龚艳
- 作品数：4 被引量：7H指数：2
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- 小凹蛋白1上调人脐静脉内皮细胞钙敏感受体介导一氧化氮合酶激活的机制被引量：3
- 2013年
- 目的探讨小凹蛋白1(Cav-1)上调人脐静脉内皮细胞钙敏感受体介导内皮型一氧化氮合酶(eNOS)激活的作用机制。方法培养人脐静脉内皮细胞,取同代细胞随机分为:(1)对照组;(2)钙敏感受体激动剂精胺(2.0 mmol/L)+Ca2+组;(3)Caveolae结构破坏剂(Filipin,1.5 mg/L)+精胺+Ca2+组;(4)Cav-1 ShRNA+精胺+Ca2+组;(5)空质粒+精胺+Ca2+组;(6)Filipin不同浓度(1.5、2.0、2.5 mg/L)组。免疫印迹检测人脐静脉内皮细胞中eNOS和磷酸化eNOS(p-eNOS)、Cav-1以及eNOS膜蛋白表达;免疫荧光和免疫共沉淀技术检测Cav-1和eNOS表达、共定位以及相互作用。结果不同浓度Filipin不影响eNOS和p-eNOS蛋白表达(P>0.05);精胺作用下细胞内p-eNOS表达增加(P<0.05),此作用可被Filipin(1.5 mg/L)或Cav-1基因沉默完全阻断(P<0.05);Fili-pin(1.5 mg/L)或Cav-1干扰处理后,eNOS的膜蛋白表达减少(P<0.05),eNOS的蛋白表达无变化(P>0.05);免疫荧光双标显示Filipin(1.5 mg/L)或Cav-1基因沉默后eNOS在小凹定位减少,核周边局部区域聚集增多。与对照组和精胺+Ca2+组比较,Cav-1 ShRNA处理组Cav-1和eNOS相互作用减弱(P<0.05),其他处理组间的相互作用无统计学意义(P>0.05)。结论人脐静脉内皮细胞中Cav-1上调钙敏感受体介导eNOS激活作用机制可能与Cav-1影响eNOS质膜定位及抑制eNOS向细胞器转位有关。
- 罗小林钟华梁霄王振焕龚艳邓峰美孙志萍何芳
- 关键词：小凹蛋白1内皮型一氧化氮合酶钙敏感受体人脐静脉内皮细胞
- 脂筏在高血压发病机制中的作用被引量：2
- 2010年
- 原发性高血压的发病机制尚未完全明确,随着脂筏结构与功能的不断阐明,它与高血压之间的关系越来越密切。脂筏与细胞的许多重要功能有关,高血压的多种信号转导事件的发生是通过定位于脂筏及caveolae的细胞膜受体,所以脂筏在高血压的发生发展过程中起了重要的调控作用。与高血压发病机制相关的因素,如内皮型一氧化氮合成酶、细胞外钙受体、NADPH氧化酶、Rho激酶、胰岛素受体、Ca2+以及转化生长因子和丝裂原蛋白激酶信号转导通路等,这些蛋白和信号分子都定位于脂筏或者受脂筏调控,从而为脂筏与高血压发病机制之间的关系提供了更加充分的证据。本文将对各相关蛋白和信号转导与高血压的形成原因作一综述。
- 龚艳何芳
- 关键词：脂筏高血压发病机制CAVEOLAE
- 小凹蛋白-1下调人脐静脉内皮细胞外钙敏感受体介导的钙内流的作用机制被引量：1
- 2013年
- 目的:研究小凹蛋白-1(Cav-1)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)细胞外钙敏感受体(CaR)介导钙内流的作用机制。方法:取2～3代HUVECs,采用细胞膜穴样凹陷(caveolae)结构破坏剂非律平(filipin)和甲基-β-环糊精(MβCD)及Cav-1基因沉默,配合CaR激动剂精胺(spermine)和负性变构调节剂Calhex 231。Fura-2/AM负载检测细胞内Ca2+浓度([Ca2+]i)。Western blotting检测HUVECs中Cav-1以及CaR蛋白表达,免疫共沉淀技术检测Cav-1和CaR相互作用。用蔗糖密度梯度离心的方法提取并鉴定caveolae,Western blotting检测caveolae的标志蛋白Cav-1和浮舰蛋白1(flotillin-1)及CaR表达。同时检测胞膜、胞浆和高尔基体标志蛋白:转铁蛋白受体(TfR)、β-肌动蛋白(β-actin)和β-外被体蛋白(β-COP)。检测富含Cav-1膜(CEM)区、非caveolae I区(NCF I)和II区(NCF II)的Cav-1和CaR表达。结果:(1)细胞外液为含钙液时,Calhex 231完全阻断精胺刺激引起的[Ca2+]i升高(P<0.05),MβCD可加强精胺升高[Ca2+]i的作用(P<0.05)。不同浓度MβCD处理后各组Cav-1和CaR相互作用的差异无统计学意义(P>0.05);(2)免疫共沉淀结果显示,各组Cav-1和CaR蛋白表达的差异无统计学意义(P>0.05);(3)与control组比较,spermine+Ca2+组、filipin+spermine+Ca2+组和MβCD+spermine+Ca2+组CEM区的Cav-1和CaR蛋白表达均降低(P<0.05),NCF I区的Cav-1和CaR蛋白表达增加(P<0.05),NCF II区Cav-1蛋白表达增加(P<0.05),而CaR蛋白表达的差异无统计学意义(P>0.05)。结论:在HUVECs中,Cav-1和CaR共定位于同一caveolae区,同时Cav-1对CaR介导的Ca2+内流有下调作用,其机制可能与Cav-1抑制CaR膜定位、促使其向非caveolae区转位及减弱其对激动剂的反应性有关。
- 钟华龚艳吴玲玲赵慧王静孙志萍邓峰美何芳
- 关键词：小凹蛋白-1人脐静脉内皮细胞钙信号
- 小凹蛋白-1和细胞外钙敏感受体在人脐静脉内皮细胞小凹共定位研究被引量：1
- 2011年
- 前期研究发现小凹蛋白-1(caveolin-1,Cav-1)和细胞外钙敏感受体(extracellular Ca2+-sensing receptor,CaR)在人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)膜上有共定位,且Cav-1下调CaR介导的钙内流。本实验探讨HUVECs中Cav-1与CaR的亚细胞定位,可为进一步机制研究提供理论依据。以3~4代HU-VECs随机分为2组:(1)对照组;(2)甲基-β-环糊精(MβCD)处理组,分别采用蔗糖密度梯度离心和Western blot技术提取含小凹膜碎片和检测Cav-1和CaR蛋白的表达。结果显示,(1)MβCD处理组HUVECs细胞中Cav-1和CaR蛋白的表达与对照组相比无差异(P>0.05)。(2)MβCD处理组小凹区Cav-1和CaR蛋白的表达低于对照组(P<0.05)。由此可知,Cav-1和CaR蛋白共定位于HUVECs的小凹区,MβCD可抑制两者在小凹的共定位。
- 龚艳胡清华钟华梁霄罗小林何芳
- 关键词：小凹蛋白-1
