于湘晖 作品数:80 被引量:89 H指数:5 供职机构: 吉林大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 吉林省科技发展计划基金 教育部“新世纪优秀人才支持计划” 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 农业科学 文化科学 更多>>
冻干剂型艾滋病重组痘病毒安卡拉株载体疫苗及其制备方法 本发明的冻干剂型艾滋病重组痘病毒安卡拉株载体疫苗及其制备方法属于生物制品技术领域。是在液体剂型HIV重组MVA病毒载体疫苗中加入由海藻糖、甘露醇、右旋糖苷和肌醇等按比例配伍而成的保护剂,充分混匀,在真空冷冻干燥条件下制备... 孔维 张一折 姜春来 吴永革 于湘晖文献传递 重组HIV-1腺病毒载体活疫苗的冻干保护剂研究 被引量:12 2007年 目的研制重组HIV-1腺病毒载体活疫苗的冻干保护剂。方法在重组HIV-1腺病毒载体活疫苗中加入不同配比的保护剂,在适宜条件下制备成冻干剂型。根据冻干后外观、病毒滴度和热稳定性试验等结果,筛选出冻干保护剂的最适配方。结果以人血白蛋白、海藻糖、甘露醇、右旋糖苷和蔗糖等成分按比例配伍制备的保护剂,对重组HIV-1腺病毒载体活疫苗显示了较好的保护作用。冻干前后疫苗病毒感染性滴度下降在0.17LogCC ID50/ml以内;37℃放置1周,滴度下降0.3LogCC ID50/ml左右;37℃放置3周后,滴度下降约为0.6LogCC ID50/ml。而无保护剂的液体疫苗对照于37℃放置1周,滴度下降近2.5个LogCC ID50/ml。结论以人血白蛋白、海藻糖、甘露醇、右旋糖苷和蔗糖等配伍而制备的保护剂效果较好。 张一折 滕洪刚 吕帅然 姜春来 于湘晖 孔维关键词:冷冻干燥 保护剂 HIV-1中和抗体检测方法的建立 被引量:1 2008年 目的以荧光素酶作为报告基因,表达假病毒,建立快速、有效的HIV-1中和抗体检测方法。方法将HIV-1中国流行株B/C重组亚型和C亚型Envelope基因的真核表达质粒分别与带有荧光素酶报告基因的pNL4-3.Luc.R-E质粒共转染293T细胞,培养48h后收获含有假病毒的上清液,感染表达CD4受体和一个辅助受体CCR5的HOS细胞,培养72h后,裂解细胞,检测荧光素酶含量。结果HIV-1的B/C重组亚型和C亚型Envelope基因真核表达质粒分别与pNL4-3.Luc.R-E质粒共转染的293T细胞,均有HIV-1结构蛋白Gagpol和Env的表达,相对分子质量分别为55000和160000,用产生的假病毒感染HOS-CD4-CCR5/CXCR4细胞后,产生的荧光素酶含量明显高于对照组。结论已建立了瞬时转染检测HIV-1中和抗体的方法,为今后抗体样本及病毒样本的检测提供了参考。 赵东海 张喜珍 马红霞 孔维 于湘晖关键词:人免疫缺陷病毒1型 中和抗体 荧光素酶 假病毒 乙肝病毒C基因及其编码蛋白研究概述 2009年 乙型肝炎是由乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染引起的一种严重危害人类健康的传染病。HBV核心蛋白在病毒的装配、肝炎的发生、发展中起重要作用。本文就HBV核心蛋白的编码C基因、蛋白的结构功能及所引起的细胞免疫应答特点,特别是HBV核心相关抗原(HBV,HBcrAg)作为一种重要的血清学指标在临床上的应用以及BCP(basal core promoter)双突变在对乙肝病情的影响等作了概述。 郭雷 于湘晖 貌盼勇关键词:乙型肝炎病毒 C基因 核心抗原 一种可诱导HIV-1广谱中和抗体的包膜蛋白三聚体免疫原及用途 本发明涉及生物医学领域,涉及一种可诱导HIV‑1广谱中和抗体的包膜蛋白三聚体免疫原及用途。具体涉及基于HIV‑1中国流行株设计的包膜蛋白Env共性基因序列,以及基于该序列获得的稳定的包膜蛋白gp120三聚体免疫原。本发明... 高峰 于湘晖 孔维 于彬 毕金鹏表达HIV-1 Gag-Pol抗原的重组痘病毒的构建及免疫原性 2007年 目的构建稳定高效表达HIV-1Gag-Pol蛋白的重组痘病毒载体疫苗,并检测其体液免疫效果。方法将修饰型HIV-1Gag-Pol基因插入到痘病毒表达载体pSC11m2启动子P7·5下游,经与野生型痘病毒同源重组后,进行蓝白斑筛选。用筛选得到的重组病毒rM-GP转染HEK293细胞,经SDS-PAGE和Westernblot检测表达蛋白。用该重组病毒免疫BALB/c小鼠,并检测体液免疫应答。结果已筛选到稳定高效表达HIV-1Gag-Pol蛋白的重组痘病毒载体rM-GP,经Westernblot,在免疫小鼠血清中检测到抗HIV-1p24蛋白的特异性抗体。结论重组痘病毒载体rM-GP能稳定高效表达HIV-1Gag-Pol蛋白,并能引起有效的体液免疫应答。 滕红刚 姜春来 于湘晖 孔维关键词:人类免疫缺陷病毒 免疫原性 一种靶向HIV抗原蛋白的synNotch结构及其应用 本发明涉及一种靶向HIV抗原蛋白的synNotch结构及其应用,涉及生物技术领域和细胞制备技术领域,进一步涉及利用上述synNotch结构制备的靶向性分泌抗HIV广谱中和抗体和HIV特异性T细胞重靶向抗体的免疫细胞的制备... 王储 于湘晖 孟丽娜HIV-1病毒样颗粒的纯化及其免疫原性 2008年 目的纯化HIV-1病毒样颗粒,并检测其免疫原性。方法稳定表达HIV-1结构蛋白Gag和Env的重组293细胞经大规模培养后,收集培养上清,经30%蔗糖垫两次纯化,免疫BALB/c小鼠,Western blot检测小鼠血清中抗体水平。结果重组293细胞培养上清的纯化产物经SDS-PAGE分析,可见目的蛋白的表达。Western blot检测显示,纯化蛋白具有良好的反应原性。免疫小鼠后能够诱导产生针对目的蛋白的抗体,其抗体水平呈剂量依赖关系。结论纯化的HIV-1病毒样颗粒能够诱导小鼠产生抗体,具有良好的免疫原性。 张喜珍 赵东海 孔维 于湘晖关键词:人免疫缺陷病毒1型 病毒样颗粒 纯化 免疫原性 HIV多抗原位点同源序列合成基因的表达及活性鉴定 2008年 目的:在原核表达载体系统中对HIV-1gp41/gp120和HIV-2gp125/gp36外膜蛋白多个抗原位点同源序列合成基因进行表达、纯化并鉴定其活性。方法:人工合成含HIV-1gp41的3个抗原位点、HIV-1gp120的2个抗原位点、HIV-2gp125的3个抗原位点和HIV-2gp36的1个抗原位点的串联基因,克隆到原核表达载体pRSETB中,构建重组表达质粒pRSETB-env,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导目的基因在大肠埃希菌BL21(DE3)中高效表达,采用金属离子亲和层析技术纯化表达蛋白,逐渐降低尿素浓度使目的蛋白复性,免疫印迹和ELISA法分别对表达产物进行鉴定。结果:目的基因在BL21中有较高表达率,纯化后表达蛋白经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)可见相对分子质量约44000的蛋白带,与设计相对分子质量相符。免疫印迹、ELISA试验显示pRSETB-env质粒的HIV-1/2表达蛋白与HIV-1及HIV-2患者血清都能较好地结合,与其他患者血清无交叉反应。结论:成功构建了由HIV-1/2外膜蛋白多个抗原位点串联基因片段的表达载体pRSETB-env,并在原核细胞中高效表达,表达蛋白经纯化后纯度较高,并具有良好特异性和活性。 杨怀宁 徐卉 浦昀 于湘晖 张煜 赵大力 孙志伟关键词:人免疫缺陷病毒 合成基因 活性鉴定 脊髓灰质炎病毒疫苗株Sabin Ⅰ全基因序列克隆的构建及鉴定 2010年 目的 构建脊髓灰质炎病毒疫苗株Sabin Ⅰ的全基因序列克隆.方法 利用分子生物学技术,通过分段扩增和酶切连接逐步构建插入脊髓灰质炎病毒疫苗株Sabin Ⅰ全基因序列的质粒,采用单引物二次PCR法引入点突变,并通过酶切、测序等方法进行鉴定.结果 在pWSK29载体中成功插入脊髓灰质炎病毒疫苗株Sabin Ⅰ全基因序列,酶切鉴定正确,序列测定显示有9个核苷酸变异.结论 成功构建脊髓灰质炎病毒疫苗株Sabin Ⅰ的全基因序列克隆,为进一步改造并研究其功能特别是3D聚合酶的功能打下了基础. 沈宏辉 侯俊 胡燕 白冰珂 王志杰 于湘晖 孔维 刘泽 貌盼勇关键词:脊髓灰质炎病毒 疫苗 突变