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三疣梭子蟹Δ6脂肪酸去饱和酶基因全长cDNA克隆与组织表达被引量：1: 2015年; 旨在探讨三疣梭子蟹高度不饱和脂肪酸自身合成能力,探究三疣梭子蟹HUFA生物合成途径。采用cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆得到三疣梭子蟹△6去饱和酶cDNA全长序列,并利用荧光定量PCR技术进行肝胰腺、肠道、鳃等8种组织的表达分析。通过分析序列表明,基因序列全长2875bp,其中5'非编码区长465bp,3'非编码区长1078bp,开放阅读框(ORF)长1332bp,编码443个氨基酸;并且编码的蛋白序列具有典型的去饱和酶特性:3个组氨酸保守区,一个N端细胞色素b5结构域以及一个血红素结合的HPGG结构域。荧光定量PCR结果显示,Δ6脂肪酸去饱和酶基因在三疣梭子蟹多个组织中均有表达,在肝胰腺中表达量最高,其次是肠道和肌肉,心脏中表达最少。结果表明三疣梭子蟹具有△6去饱和酶。; 施秋燕杨志刚王伟姚琴琴王瑶成永旭; 关键词：三疣梭子蟹脂肪酸去饱和酶组织表达分析

中华绒螯蟹几丁质酶基因HXchit全长cDNA克隆及其在蜕皮过程中的表达分析被引量：2: 2015年; 采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和c DNA末端快速扩增(RACE)技术,依据锯缘青蟹(Scylla serrata)几丁质酶基因的保守区设计引物,克隆了中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)几丁质酶基因(HXchit)全长,并通过荧光定量PCR(q RT-PCR)技术研究了HXchit在中华绒螯蟹的同一蜕皮阶段不同组织、不同蜕皮阶段主要几个组织的表达情况。结果显示,HXchit基因c DNA全长2 042 bp(Gen Bank accession no.KJ513466),包括5′非编码区(5′UTR)35 bp,3′非编码区(3′UTR)537 bp,开放阅读框(ORF)1 470 bp,编码490个氨基酸,预测分子量和理论等电点分别为53.44 k D和4.41。经BLASTN和BLASTX分析,HXchit基因的氨基酸序列与锯缘青蟹几丁质酶的氨基酸序列同源性最高,相似性为75%;经聚类分析,HXchit氨基酸序列与锯缘青蟹几丁质酶聚为一支。q RT-PCR结果显示,HXchit在所检测的组织中均有表达,各组织的表达量依次为肝胰腺>表皮>肌肉>胃>鳃>胸神经节>肠>心脏>脑神经节。对不同蜕皮周期的中华绒螯蟹分析显示,肝胰腺中HXchit表达水平在D期最高,并与E期、AB期及C期呈显著性差异(P<0.05);表皮中HXchit在E期、AB期、C期和D期的表达水平呈逐渐升高的趋势,D期表达量达到最高且与E期、AB期、C期呈显著性差异(P<0.05);肌肉中HXchit表达量在C期最高,但各蜕皮时期的表达量之间差异不显著(P>0.05)。结果表明HXchit是一种在中华绒螯蟹肝胰腺中大量表达的酸性几丁质酶,推测其在蜕皮周期中对几丁质类食物的消化或内源性几丁质的降解起到了重要作用,本研究旨在为进一步探索几丁质酶的准确生理功能和调控机制奠定分子基础。; 姚琴琴杨志刚王瑶郭子好刘启彬施秋燕成永旭; 关键词：中华绒螯蟹几丁质酶蜕皮

中华绒螯蟹EcR基因全长cDNA克隆及表达分析被引量：10: 2014年; 为了研究蜕皮激素受体（EcR）在中华绒螯蟹蜕皮和性腺发育过程中的作用,本实验采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）以及cDNA末端快速扩增（RACE）技术,克隆了中华绒螯蟹EcR基因全长cDNA序列。运用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）方法,分析该基因在不同组织、蜕皮过程及卵巢发育阶段的表达特征,并研究了甲基法尼酯（MF）对卵巢中EcR的调控作用。结果显示,中华绒螯蟹EcR cDNA全长2 156 bp,编码422个氨基酸,其序列与招潮蟹相似性最高,为89%。荧光定量PCR结果显示,EcR在Y器官中表达量最高;在卵巢和肌肉中少量表达;在肝胰腺、鳃、心脏、胃、肠、胸神经节和脑神经节中微量表达。在中华绒螯蟹不同蜕皮时期中,Y器官中EcR表达量在D期和E期的表达量最高;肝胰腺中EcR表达量从AB期到D期有上升的趋势,到E期有所降低;肌肉中EcR表达量在AB期最高;鳃中EcR表达量在D期最高。在中华绒螯蟹卵巢发育过程中,EcR在卵巢发育Ⅰ-Ⅳ期的表达量有上升趋势,到Ⅴ期表达量降低;体外注射实验中,MF1（注射1μg）组的EcR表达量与对照组和生理盐水组无显著差异,而MF2（注射2μg）组的EcR表达量显著上升;离体培养实验中,MF1组（10^-8mol/L）和MF2组（10^-7mol/L）显著高于对照组和生理盐水组。研究表明,EcR基因在中华绒螯蟹蜕皮和卵巢发育过程有重要作用,MF可以调控EcR基因在卵巢中的表达。; 王瑶杨志刚沈城姚琴琴曾奇韬刘启彬成永旭; 关键词：中华绒螯蟹基因克隆蜕皮卵巢发育

中华绒螯蟹ELOVL6 cDNA全长克隆及其表达分析被引量：6: 2016年; 为了探究中华绒螯蟹自身脂肪酸合成能力,采用RACE技术,克隆获得中华绒螯蟹ELOVL6 c DNA序列全长(Gen Bank accession:KT779219)。该序列全长2247 bp,包括235、873和1139 bp的5'非编码区(5'-UTR)、开放阅读框(ORF)和3'非编码区(3'-UTR),编码290个氨基酸(AA),具有ELOVL家族的全部特征:6个跨膜区、高度保守的组氨酸簇HXXHH、多个保守区以及内质网滞留信号KXKXX。分析发育树表明,ELOVL2与ELOVL5聚为一支,ELOVL6聚为另一支,其中中华绒螯蟹ELOVL6与其他节肢动物ELOVL6聚为一支,与凡纳滨对虾聚为一小支。采用异源表达方法研究ELOVL6编码的蛋白质对脂肪酸的作用,GC-MS结果显示,转基因的酵母培养物C16:0和C16:1n-7含量下降,而C18:0和C18:1n-9的含量升高,同时有新产物C18:1n-7产生。通过荧光定量PCR(q PCR)技术研究ELOVL6基因在中华绒螯蟹不同组织及不同脂肪源喂养下的表达情况,显示该基因在肠道、胃、心脏、肝胰腺、胸神经节、肌肉、眼柄、鳃和脑神经节9个组织均有表达,其中在肝胰腺中表达量最高,显著高于其他组织;在不同脂肪源饲喂的结果中,肝胰腺、肌肉、卵巢和精巢4个组织中均有表达,并且各组织在全鱼油组饲喂下表达量最低,其中用全豆油组饲喂后,肝胰腺中的表达情况显著升高,明显高于全鱼油组和鱼油豆油混合组。以上结果综合表明,中华绒螯蟹中ELOVL6能够催化C16的饱和及C16的单不饱和脂肪酸延长,同时受到饲料中不同脂肪源的一定影响,这为探究中华绒螯蟹PUFA合成途径及脂肪酸调控机制提供了依据。; 施秋燕杨志刚姚琴琴成永旭杨青魏帮鸿; 关键词：中华绒螯蟹基因克隆异源表达

中华绒螯蟹高不饱和脂肪酸合成相关基因的初步研究: 高度不饱和脂肪酸(High unsaturated fatty acid,HUFA)是中华绒螯蟹的重要脂肪酸,在中华绒螯蟹繁殖、成活、生长和蜕壳等众多方面都起着无法代替的作用,其在肝胰腺、肌肉等可食部分的含量是决定中华绒...; 杨志刚魏帮鸿成永旭杨青施秋燕姚琴琴郭子好; 关键词：中华绒螯蟹高度不饱和脂肪酸脂肪酸去饱和酶

中华绒螯蟹FAD6-b基因的全长克隆及原核表达分析被引量：3: 2016年; 根据已登录的中华绒螯蟹一种Δ6去饱和酶基因(Accession Number:JX946434)及菁夜蛾去饱和酶基因(Accession Number:KJ622055.1)的保守区设计引物,通过逆转录PCR以及RACE技术克隆了中华绒螯蟹另一种Δ6去饱和酶基因FAD6-b的全长序列。经序列分析,中华绒螯蟹FAD6-b cDNA全长为2 310 bp,其中开放阅读框(ORF)为1 326 bp,共编码442个氨基酸(Accession Number:KP876058),理论分子量为50.86 ku,理论等电点为8.47,FAD6-b基因的氨基酸序列与已公布的一条中华绒螯蟹Δ6去饱和酶基因的一致性为76%。原核表达载体构建及其表达实验表明,中华绒螯蟹FAD6-b基因成功重组到原核表达载体pCold-TF DNA中,重组质粒pCold TF-fad6b在大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中进行表达,经SDS-PAGE电泳分析表明,IPTG诱导后的重组菌出现了单一的蛋白条带,且大小与预期(105.86 ku)一致,可溶性分析显示目的蛋白主要存在于蛋白上清液中。对重组蛋白进行纯化,蛋白纯化液经电泳检测后显示出特异性单一条带,进一步证明了pCold TF-fad6b的成功构建和表达。目的蛋白经Western-blotting检测,结果表明获得的重组蛋白与6×His抗体进行了特异性结合,显示出良好的免疫学活性。; 杨志刚姚琴琴成永旭施秋燕杨青何杰马明君王瑶常东; 关键词：中华绒螯蟹基因克隆原核表达

中华绒螯蟹FAD6-b基因的全长克隆及原核表达分析: 根据已登录的中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)一种△6去饱和酶基因(Accession Number：JX946434)及菁夜蛾(Agrotis segetum)去饱和酶基因(Accession Numb...; 杨志刚姚琴琴施秋燕成永旭; 关键词：中华绒螯蟹基因克隆原核表达

中华绒螯蟹△9脂肪酸去饱和酶基因的原核表达研究: △9去饱和酶(△9 fatty acid desaturase,FAD9)是一种存在于内质网膜上的结合蛋白,其在脂肪酸代谢及细胞膜流动性的调节中发挥着重要作用.实验根据本实验室已克隆得到的中华绒螯蟹FAD9基因的cDNA...; 姚琴琴杨志刚郭子好王瑶刘启彬施秋燕成永旭; 关键词：中华绒螯蟹原核表达重组蛋白

中华绒螯蟹RXR和EcR基因的初步研究: 维甲类X受体(RXR)和蜕皮激素受体(EcR)，属于核受体超家族成员，是一种重要的调控因子，对甲壳动物完成生长发育和繁殖具有十分重要的作用。核受体在结构上可分为6个区，从氨基端到羧基端依次为A-F区，它们组成4个独立的功...; 杨志刚王瑶姚琴琴成永旭; 关键词：中华绒螯蟹 RXR ECR 基因克隆蜕皮卵巢发育

中华绒螯蟹延长酶基因的克隆及其在不同脂肪水平饲料下的表达分析: 本试验根据延长酶保守区序列设计上下游引物,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术及cDNA末端快速扩增(RACE)技术首次克隆得到中华绒螯蟹脂肪酸延长酶(elongase of very long chain fa...; 施秋燕杨志刚成永旭姚琴琴杨青徐泽文徐蕾; 关键词：中华绒螯蟹基因克隆

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姚琴琴

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