- 2010年
- 目的:研究干扰素/维甲酸诱导死亡基因(retinoid-interferon-induced mortality,GRIM-19)对结肠癌SW480细胞凋亡的影响。方法:构建GRIM-19真核表达载体(pCMV-Flag-GRIM-19),转染入SW480细胞中,Western blotting检测GRIM-19及凋亡相关蛋白Bal-xl的表达,采用Annexin-V/PI和线粒体膜电位JC-1染色检测SW480细胞的凋亡。结果:成功构建pCMV-Flag-GRIM-19真核表达载体。pCMV-Flag-GRIM-19质粒转染SW480细胞后,GRIM-19的表达上调,凋亡抑制蛋白Bcl-xl的表达则下调。转染空质粒pCMV-Flag组SW480细胞凋亡率为(7.7±1.39)%,转染pCMV-Flag-GRIM-19质粒后SW480细胞凋亡率为(15.0±2.52)%(P<0.05)。线粒体膜电位检测显示转染空质粒pCMV-Flag组SW480细胞膜电位降低细胞为(7.5±2.09)%,而转染pCMV-Flag-GRIM-19后细胞线粒体膜电位降低细胞为(17.5±3.07)%(P<0.05)。结论:GRIM-19体外转染可有效诱导结肠癌SW480细胞凋亡。
- 王桂华罗学来孙黎邓豫王珅李兆明李小兰陶德定胡俊波龚建平
- 关键词：结肠肿瘤GRIM-19凋亡线粒体膜电位
