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GR基因片段的克隆和可诱导的目标载体的构建被引量：1: 1999年; 为了构建针对小鼠糖皮质激素受体基因第２外显子的可诱导目标载体，我们对小鼠糖皮质激素受体基因第２外显子及其侧翼区域的基因组ＤＮＡ片段进行了结构分析，和部分片段的亚克隆，然后以ｐＦ１ｏｘ质粒为框架构建了可诱导的目标载体。这一载体的构建为进一步建立诱导型ＧＲ基因剔除小鼠奠定了基础，而且对于深入研究ＧＲ基因的表达调控也很有帮助。; 姚玉成胡以平; 关键词：基因剔除糖皮质激素受体

TNF家族的新成员TRAIL cDNA的克隆及其在E.coli中的表达被引量：1: 2000年; 目的 :克隆Trail基因cDNA全长 ,构建Trail的原核表达载体 ,从而建立其原核表达体系。方法 :通过抽提外周血淋巴细胞总RNA进行RT -PCR克隆TrailcDNA ,构建Trail的原核表达载体 ,用限制性酶切和DNA测序进行鉴定 ,以温度进行诱导表达 ,通过SDS -page分析表达产物。结果 :(1)克隆了Trail基因cDNA全长 ,DNA测序结果与报道的完全一致 ;(2 )构建了Trail基因原核表达载体 ;(3)将构建好的载体转化相应的宿主菌 ,诱导后得到了Trail蛋白表达产物。结论 :Trail基因cDNA的克隆将对于其抗肿瘤作用研究有重要意义。; 胡以平姚玉成; 关键词：TRAIL 基因克隆原核表达

EST技术及其在基因全长cDNA克隆上的应用策略被引量：31: 2002年; 随着人类基因组计划的顺利进行 ,EST技术被广泛应用于基因识别、绘制基因表达图谱、寻找新基因等研究领域。利用人类基因组研究不断产生的数据 ,从 ESTs即 c DNA的部分序列入手 ,通过同源筛选 ,获得基因部分乃至全长 c DNA序列 ,避免或减轻了构建与筛选 c DNA文库等繁琐的实验室工作。本文从原理。; 何志颖姚玉成; 关键词：基因克隆生物信息学

TRAIL在细胞中的表达及其诱导凋亡的活性分析被引量：1: 2001年; 以ＰＣＲ方法克隆了ＴｒａｉｌｃＤＮＡ全长，构建了其真核表达载体，通过脂质体转染ＨｅＬａ细胞，４８小时后利用流式细胞仪分析Ｔｒａｉｌ诱导细胞凋亡的比率，发现发生凋亡的细胞为总细胞数的１９％。证实Ｔｒａｉｌ真核表达系统的产物的生物学活性高，为从真核表达的途径获得Ｔｒａｉｌ基因工程产品奠定了基础。; 姚玉成王新民胡以平; 关键词：TRAIL 活性分析细胞凋亡

成体小鼠肝干细胞的长期体外培养和体内分化研究被引量：2: 2002年; 目的:从成体小鼠肝脏中分离培养肝干细胞,并分析其分化潜能。方法:利用门静脉灌流消化法从成体小鼠肝脏中分离细胞并进行体外长期培养,通过脾结节形成实验对其增殖和分化潜能作进一步分析。结果:从成体小鼠肝脏中分离的细胞呈集落样生长,不仅可稳定传代,而且移植至经致死剂量照射的小鼠体内能够形成脾结节,结节中含有肝细胞和胆管上皮细胞特异性标志的细胞。结论:成体小鼠肝脏中存在具有多潜能性的肝干细胞,该细胞的体外成功培养为肝干细胞生物学特性的研究及肝干细胞的应用奠定了基础。; 苏娟朱海英李文林姚玉成刘红王新民胡以平余宏宇; 关键词：肝干细胞体外培养体内分化

干细胞样肝原始细胞的体外分化被引量：1: 2002年; 目的:探讨干细胞样肝原始细胞集落体外分化的潜能。方法:分离孕13.5 d的C57BL/6小鼠胎肝组织细胞并培养,第2天出现圆形或椭圆形干细胞样肝原始细胞集落,随机挑取边界清楚的细胞集落分别培养,利用倒置相差显微镜连续观察细胞生长过程中的形态学变化并用显微摄影记录结果,最后利用免疫细胞化学分析鉴定分化后细胞的性质。结果:干细胞样肝原始细胞集落在体外培养时可形成类似肝小叶的形状,集落中央大部分细胞分化成双核细胞,集落周边细胞仍为单核细胞,但体积明显增大,整个集落中的细胞呈放射状排布。分化后,细胞群中的部分细胞表达成熟肝细胞标志白蛋白(albumin),少部分细胞表达胆管上皮细胞标志细胞角蛋白19(cytokeratin19,CK19),但所有细胞均不表达低分化肝细胞标志α-甲胎蛋白(α-fetoprotein,AFP)。结论:干细胞样肝原始细胞在体外具有多向分化能力,可分化为表达成熟肝细胞和胆管上皮细胞标志的细胞。; 熊俊姚玉成訾晓渊李文林朱海英王新民胡以平余宏宇; 关键词：肝干细胞细胞培养体外分化

Mx-cre转基因小鼠品系的建立及其培育被引量：3: 2001年; 将携带ＭＸ启动子调控的Ｃｒｅ基因真核表达载体ｐＭｘ－ｃｒｅ线性化后，通过受精卵显微注射途径制备转基因小鼠。共注射９９个卵，产仔２０只，利用ＰＣＲ对小鼠进行筛选，以基因组Ｓｏｕｔｈｅｒｎ　ｂｌｏｔ确证，最后得到一个阳性的小鼠品系，进而将其保种和扩大繁殖。; 姚玉成訾晓渊李建秀熊俊谢庆东王新民胡以平; 关键词：CRE基因转基因小鼠

肿瘤凋亡诱导配体基因、基因表达蛋白及其制备方法: 本发明涉及医药生物技术领域，是肿瘤凋亡诱导配体基因、基因表达蛋白及其制备方法。本发明克隆了中国人的Trail全长cDNA，与已报道的欧美人群序列进行比较，发现5’端第598位碱基由C变成G，使其编码的N端第200位氨基酸...; 胡以平姚玉成; 文献传递

乙肝病毒X蛋白诱导HeLa细胞和转基因小鼠肝细胞凋亡的研究被引量：4: 2007年; 背景与目的:探讨乙型肝炎病毒X蛋白在细胞凋亡中的作用。材料与方法:采用基因重组技术构建乙型肝炎病毒x基因的真核表达载体pcDNA3-HBx。脂质体FuGE NE6转染HeLa细胞,并用蛋白印迹检测pcDNA3-HBx在HeLa细胞中的表达。流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:成功构建了可在真核细胞中稳定表达X蛋白的HBx基因真核表达载体pcDNA3-HBx。稳定转染pcDNA3-HBx DNA的HeLa-Xs细胞的凋亡率为9.8%,较空白HeLa细胞的凋亡率(0.4%)以及对照细胞HeLa-Vs细胞的凋亡率(1.3%)高;两只转基因小鼠肝细胞的细胞凋亡率分别为54.4%和40.4%,较正常小鼠肝细胞的细胞凋亡率(6.8%)明显增高。结论:X蛋白可在体外和体内诱导细胞凋亡。; 张南訾晓渊熊俊姚玉成李文林巴月朱海英李建秀王新民胡以平; 关键词：乙型肝炎病毒 X蛋白转基因小鼠

用精原细胞介导法制备乙肝病毒X基因转基因小鼠的实验研究被引量：5: 2003年; 目的　探讨精原细胞介导法制备乙肝病毒 X基因转基因小鼠的可行性。方法　构建乙肝病毒 X基因表达载体 pc DNA3- X;应用微量注射针将脂质体包裹的 pc DNA3- X表达载体直接注入 C57BL/ 6 N雄性小鼠睾丸的曲细精管内 ,于第一次注射后 6周 ,与雌鼠交配 ,用 PCR法和免疫组化法检测仔鼠基因组中的外源 DNA和肝组织中表达的 p X蛋白。结果　测序结果与文献报道一致 ,并且 X基因在 Hela细胞中表达 ;共产仔鼠 16只 ,其中 1只为阳性仔鼠 ,阳性率为 6 .2 5 %。结论　初步证明用精原干细胞介导法制备; 胡火珍李丹李小玉姚玉成胡以平; 关键词：乙肝病毒X基因转基因小鼠精原细胞

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姚玉成