吴镇宇
- 作品数：3 被引量：6H指数：1
- 供职机构：贵阳医学院附属医院更多>>
- 发文基金：贵州省省长基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人类cyclophilin A基因cDNA的克隆和序列测定被引量：5
- 2003年
- 目的:克隆人类环孢霉素A受体亚型cyclophilinA(CypA)基因,对该基因进行序列测定。方法:利用EST重叠序列拼排技术,设计特异性CypA引物,以人外周血白细胞总RNA为模板,进行RT-PCR扩增,纯化PCR产物,装pGEM-T载体,进行DNA序列测定。结果:成功克隆了人类Cyp A基因cDNA序列的开放阅读框,经DNA序列测定证实序列正确。结论:通过克隆人CypA基因,并克隆人pGEM-T载体,为下一步的基因表达和功能研究奠定了实验基础。
- 任志娟王季石肖芸张维陈剑孙等军张旭吴镇宇方琴
- 关键词：CDNA克隆环孢霉素受体
- 慢性粒细胞白血病MGMT基因的克隆及逆转录病毒表达载体的构建
- 2002年
- 目的 :从慢性粒细胞白血病病人外周血中克隆人MGMT基因 ,并进行逆转录病毒表达载体的构建。方法 :用RT PCR方法从慢性粒细胞白血病病人外周血白细胞中克隆得到长为 6 84bpMGMTcDNA。将该片段与 pGEM T载体连接 ,转化大肠杆菌DH5后得到重组质粒 pGEM T MGMT ,进行限制性内切酶酶切分析、PCR及测序鉴定。再将MGMTcDNA亚克隆到G1Na逆转录病毒载体EcoRⅠ和xhoⅠ位点之间 ,并进行酶切、PCR鉴定。结果 :成功克隆了人MGMT基因 ,经酶切分析、PCR初步筛选及测序鉴定证实序列正确 ,并成功构建到逆转录病毒载体上。结论 :通过克隆人MGMT基因 ,并构建逆转录病毒载体G1Na MGMT ,为探讨将耐药基因导入造血干细胞对烷化剂类化疗药物抗性的研究奠定了基础。
- 肖芸任志娟张维孙等军陈剑吴镇宇张旭方琴王季石
- 关键词：慢性粒细胞白血病MGMT基因克隆
- G156A MGMT体外定点诱导突变及逆转录病毒载体的构建被引量：1
- 2002年
- 目的获得含突变位点G1 5 6A(第 1 5 6位点的甘氨酸突变为丙氨酸 )的六氧甲基鸟嘌呤 DNA 甲基转移酶 (O6 methylguanine DNA methyltransferase ,MGMT) ,并构建含G1 5 6AMGMT(△MGMT)的逆转录病毒载体。方法通过体外定点诱导突变技术产生G1 5 6A突变的MGMT ,将其克隆入pGEM T载体 ,进一步亚克隆至G1Na逆转录病毒载体。结果通过DNA测序分析证实预期位点GGC(甘氨酸 )突变为GCC(丙氨酸 ) ,经PCR及酶切分析证实成功构建了逆转录病毒载体G1Na △MGMT。结论通过体外定点诱导突变技术成功获得了G1 5 6AMGMT ,并运用基因重组技术构建了逆转录病毒表达载体G1Na △MGMT ,为进一步将G1 5
- 肖芸王季石任志绢方琴孙等军张维张旭吴镇宇
- 关键词：逆转录病毒载体
