吴小桃
- 作品数：5 被引量：8H指数：1
- 供职机构：军事医学科学院放射与辐射医学研究所更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 流感泰得小分子化合物修饰前后细胞摄取的比较被引量：1
- 2010年
- 目的在反义寡核苷酸流感泰得(Flutide,FT)上偶联神经氨酸酶抑制剂奥司他韦,以期通过特定小分子化合物的修饰提高细胞对流感泰得的摄取,进而提高其抗流感的作用。方法采用3′荧光标记控孔玻璃珠(3′FAMCPG)合成全硫代修饰的流感泰得,并对其5′端进行巯基修饰,与结构改造后的奥司他韦分子进行连接得到流感泰得与奥司他韦偶联物(FTO);修饰前后的反义药物直接转染流感病毒感染的人肺癌上皮A549细胞,通过荧光显微镜观察及流式细胞技术检测FTO与FT的胞内荧光强度来进行反义药物偶联小分子化合物前后胞内摄取量的比较;采用CCK8细胞增殖检测技术进行FT与FTO体外抗流感病毒活性评价。结果得到一种新的寡核苷酸偶联物FTO;荧光显微镜观察结果显示,细胞给予FTO后荧光强度强于FT;流式细胞检测结果表明,修饰后的FTO胞内平均荧光值明显高于修饰前的FT,其中给药12h时,病毒感染细胞+FTO(BFTO)组的平均荧光值比病毒感染细胞+FT(BFT)组增加了(102.3±56.0)%,正常细胞+FTO(ZFTO)组的平均荧光值比正常细胞+FT(ZFT)组增加了(89.4±44.7)%;给药24h后BFTO组的平均荧光值比BFT组增加了(115.2±28.4)%,ZFTO组的平均荧光值比ZFT组增加了(102.9±12.1)%,(P<0.05);体外抗流感病毒活性评价显示,FTO与FT的IC50值分别为(1.57±0.08)μmol/L与(4.44±0.11)μmol/L。结论流感泰得采用奥司他韦修饰后有助于提高其在细胞内的摄取量以及抗流感病毒活性。
- 杨兰兰鲁丹丹张玉林吴小桃李树赵海豹王升启
- 关键词：反义寡核苷酸奥司他韦细胞摄取正黏病毒科抗流感病毒活性
- 抗乙型肝炎病毒潜在药物靶标的筛选和验证
- 目的:乙型肝炎病毒(HBV)感染是个全球性问题,我国是公认的乙型肝炎病毒(HBV)感染高流行区。随着对乙型肝炎病毒的结构及功能研究的深入,以病毒为靶点的药物研究逐渐引起人们的重视。为此我们比对了HBV各个亚型,选择了其保...
- 吴小桃
- 关键词：HEPG2.2.15
- 文献传递
- 基于Avi-tag技术的人胚肾细胞内增强型绿色荧光蛋白的生物素化、纯化和检测方法被引量：1
- 2011年
- 目的:建立并优化基于Avi-tag标签技术的人胚肾细胞增强型绿色荧光蛋白(eGFP)的定点生物素化标记、纯化和检测方法。方法:分别构建具有Avi-tag标签的eGFP真核表达载体plenti-Avi-eGFP和BirA酶真核过表达载体pQCXIH-BirA,将plenti-Avi-eGFP和pQCXIH-BirA共转染人胚肾293T细胞,12 h后观察Avi-tag标签对eGFP蛋白在细胞内定位的影响;48 h后裂解细胞,用链霉亲和素珠子纯化生物素标记的eGFP,SDS-PAGE观察eGFP纯化和富集情况,并优化基于Western印迹的生物素化eGFP检测方法。结果:Avi-tag标签对eGFP在细胞内的定位无影响,同时BirA酶在293T细胞内可将带Avi-tag标签的eGFP标记上生物素;生物素化的eGFP可特异性地被链霉亲和素珠子纯化和富集,纯度可达95%;Western印迹检测生物素化蛋白的最终条件为5%的BSA作为封闭液和终浓度为100 ng/mL的链霉亲和素-HRP。结论:建立了基于Avi-tag技术的人胚肾细胞内增强型绿色荧光蛋白的生物素化标记、纯化与检测方法,为该方法的广泛应用奠定了前期技术基础。
- 李丹丹李英吴小桃鲁云霞王学军王升启
- 关键词：增强型绿色荧光蛋白人胚肾细胞
- 抑制核转录因子PPARα的反义寡核苷酸的抗乙型肝炎病毒活性研究被引量：6
- 2011年
- 目的:研究靶向过氧化物酶体增殖活化受体α(PPARα)的寡核苷酸是否具有抑制乙型肝炎病毒(HBV)复制的活性作用。方法:反义寡核苷酸作用于能稳定表达HBV丹氏颗粒的HepG2.2.15细胞,ELISA检测细胞上清中HBV表面抗原(HBsAg)及e抗原(HBeAg)的分泌;实时荧光定量PCR考察反义寡核苷酸对HBV DNA复制水平的影响;通过反转录PCR和Western印迹考察反义寡核苷酸作用于细胞后靶基因及靶蛋白的差异表达情况。结果:抑制PPARα表达的反义序列PPARα-2可剂量依赖且特异性地抑制肝癌细胞中HBsAg和HBeAg的表达,且显著降低细胞中PPARαmRNA水平和蛋白水平。结论:通过筛选初步确定了基于PPARα设计的反义寡核苷酸有较好的抗HBV活性,同时也验证确定了PPARα可能成为抗HBV药物的新型作用靶点。
- 吴小桃杨静王学军李丹丹李英鲁丹丹王升启
- 关键词：乙型肝炎病毒反义寡核苷酸
- 抗HBV反义寡核苷酸的筛选
- 2011年
- 目的筛选出对HBV有抑制作用的反义寡核苷酸(AS-ONs),为HBV的预防和治疗提供基础。方法合成5条与HBV互补的反义寡核苷酸,转染HepG2.2.15细胞,运用荧光定量PCR和酶联免疫法测定反义寡核苷酸对细胞培养液中HBVDNA和HBsAg、HBeAg的抑制作用。结果寡核苷酸序列Ⅰ(TAC CTC TTG TAG TGT AGT CCT)在HepG2.2.15细胞能抑制HB-sAg、HBeAg、HBV的DNA表达。结论靶向C基因区AS-ONs能够剂量依赖性地抑制HBV的复制,可能发展成为新型抗HBV药物。
- 陈玉钟芝茵吴小桃陈志武杨静王升启
- 关键词：乙肝病毒寡核苷酸药物
