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preS1分子连接体转运siHBX抑制HepG2-HBX细胞株内HBX表达的实验研究: 2011年; 目的探讨应用preS1分子连接体作为siRNA转运载体对HepG2-HBX细胞株中稳定表达的乙型肝炎病毒X蛋白(HBX)的抑制效果及生物学效应。方法构建HepG2-HBX稳定表达细胞株;化学合成pres1分子连接体及HBX特异性siRNA序列(siHBX);pres1分子连接体分别与肝细胞系及siRNA进行结合能力试验,然后以preS1分子连接体作为转运载体转染siHBX入HepG2-HBX后经实时荧光RT-PCR及Western Blot检测siHBX对HBX基因的抑制效果。结果成功构建了稳定表达HBX基因的HepG2-HBX细胞株,preS1分子连接体能够与siRNA进行有效结合,同时可以携带siRNA进入肝细胞内高效抑制HepG2-HBX细胞株内HBX的表达。与空白组相比,阴性对照组抑制率为(11.94±6.3)%,而阳性对照组(脂质体)及实验组(preS1分子连接体)的抑制率分别为(85.24±2.6)%和(77.80±6.10)%,实验组与空白组及阴性对照组相比,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论 preS1分子连接体可作为一种新型siRNA转运载体,携带siHBX进入肝癌细胞内发挥RNA干扰机制,为乙型肝炎病毒相关性肝脏疾病的治疗提供了新的途径。; 杨兵文阳安黄世峰周倩云张莉萍陈维贤; 关键词：乙型肝炎病毒X蛋白

胆总管结扎对小鼠肝脏炎症和细胞凋亡的影响被引量：4: 2009年; 目的:探讨胆总管结扎引起的胆汁淤积对小鼠肝脏细胞凋亡和炎性细胞浸润的影响。方法:采用胆总管结扎手术制备胆汁淤积小鼠模型;利用全自动生化分析仪检测小鼠血清肝脏生化指标水平;用末端核苷酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷原位缺口末端标记法(Terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dutp nick end labeling,TUNEL)检测小鼠肝脏细胞凋亡;用实时荧光定量PCR和免疫组织化学方法检测肝脏炎症相关基因表达情况。结果:通过胆总管结扎手术成功制备了梗阻性胆汁淤积小鼠模型;小鼠血清生化指标结果表明小鼠肝脏功能受损,胆总管结扎手术成功;胆总管结扎引起胆汁淤积后,肝脏细胞凋亡和坏死明显增加,炎症细胞浸润增强。结论:胆汁淤积导致肝脏细胞凋亡、坏死和炎症活动增强是胆总管结扎致肝纤维化过程中的重要表现。; 董玉芳文阳安周倩云罗丹张莉萍; 关键词：胆总管结扎胆汁淤积细胞凋亡炎症细胞浸润

胆总管结扎引起胆汁淤积对小鼠肝脏细胞增殖的影响被引量：2: 2009年; 目的:探讨胆总管结扎引起的胆汁淤积对小鼠肝脏增殖的影响.方法:采用胆总管结扎手术制备胆汁淤积小鼠模型;利用全自动生化分析仪检测小鼠血清肝脏生化指标水平;用免疫组织化学方法检测小鼠肝脏中增殖相关的指标的表达情况.结果:通过胆总管结扎手术成功制备了梗阻性胆汁淤积小鼠模型;小鼠血清生化指标以及病理组织学变化表明小鼠肝脏功能受损,胆总管结扎手术成功;胆总管结扎引起胆汁淤积后,肝脏细胞有丝分裂相增加,肝细胞和胆管细胞中增殖相关的标志物表达升高,表明细胞增殖活性增强.结论:胆总管结扎引起的胆汁淤积可以引起肝脏细胞以及胆管上皮细胞的增殖.; 罗丹文阳安董玉芳周倩云张莉萍; 关键词：胆总管结扎术胆汁淤积细胞增殖

乙型肝炎病毒X蛋白稳定表达株的构建及沉默效果观察: 2011年; 目的构建稳定表达乙型肝炎病毒X蛋白(HBX)基因的HepG2-HBX细胞系,观察小分子干扰RNA(siRNA)对HBX基因的特异性抑制效果。方法用脂质体将含有HBX序列的真核表达质粒pCDNA3.1(+)/HBX-Flag转染入HepG2细胞系,通过G418筛选后,分别经RT-PCR和免疫组化对HBX的表达进行验证;化学合成靶向HBX的siRNA(即siHBX),转染入HBX稳定表达株,分别以RT-PCR和实时荧光定量RT-PCR检测HBX mRNA表达水平,Western blot检测HBX蛋白表达水平以验证siHBX对HBX基因的沉默效应,流式细胞仪检测细胞周期变化。结果成功构建表达HBX基因的HepG2-HBX细胞系;siHBX可以高效特异抑制HBX表达,并抑制细胞周期进展。结论 siHBX可作为一种靶向抑制肝癌细胞系内HBX表达的策略,为后续HBV感染相关性肝癌的治疗奠定了实验基础。; 杨兵陈维贤文阳安黄世峰周倩云张莉萍; 关键词：乙型肝炎病毒X蛋白肝癌小分子干扰RNA

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周倩云