周颖
- 作品数：14 被引量：28H指数：3
- 供职机构：连云港市第一人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省自然科学基金江苏省科技支撑计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人脐带间质干细胞来源的exosomes对肝细胞过氧化损伤的保护作用被引量：2
- 2013年
- 目的探讨人脐带间质干细胞来源的exosomes(hucMSC-Ex)对四氯化碳(CCL4)诱导的肝细胞氧化应激损伤的保护作用。方法将体外培养的人肝细胞系HL7702分为对照组(常规培养)、CCL4损伤组及hucMSC-Ex处理组(CCL4+hucMSC-Ex)。免疫荧光检测CM-Dil染料标记的hucMSC-Ex进入HL7702细胞的情况;免疫组织化学法分析细胞过氧化物8-羟基脱氧鸟嘌呤(8-OHdG)的表达水平;比色法检测培养上清中谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)的含量;western blot分析P38MAPK通路的活化情况。结果免疫荧光结果显示,hucMSC-Ex可转移进入HL7702细胞;比色法结果表明,与对照组相比,CCL4损伤组HL7702细胞培养上清中GSH含量下降,MDA上升(P<0.01),hucMSC-Ex处理组GSH和MDA含量无显著性变化;免疫组化结果显示,与对照组相比,CCL4损伤组8-OHdG表达阳性的HL7702细胞(胞核棕黄色)数量明显增高,而hucMSC-Ex处理组阳性细胞数量无明显变化;western blot结果表明,CCL4损伤组P-P38蛋白表达水平明显上升,而hucMSC-Ex处理组P-P38蛋白表达下降,其P-P38与P38/GAPDH蛋白的灰度值较CCL4损伤组下降约2.4倍。结论 HucMSC-Ex可减轻CCL4诱导的肝细胞过氧化损伤。
- 王冰莹肖宇晴蒋留留李里明李霞贾浩源周颖叶惠慧许文荣严永敏钱晖
- 关键词：脐带间质干细胞四氯化碳肝损伤
- 乳腺癌间质干细胞通过IL-6-STAT3信号通路影响乳腺癌MCF-7细胞增殖和迁移被引量：1
- 2023年
- 目的探讨乳腺癌间质干细胞(BC-MSC)对乳腺癌MCF-7细胞增殖与迁移能力的影响及相关机制。方法取乳腺癌患者术后切除癌组织和癌旁组织及健康人骨髓标本,采用组织贴壁法,加入成骨、成脂诱导液诱导分化,分离培养BC-MSC、乳腺癌旁间质干细胞(BCN-MSC)和健康人骨髓间质干细胞(BM-MSC),流式细胞术检测其表面标志。收集BC-MSC、BCN-MSC与健康人BM-MSC培养48 h的上清液,分别用于培养MCF-7细胞,分别为BC-MSC组、BCN-MSC组、BM-MSC组,对照组为常规培养的MCF-7细胞。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各组MCF-7细胞的增殖能力,平板克隆实验检测MCF-7细胞的克隆形成能力,Transwell实验检测MCF-7细胞的迁移能力,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测MCF-7细胞白细胞介素(IL)6及上皮间质转化(EMT)相关基因(E-cadherin、vimentin、snail)mRNA的相对表达水平,蛋白质印迹法检测MCF-7细胞p-STAT3、E-cadherin、vimentin、snail蛋白的表达,Luminex液态芯片技术检测不同间质干细胞(MSC)培养上清中细胞因子水平。将IL-6中和抗体加入BC-MSC培养上清中,用上清培养MCF-7细胞(BC-MSC+IL-6中和抗体组),检测MCF-7细胞增殖与迁移能力及相关基因、蛋白表达的变化。结果成功分离BC-MSC、BCN-MSC、BM-MSC;BC-MSC表面CD29、CD44、CD90阳性表达,CD14、CD34、CD45阴性表达,符合MSC特征。MTT法检测结果显示,对照组、BC-MSC组、BCN-MSC组和BM-MSC组培养48 h的MCF-7细胞的吸光度值分别为0.31±0.02、0.54±0.03、0.43±0.02和0.42±0.02,差异有统计学意义(F=56.52,P<0.05);平板克隆实验结果显示,4组每个平皿克隆数分别为(180±9)个、(439±17)个、(319±16)个和(306±19)个,差异有统计学意义(F=222.70,P<0.05);Transwell实验结果显示,4组穿膜细胞数分别为(6.5±1.0)个、(23.2±2.4)个、(16.0±1.3)个和(14.8±2.0)个,差异有统计学意义(F=49.44,P<0.05);qRT-PCR检测显示,4组IL-6 mRNA相对表达量分别为1.07±0.11、13.7
- 周颖徐会涛张欢欢张楚郑萍杨晋
- 关键词：间质干细胞STAT3转录因子细胞增殖上皮-间质转化
- 胃癌细胞来源的exosomes对人脐带来源间质干细胞的作用研究
- 顾建美高硕周颖钱晖朱伟严永敏毛飞许文荣
- 间质干细胞通过调控miR-92b修复顺铂诱导的急性肾损伤被引量：1
- 2017年
- 目的探讨骨髓间质干细胞(BM-MSCs)修复顺铂诱导的急性肾损伤的分子机制。方法以6 mg/kg顺铂的剂量经腹腔注射大鼠体内,24 h后经尾静脉输注BM-MSCs(BM-MSCs组)或PBS(PBS组),以未注射顺铂者作为正常对照组;HE染色及免疫组织化学染色法检测BM-MSCs对肾损伤的修复情况;体外培养NRK-52E细胞并经顺铂作用6 h后,继续培养48 h(顺铂组)或与BM-MSCs共培养48 h(细胞组),未用顺铂处理的NRK-52E细胞作为对照组;qRT-PCR检测其miR-92b及其靶基因PTEN的表达水平,western blot检测其p-Akt蛋白的表达水平。结果 HE染色结果显示,BM-MSCs组的肾小管蛋白质管型明显少于PBS组,肾小管结构明显改善;免疫组织化学染色结果表明,BM-MSCs组的增殖细胞核抗原(PCNA)阳性细胞数[(131.0±14.4)个]明显高于PBS组[(42.2±6.1)个],差异有统计学意义(t=11.28,P<0.01);qRT-PCR结果表明,体内试验中,与正常对照组miR-92b和PTEN基因的表达水平(1.11±0.78,1.01±0.21)相比,PBS组分别为4.64±1.06和0.61±0.2,差异有统计学意义(P<0.05),BM-MSCs组分别为2.27±0.81和1.1±0.1,差异亦有统计学意义(P均<0.05);体外实验中,与阴性对照组miR-92b和PTEN基因的表达水平(1.12±0.77,1.02±0.13)相比,顺铂组分别为7.64±0.72和0.58±0.2,差异有统计学意义(P均<0.05),细胞组分别为4.38±0.50和1.15±0.23,差异亦有统计学意义(P均<0.05);western blot检测结果显示,与顺铂组p-Akt蛋白的表达水平(0.96±0.18)相比,细胞组p-Akt蛋白表达水平为2.11±0.11,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 BM-MSCs能够修复顺铂诱导的急性肾损伤,可能通过下调miR-92b发挥作用。
- 周颖徐会涛李伟杨晋钱晖
- 关键词：急性肾损伤骨髓间质干细胞
- 胃癌来源间充质干细胞通过JAK2/STAT3信号通路调控胃癌微环境中巨噬细胞向M2亚型极化被引量：2
- 2022年
- 目的探讨胃癌微环境中肿瘤来源间充质干细胞对巨噬细胞M2亚型极化的调节作用及机制。方法胃癌及癌旁正常组织来源于2018年于连云港市第一人民医院行胃癌切除的患者(4例)。将THP-1诱导分化来源的巨噬细胞与胃癌来源间充质干细胞(GC-MSCs)进行体外共培养,细胞分为对照组(Mac组)、细胞上清处理组(Mac+GC-MSC-CM组)、Mac+GC-MSC-TW组、Mac+IL-6-blocked-GC-MSC-CM组、Mac+IL-8-blocked-GC-MSC-CM组和Mac+IL-6/IL-8-blocked-GC-MSC-CM组。采用实时荧光定量聚合酶链反应、流式细胞术和Luminex液态芯片技术,分别评价巨噬细胞中M2亚型相关基因、细胞表面标记蛋白以及细胞因子谱的表达情况。利用Luminex液态芯片技术检测并筛选GC-MSCs中可能发挥诱导巨噬细胞向M2亚型极化作用的关键细胞因子,并采用中和抗体试验进行验证。Western blot法检测GC-MSCs不同处理条件下,巨噬细胞中M2亚型极化相关信号通路蛋白表达情况。结果Mac+GC-MSC-CM组巨噬细胞中M2亚型相关基因Ym-1和Fizz-1表达水平分别为1.53±0.32和13.22±1.05,均高于Mac组(分别为1.00±0.05和1.21±0.38,均P<0.05),iNOS基因表达水平(0.60±0.41)低于Mac组(1.06±0.38,P=0.023)。Mac+GC-MSC-TW组巨噬细胞中Ym-1和Fizz-1基因表达水平分别为1.47±0.09和13.16±2.77,均高于Mac组(分别为1.00±0.05和1.21±0.38,均P<0.05),iNOS基因表达水平(0.56±0.03)低于Mac组(1.06±0.38,P=0.026)。Mac+GC-MSC-CM组和Mac+GC-MSC-TW组巨噬细胞中CD163+和CD204^(+)细胞比例分别为3.80%和4.40%,均高于Mac组(0.60%)。Mac+GC-MSC-CM组巨噬细胞中白细胞介素10(IL-10)、IL-6、单核细胞趋化蛋白1和血管内皮生长因子的表达水平分别为(592.60±87.52)pg/ml、(1346.80±64.70)pg/ml、(11256.00±29.03)pg/ml和(1463.90±66.67)pg/ml,均高于Mac组[分别为(41.03±2.59)pg/ml、(17.35±1.79)pg/ml、(5213.30±523.71)pg/ml和(267.12±12.06)pg/ml,均P<0.05],肿瘤坏死因子α、IP-10、RANTES和巨噬细胞炎症蛋白1α�
- 李伟赵绍林郑萍史沛芹周颖张婷霍娟杨晋
- 关键词：间充质干细胞巨噬细胞极化
- 人脐带间质干细胞来源exosomes分离鉴定及其对细胞生长的影响
- 沈俐纪润璧周颖吴晓丹高硕史云燕钱晖来伟许文荣
- 人胃癌微环境来源间充质干细胞促进胃癌细胞BGC-823的体外增殖、迁移和促血管生成能力被引量：2
- 2016年
- 目的探讨人胃癌微环境来源间充质干细胞(GC-MSCs)能否促进胃癌细胞增殖、迁移及其体外促血管生成能力。方法采用MTT增殖试验和细胞克隆形成试验观察GC-MSCs细胞对胃癌细胞系BGC-823生长的影响;Transwell迁移试验检测GC-MSCs细胞对BGC-823细胞迁移能力的影响;利用管形成试验观察并分析GC-MSCs细胞对BGC-823细胞促血管生成能力的影响;RT-PCR检测GC-MSCs细胞作用BGC-823细胞后其促血管生成相关基因(VEGF、MIP-2和TGF-β1基因)的表达情况。结果 MTT增殖试验和克隆形成试验结果表明,GC-MSCs来源的细胞培养上清可以明显促进胃癌细胞BGC-823的体外生长(P<0.05);Transwell迁移试验结果表明,GC-MSCs来源细胞培养上清对BGC-823的迁移能力具有显著促进作用(P<0.01);RT-PCR检测结果显示,GC-MSCs来源的细胞培养上清可明显上调促血管生成相关因子(VEGF、MIP-2和TGF-β1基因)在BGC-823细胞中的表达水平;管形成试验结果显示,BGC-823和GC-MSCs细胞共培养上清与BGC-823、GC-MSCs单独培养组相比具有更强的促血管生成能力。结论 GC-MSCs可通过旁分泌的方式促进胃癌细胞增殖、迁移及其促血管生成能力,进而诱导胃癌的恶性转化。
- 李伟李海宁周颖
- 关键词：间充质干细胞胃癌迁移血管生成
- 姜黄素诱导不同分化程度胃癌细胞凋亡及保护性自噬被引量：10
- 2017年
- 目的探讨姜黄素诱导不同分化程度胃癌细胞的凋亡及保护性自噬作用。方法采用一定梯度浓度的姜黄素处理不同分化程度的胃癌细胞株BGC－823和MKN－28，采用四甲基偶氮唑蓝法检测细胞的增殖情况，采用流式细胞术分析细胞的凋亡情况，采用吖啶橙染色观察细胞自噬的发生，采用Western blot检测细胞中凋亡通路相关蛋白和自噬标记蛋白的表达。结果姜黄素以剂量和时间依赖的方式抑制BGC－823和MKN－28细胞的活力。姜黄素作用48 h后，BGC－823和MKN－28细胞的药物半数抑制浓度（IC50）趋于接近，分别为15.18和15.84 μmol/L，差异无统计学意义（P＝0.513）。流式细胞术检测结果显示，体外处理48 h后，姜黄素以剂量依赖的方式促进胃癌细胞的凋亡。Western blot检测结果显示，姜黄素可促进BGC－823和MKN－28细胞中bax、active－caspase－3和active－caspase－9凋亡相关蛋白的表达，下调bcl－2的表达。姜黄素处理BGC－823和MKN－28细胞48 h后，可诱导胃癌细胞质中酸性囊状小体的形成、LC3亚型转换以及Beclin1、Atg7和Atg5－Atg12等自噬相关蛋白表达水平的升高。姜黄素可显著抑制胃癌细胞中PI3K/Akt/mTOR信号通路的活化。在姜黄素处理胃癌细胞的体外培养体系中，加入自噬抑制剂3－甲基腺嘌呤，可促进胃癌细胞的凋亡。结论姜黄素可在体外诱导不同分化程度的胃癌细胞凋亡性死亡和保护性自噬的发生，自噬抑制剂联合姜黄素可明显增强姜黄素的抗癌效果。
- 李伟周颖杨晋张欢欢赵绍林张婷霍娟郑萍
- 关键词：胃肿瘤姜黄素自噬凋亡
- 乳腺癌间质干细胞对紫杉醇诱导MCF-7细胞凋亡的作用
- 2016年
- 目的分离、培养、鉴定乳腺癌及癌旁组织来源的间质干细胞(BC-MSCs,BN-MSCs),探讨其对紫杉醇诱导的乳腺癌细胞株MCF-7凋亡的影响。方法采用组织贴壁法分离培养MSCs,成骨成脂诱导法检测其分化能力,流式细胞术分析其表面标记。收集MSCs 48 h的培养上清液(BC-MSCs-CM,BN-MSCs-CM),分别与紫杉醇共同处理MCF-7细胞,MTT实验检测各不同处理组MCF-7细胞的抑制率及细胞生长状况,细胞分析仪检测MCF-7细胞凋亡及细胞活力情况。结果乳腺癌及癌旁组织中能够分离培养出MSCs,显微镜下观察细胞呈长梭形,诱导后可分化为脂肪细胞和成骨细胞,该MSCs高表达CD29、CD90,不表达CD14、CD45表面分子标志;BC-MSCs-CM+紫杉醇处理组的细胞抑制率低于紫杉醇处理组;紫杉醇+BC-MSCs-CM处理组MCF-7细胞凋亡率(27.60%±2.12%)低于紫杉醇组(47.80%±2.59%),差异有统计学意义(P<0.05);紫杉醇+BC-MSCs-CM处理组MCF-7细胞活力(72.07%±2.09%)高于紫杉醇组(51.30%±2.35%),差异有统计学意义(P<0.05)。结论乳腺癌组织中能够分离培养出BC-MSCs,和BN-MSCs相比,BC-MSCs能够显著减少紫杉醇诱导MCF-7细胞的凋亡,增加其活力。
- 徐会涛杨晋周颖张欢欢吴惠毅
- 关键词：乳腺肿瘤间质干细胞细胞凋亡紫杉醇
- M2亚型巨噬细胞对胃癌细胞迁移及上皮-间质转化的影响被引量：4
- 2021年
- 目的探讨M2亚型巨噬细胞对胃癌细胞迁移及上皮-间质转化(EMT)的影响。方法磁性活化细胞分选法(MACS法)分离获得临床胃癌患者肿瘤组织与外周血来源巨噬细胞。采用流式细胞和RT-qPCR分析并评价胃癌微环境中浸润的肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)的亚型。Transwell小室迁移实验检测胃癌组织来源巨噬细胞(GC-TAMs)对肿瘤细胞迁移能力的影响。Western blot和RT-qPCR评价GC-TAMs对肿瘤细胞EMT的调节作用。结果GC-TAMs中CD204+细胞的比例明显高于癌旁组织;GC-TAMs中CD163、CD204、CD206、IL-10和CCL-22等M2亚型相关基因的转录水平明显高于癌旁组织,而M1亚型相关基因IL-23(p19)的转录水平则明显降低。胃癌患者外周血来源巨噬细胞的表面标记蛋白及亚型相关基因表达情况与GC-TAMs相似。体外共培养实验显示,M2亚型GC-TAMs对肿瘤细胞的迁移能力具有明显促进作用,镜下可见胃癌细胞形态发生明显间质细胞样改变,且细胞中EMT相关基因和蛋白fibronectin、vimentin和snail2的表达明显上调。结论胃癌微环境中浸润TAMs以M2亚型为主,且可通过诱导肿瘤细胞发生EMT而对其迁移能力发挥促进作用。
- 李伟郑萍赵绍林周颖李海宁
- 关键词：胃肿瘤巨噬细胞迁移上皮-间质转化
