刘雪婷
- 作品数：5 被引量：1H指数：1
- 供职机构：暨南大学生命科学技术学院更多>>
- 发文基金：广东省科技厅资助项目国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 野生型和突变型FGFR2IIIc胞外段的原核表达及其对肿瘤的抑制作用
- 将野生型和S252W突变型FGFR2Ⅲc胞外段基因克隆到pET3c载体,通过大肠杆菌工程菌株以包涵体形式表达重组蛋白。凝胶层析法复性,肝素亲和层析纯化后,得到纯度大于95%的目的蛋白。通过表面等离子共振,从分子水平测定复...
- 刘雪婷
- 关键词：肿瘤抑制血管形成包涵体FGF-2
- 文献传递
- P253R突变型FGFR2Ⅲc胞外段的表达、复性及活性研究(英文)
- 2011年
- 成纤维细胞生长因子(Fibroblast growth factor,FGF)具有促进细胞增殖,诱导新生血管形成等重要生理作用,与肿瘤的发生及发展也有十分密切的关系。P253R是Apert综合症中发现的一种突变,可使FGFR2IIIc与FGF2亲和力大大增加,从而导致过度自分泌和旁分泌活性,引起骨骼发育异常。从人胎盘组织提取总RNA,通过RT-PCR扩增得到野生型FGFR2IIIc胞外段基因片段(wsFGFR2);再利用重叠延伸法以wsFGFR2基因片段为模板扩增得到P253R突变型FGFR2IIIc胞外段基因片段(msFGFR2,P253R是Apert综合征中发现的一种突变,可使FGFR2与FGF2亲和力大大增加)。msFGFR2基因克隆到pET3c载体,并在大肠杆菌BL21(DE3)中以包涵体的形式表达。经凝胶层析复性和肝素亲和层析纯化得到复性成功的活性蛋白,复性率为12%,纯度大于95%。MTT结果表明,msFGFR2能显著抑制FGF2促NIH3T3细胞增殖能力,并抑制前列腺癌DU145细胞的增殖,提示msFGFR2能有效阻断FGFs的细胞内信号通路,具有很好的产业化和临床应用前景。
- 刘雪婷喻志红何水连陈安安王丁丁何颖张志成汪炬
- 关键词：包涵体复性
- 大肠杆菌中高效表达rhBMP-4的探讨及初步活性测定被引量：1
- 2006年
- 目的:在大肠杆菌中表达具有生物活性的rhBMPBMP4。方法:在不改变氨基酸序列的前提下,以全基因合成的方式对人BMP4成熟肽基因全长进行定点突变,将之重组入pET3c表达载体并转化至大肠杆菌BL21(DE)plysS。IPTG诱导和包涵体复性后,利用C2C12细胞横向成骨细胞分化实验以及小鼠肌袋异位骨形成实验检测其活性。结果:获得0.348kb的BMP4DNA序列,表达的目的蛋白主要以包涵体的形式存在。经纯化及复性后,体内与体外的活性检测表明rhBMP4有良好的诱骨生成活性。结论:该方案能够实现rhBMP4在大肠杆菌中的高效表达。
- 高思红汪炬董群伟刘侃刘雪婷洪岸谢秋玲孙奋勇
- 关键词：定点突变包涵
- 重组TGF β1在大肠杆菌中的表达、纯化
- 2011年
- 目的通过pET 43.1原核表达载体,表达重组人转化生长因子β1(human transform growth fac-tor,rhTGFβ1)。方法将人工整合了肠激酶作用位点的TGFβ1,插入到含有NusA蛋白的融合表达载体pET 43.1中。重组质粒转化大肠杆菌(E.coli)BL21(+)并用IPTG诱导表达。通过镍柱纯化重组蛋白,用Western blot杂交检测重组蛋白的免疫原性,用肠激酶酶切得到TGFβ1单体。结果 SDS-PAGE结果显示,相对分子质量约为70 000的融合蛋白大部分在上清中表达,目的融合蛋白量约占菌体总蛋白量的80%。取超声上清,通过His亲和色谱系统纯化目的融合蛋白,纯度质量分数为95%。肠激酶切割得到TGFβ1单体,经Western blot检测重组蛋白的免疫原性。结论人转化生长因子β1在大肠杆菌中实现了高效表达,获得了具有免疫原性的重组TGFβ1。
- 陈阳刘雪婷肖刚周智优汪炬
- 关键词：转化生长因子Β1大肠杆菌纯化
- FGFR2Ⅲc胞外段的原核表达及其对前列腺癌细胞增殖的抑制作用
- 2009年
- 将FGFR2IIIc胞外段基因转入pET3c载体,并通过大肠杆菌使其以包涵体形式表达。经透析法复性和肝素亲和层析纯化,得到纯度95%以上的目的蛋白。通过免疫共沉淀方法证实复性后的FGFR2IIIc胞外段与FGF2之间可特异性结合,并对前列腺癌DU145细胞的增殖具有明显的抑制作用(MTT法)。免疫印迹结果显示FGFR2IIIc胞外段可显著下调DU145细胞膜上FGFRs的磷酸化水平,提示由于有效阻断FGFs的细胞内信号通路,从而导致FGFR2IIIc胞外段对肿瘤细胞增殖的抑制。
- 何颖汪炬张志成刘雪婷洪岸
