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鸡毒支原体实时荧光定量PCR检测方法的建立被引量：19: 2011年; 【目的】建立基于鸡毒支原体种特异性粘附蛋白编码基因pvpA的实时荧光定量PCR检测方法。【方法】根据GenBank公布的不同国家和地区鸡毒支原体pvpA基因序列,在高度保守区域设计一对引物。以临床分离鸡毒支原体RC1为模板扩增pvpA基因,将其连接到PMD19-T载体,转化至大肠杆菌DH5α中,经PCR和酶切鉴定并测序验证后得到阳性重组质粒rPvpA90。以rPvpA90为模板建立SYBR Green I荧光定量的标准曲线和溶点曲线,并进行特异性,灵敏性,重复性及临床样本检测试验,评价该方法的可行性。【结果】所建立的荧光定量PCR标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,溶点曲线特异,相关系数为0.990。最低检测限为72拷贝/20μL,其敏感性比常规PCR至少高100倍;无论是对不同病原DNA单模板还是几种病原DNA混合模板进行扩增,该方法都呈现很好的特异性;重复性试验中,批内和批间变异系数均小于2%,表明该方法重现性好;临床样本的检测结果表明所建立的荧光定量PCR检测方法的检测率明显高于常规PCR方法。【结论】本研究初步建立了基于种特异性基因pvpA的鸡毒支原体荧光定量PCR方法,为养禽场诊断和监测鸡毒支原体病原提供一种新的特异、灵敏的方法。; 周云雷魏飞龙李健张小华蒋红霞; 关键词：种特异性鸡毒支原体实时荧光PCR SYBR

耐氟喹诺酮类药物鸡毒支原体DNA回旋酶及拓扑异构酶Ⅳ的突变特征被引量：5: 2010年; 采用二倍稀释法测定临床分离的4株鸡毒支原体对常用抗菌药物的敏感性,PCR方法和基因测序法对鸡毒支原体DNA回旋酶编码基因gyrA、gyrB及拓扑异构酶Ⅳ编码基因parC和parE耐药决定区进行分析。敏感性测定结果表明,4株分离鸡毒支原体对泰乐菌素、泰妙林、沃尼妙林和替米考星有很高的敏感性,对四环素和红霉素中度敏感,对林可霉素、氟苯尼考和氟喹诺酮类药物呈现不同程度的耐药性。4株耐氟喹诺酮类药物鸡毒支原体均在GyrA和ParC的喹诺酮类耐药决定区(QRDR)发生氨基酸的改变,GyrA的氨基酸取代模式有两种,分别为Ser81→Gly和Ser83→Ile,ParC仅在80位发生氨基酸取代(Ser80→Leu),GyrB和ParE均未发生氨基酸改变。; 魏飞龙周云雷沈祥广蒋红霞; 关键词：鸡毒支原体最低抑菌浓度 DNA回旋酶

食品动物源大肠杆菌多重耐药性监测被引量：12: 2011年; 为掌握畜禽源大肠杆菌的耐药情况,了解其对各种抗菌药物的敏感程度,自广东地区临床分离鉴定出294株食品动物源大肠杆菌,采用琼脂稀释法测定294株大肠杆菌对14种抗菌药物的敏感性。结果显示,食品动物源大肠杆菌对各抗菌药的敏感性不同,且多重耐药现象较严重;受试大肠杆菌对四环素和复方新诺明的耐药率较高,均达到80%以上;对第3代头孢菌素类耐药率相对较低。; 汤电郭玉芳王丽华付晓平张小华纪雪薇周云雷刘继蒋红霞; 关键词：大肠杆菌多重耐药性耐药率

以重组PvpA蛋白作为抗原的鸡毒支原体抗体间接ELISA检测方法的建立被引量：8: 2011年; 为建立鸡毒支原体(MG)种特异性检测的间接ELISA检测方法,本研究以原核表达的PvpA蛋白作为包被抗原,初步建立了检测MG抗体的间接ELISA检测方法。特异性试验结果表明,重组PvpA蛋白与鸡新城疫病毒、鸡传染性支气管炎病毒、滑液支原体、大肠杆菌"O"抗原、禽沙门氏菌"O"抗原阳性血清均不发生交叉反应。该方法的批内变异系数小于8%,批间变异系数小于11%,表明具有较好的重复性。采用该检测方法与进口试剂盒对不同省份送检的鸡血清进行检测比较,两者阳性和阴性符合率均达到90%以上。本研究建立的间接ELISA检测方法为MG抗体检测试剂盒的研制奠定了基础。; 周云雷李健魏飞龙张小华蒋红霞; 关键词：鸡毒支原体原核表达间接ELISA

鸡毒支原体病的诊断与防治被引量：6: 2009年; 鸡支原体病是由鸡支原体引起鸡的一类疾病的总称。包括鸡慢性呼吸道疾病、传染性滑膜炎及火鸡支原体病。其中鸡毒支原体是众所周知危害养禽业发展的重要病原，能够引起鸡的慢性呼吸道疾病，其特征为病鸡咳嗽、鼻窦肿胀、流鼻液；气喘并有呼吸啰音、雏鸡生长发肓不良，母鸡产蛋减少，疾病发展缓慢，病程较长，可在鸡群中长期蔓延，给养禽业造成重大经济损失。; 周云雷汤电刘继; 关键词：鸡毒支原体病慢性呼吸道疾病鸡支原体病传染性滑膜炎经济损失养禽业

鸡毒支原体Real Time PCR及间接ELISA检测方法的建立: 鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum,MG)定植鸡的呼吸道是致病的基础,定植过程需要多种黏附蛋白参与。PvpA是近年来鉴定的粘附有关蛋白,暴露于细胞膜表面,能够被鸡的免疫系统识别,而且还具有种特异...; 周云雷; 关键词：鸡毒支原体原核表达荧光定量PCR法间接ELISA法

一种鸡毒支原体间接ELISA诊断试剂盒: 本发明公开了一种鸡毒支原体间接ELISA诊断试剂盒，该试剂盒包括种特异性蛋白PvpA包被的酶标板、洗脱缓冲液、抗体稀释液、酶标二抗、底物显色液和终止液。本发明试剂盒选用种特异性蛋白PvpA，涵盖PvpA蛋白高频变异区DR...; 蒋红霞周云雷曾振灵刘雅红陈杖榴沈祥广; 文献传递

一种鸡毒支原体间接ELISA诊断试剂盒: 本发明公开了一种鸡毒支原体间接ELISA诊断试剂盒，该试剂盒包括种特异性蛋白PvpA包被的酶标板、洗脱缓冲液、抗体稀释液、酶标二抗、底物显色液和终止液。本发明试剂盒选用种特异性蛋白PvpA，涵盖PvpA蛋白高频变异区DR...; 蒋红霞周云雷曾振灵刘雅红陈杖榴沈祥广

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周云雷

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