夏庆祥
- 作品数：4 被引量：4H指数：1
- 供职机构：山东农业大学动物医学院更多>>
- 发文基金：山东省自然科学基金国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 猪C3d分子佐剂PRRSV GP5基因核酸疫苗的构建及免疫效果的研究被引量：3
- 2011年
- 【目的】构建猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5基因C3d-P28分子佐剂重组质粒,探明C3d-P28分子佐剂的免疫增强效果。【方法】用大肠杆菌疫苗对健康猪进行免疫激活,提取猪肝脏总RNA,RT-PCR克隆C3d-P28并连接至pUC19载体,构建pUC19-P28.n(2、4、6)串联体,然后分别将P28.n(2、4、6)连接至真核表达载体pcDNA3.1构建成pcDNA3.1-P28.n(2、4、6)。RT-PCR扩增PRRSV GP5基因,分别定向克隆至pcDNA3.1-P28.n(2、4、6)中,构建pcDNA3.1-GP5-P28.n(2、4、6)重组质粒;提取重组质粒进行双酶切、电泳,同时用重组质粒转染Marc 145细胞,经间接免疫荧光进行蛋白表达检测,并用重组质粒免疫小鼠,通过ELISA试剂盒检测小鼠体内抗体、IL-4和IFN-γ的水平,检验重组质粒的免疫效果。【结果】从猪肝脏中克隆了C3d cDNA,构建了pcDNA3.1-P28.n(2、4、6)串联体,并将PRRSV GP5基因定向克隆至真核表达载体pcDNA3.1-P28.n(2、4、6)中,构建了PRRSV GP5重组质粒(pcDNA3.1-GP5-P28.2、pcDNA3.1-GP5-P28.4、pcDNA3.1-GP5-P28.6);通过检测小鼠血清中抗体、IL-4和IFN-γ的结果显示,抗体效价、IL-4和IFN-γ含量均比对照组高,且以pcDNA3.1-GP5-P28.6组的效果最好,与空白对照及PCDNA3.1-GP5组比较差异均显著(P<0.05)。【结论】构建了猪补体C3d-P28分子佐剂PRRSV GP5重组质粒,该质粒可刺激机体产生较高的体液免疫和细胞免疫水平,补体C3d-P28分子佐剂能显著增强PRRSV GP5基因的免疫效果。
- 夏庆祥张德庆吴家强牛星王小龙牛钟相
- 关键词：PRRSV免疫效果
- 猪C3d分子佐剂增强PRRSVGP5核酸疫苗免疫效果的研究
- 基因疫苗主要是由真核表达载体和保护性抗原基因构成的，与传统疫苗相比较，具有设计灵活、安全性高、性质稳定、成本低、同时诱导体液免疫和细胞免疫等优点。然而核酸疫苗同时存在抗体产生慢且水平低的问题，需要加入有效的佐剂才能克服这...
- 夏庆祥
- 关键词：生猪养殖家畜免疫细胞抗原核酸疫苗
- 猪、鼠、鸭补体C3d基因克隆与序列分析被引量：1
- 2011年
- 为了比较猪、鼠、鸭C3d基因的不同,以便为下一步研究不同动物C3d作为分子佐剂核酸疫苗的效果,试验对3种基因进行克隆和序列分析。首先提取猪、鼠、鸭的肝脏总RNA,以RNA为模板,通过RT-PCR方法,分别扩增C3d分子的cDNA,再将3种动物的cDNA分别克隆到pMDl8-T载体中,然后转化BL21大肠杆菌,经酶切鉴定后进行序列测定,根据测序结果利用生物信息学工具软件对3种C3d进行生物学性质分析。结果发现,猪与鼠和鸭的C3d基因的同源性分别为81.9%和65.6%,鼠与鸭C3d基因的同源性为65.8%;鼠、猪的补体C3d分子与受体CR2结合的功能区有28个氨基酸,鸭有29个氨基酸。
- 夏庆祥张德庆吴家强王小龙牛钟相
- 关键词：C3DRT-PCR克隆
- 不同来源沙门菌入侵基因invH的检测及序列分析
- 2011年
- 根据沙门菌invH基因序列设计1对引物,对9株沙门菌和4株常见病原菌进行PCR扩增,并将扩增出的in-vH基因进行克隆及序列分析,应用生物信息学方法预测invH蛋白的T细胞抗原表位。结果表明,9株沙门菌PCR均扩增出519bp的特异条带,4株非沙门菌均无特异带扩增;核苷酸序列分析证实,3株鼠伤寒沙门菌之间同源性为99.8%,与鸡白痢和鸡肠炎沙门菌之间的核苷酸序列同源性为98.6%,3株猪伤寒沙门菌和3株鸡源性沙门菌同源性较低,且不在同一支系统进化树上;invH蛋白有5个重复率最高的T淋巴细胞受体识别的抗原表位。
- 王小龙牛星张德庆夏庆祥牛钟相
- 关键词：沙门菌抗原表位
