黄帼英
- 作品数：10 被引量：28H指数：3
- 供职机构：上海生物制品研究所有限责任公司更多>>
- 发文基金：上海市卫生系统百名跨世纪优秀学科带头人培养计划上海市现代生物与新药产业发展基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- A群脑膜炎球菌多糖-破伤风类毒素结合物中游离多糖测定方法的建立被引量：11
- 2002年
- 本文建立一种测定A群脑膜炎球菌多糖 破伤风类毒素 (PS TT)结合物中游离多糖的方法。用 80 %乙醇使PS TT结合物沉淀 ,再用 6 0 %乙醇洗涤沉淀使未结合多糖溶解 ,使与TT结合的和未结合的多糖分离并分别测定。该方法可有效分离结合的与未结合的多糖并分别测定 ,结合物中外加多糖可定量回收。本方法适用于测定A群脑膜炎球菌多糖
- 朱为余生玲朱文瑛王晓黄帼英李凤祥李亚楠
- 关键词：破伤风类毒素A群脑膜炎球菌
- 脑膜炎球菌表面蛋白fHBP与PorA的融合表达及其免疫原性被引量：2
- 2016年
- 目的构建脑膜炎球菌（Neisseria meningitidis,Nm）表面蛋白fHBP重组表达质粒,并与PorA蛋白融合表达,对单抗原fHBP和融合抗原fHBP-PorA的免疫原性进行检测。方法筛选并优化fHBP和PorA基因序列,设计连接片段将PorA连接至fHBPC-端,构建重组表达质粒pET-24b-fHBP和pET-24b-fHBP-PorA,分别转化E.coli BL21（DE3）感受态细胞,IPTG诱导表达。表达的重组蛋白经镍柱亲和层析和凝胶过滤层析后免疫家兔,制备抗血清,采用间接ELISA、流式细胞术和微量血清杀菌力试验（serum bactericidal assay,SBA）评价抗原的免疫原性。结果经双酶切和测序鉴定,两个蛋白的重组表达质粒构建正确。重组蛋白fHBP以可溶形式表达,fHBP-PorA以包涵体形式表达,纯化后纯度均在90%以上。抗血清滴度均在1.0×10~5以上。流式细胞术检测显示,抗血清与Nm可发生特异性结合,且fHBP-Por A抗血清显示出一定的交叉反应。fHBP和fHBP-PorA抗血清对Nm29019的杀菌滴度为1∶128。结论 fHBP具有较好的抗原性和免疫原性,具备B群脑膜炎疫苗开发前景。多抗原融合策略需更多的优化考虑。
- 吴根鹏袁萍王月红王晓毕慧黄帼英徐帆洪朱为
- 关键词：脑膜炎球菌免疫原性
- 百日咳毒素S1亚单位截短片段在大肠杆菌中的表达纯化与初步应用
- 目的：克隆百日咳毒素S1亚单位C端截短片段S146,构建表达重组子,在大肠杆菌中表达并纯化目的蛋白,利用其自制抗体进行包被初步建立特异性检测百日咳毒素的双抗体夹心ELISA方法。方法： PCR扩增得到S146基因产物,将...
- 杨瑜朱为应通峰徐帆洪黄帼英瞿爱东
- 关键词：百日咳毒素大肠杆菌
- 文献传递
- 百日咳毒素S1亚单位截短片段的表达、纯化及初步应用被引量：2
- 2008年
- 目的表达并纯化百日咳毒素(PT)S1亚单位截短片段S146,以其制备抗体,初步建立检测PT的双抗体夹心ELISA法。方法PCR扩增S146基因,亚克隆至载体pUC18,鉴定正确后,插入表达载体pET16b,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达产物经SDS-PAGE和Western blot鉴定后,用镍离子亲和层析柱纯化,复性后的蛋白免疫家兔,制备抗血清,纯化后作为包被抗体,建立检测PT的双抗体夹心ELISA法,并检测其特异性。结果表达的重组蛋白相对分子质量约为19000,主要存在于破菌沉淀中,表达量占菌体总蛋白的44%;纯化后蛋白纯度为94.5%;家兔抗血清可特异性识别天然PTSI;建立的双抗体夹心ELISA法特异性良好。结论已成功表达、纯化了PTS1亚单位截短片段S146,并以纯化的抗S146抗体作为包被抗体,初步建立了检测PT的双抗体夹心ELISA法,为研制特异性检测试剂和提供一种疫苗的质量控制方法奠定了基础。
- 杨瑜朱为应通峰黄帼英徐帆洪瞿爱东
- 关键词：百日咳毒素克隆纯化ELISA
- A群脑膜炎球菌多糖结合物的免疫原性研究被引量：8
- 2002年
- 目的 制备A群脑膜炎球菌多糖 (PS)结合物 ,观察其免疫原性。方法 A群脑膜炎球菌多糖经溴化氰活化后共价接上己二酰肼手臂 ,在碳二亚胺催化下与精制破伤风类毒素 (TT)偶联制备结合物。单独多糖、多糖结合物和TT按相同程序免疫NIH小鼠 ,用ELISA法检测小鼠血清抗多糖抗体滴度和特异性及抗TT抗体滴度。结果 用上述实验方法制备的结合物具有多糖和蛋白质的抗原性 ,免疫小鼠可诱导高滴度的血清抗多糖IgG抗体 ,免疫 2针后高滴度抗体至少持续存在 3周。血清抗体可中和多糖。加强免疫提示有免疫记忆性。结合物还可诱导产生一定水平的TT抗体。结论A群脑膜炎球菌多糖结合到TT上可明显增强多糖在小鼠中的免疫原性 。
- 朱为尹行余生玲毕慧黄帼英金铭于宝珍徐裕忠曹婕陈哲文何祥昆
- 关键词：A群脑膜炎球菌免疫原性细菌性脑膜炎
- 百日咳毒素S1亚单位截短片段在大肠杆菌中的表达纯化与初步应用
- 目的：克隆百日咳毒素S1亚单位C端截短片段S146，构建表达蘑组子，在大肠杆菌中表达并纯化目的蛋白，利用其自制抗体进行包被初步建立特异性检测百日咳毒素的双抗体夹心ELISA方法。
方法: PCR扩增得到S146...
- 杨瑜朱为应通峰徐帆洪黄帼英瞿爱东
- 关键词：百日咳毒素基因克隆ELISAPCR扩增生物制品
- 文献传递
- A群和C群脑膜炎球菌荚膜多糖提制工艺研究被引量：4
- 2011年
- 研究一种不使用苯酚的荚膜多糖提制工艺,用于疫苗制备。采用液体罐培养A群和C群脑膜炎球菌,杀菌后离心取上清液,用十六烷基三甲基溴化铵沉淀多糖,用氯化钙溶液解离后,加乙醇至25%去除核酸等杂质,经乙醇沉淀获得粗多糖。将粗多糖溶解后,加乙醇至一定浓度沉淀蛋白,离心获得上清液,经超滤浓缩和乙醇沉淀,获得纯化多糖。纯化的多糖生化检测结果符合WHO和《中国药典》(2010年版)规定,豚鼠和小鼠异常毒性检查合格,豚鼠过敏试验未见过敏反应,1H NMR检测显示多糖结构具有一致性。该研究建立的A群和C群脑膜炎球菌荚膜多糖提制工艺为应用于疫苗制备奠定了基础。
- 朱为荣家康江元翔王晓毕慧王月红郑小秋黄帼英秦洁
- 关键词：脑膜炎球菌荚膜多糖提制乙醇
- A群脑膜炎球菌多糖结合疫苗的稳定性研究
- 本文通过观察游离多糖含量和结合物分子大小,对A群脑膜炎球菌多糖结合疫苗液体和冻干两种剂型的稳定性等进行研究.
- 朱为毕慧黄帼英金铭
- 关键词：A群脑膜炎球菌多糖结合疫苗生物制品稳定性分子生物学
- 文献传递
- 一种奈瑟菌黏附素A的突变基因序列被引量：1
- 2014年
- 脑膜炎球菌（Neisseria meningitidis,Nm）能导致流行性脑膜炎和暴发性败血症.全球每年流行性脑膜炎发病人数达30万～50万,成为重要的公共卫生问题之一.Nm可以分为13个血清群,主要致病群是A、C、Y、W135和B群.在欧美国家、新西兰等地,B群脑膜炎球菌已成为主要的致病菌群,占病例数的1/3 ～2/3以上.在我国,据中国疾病预防控制中心报告,2005-2009年在31个省、市、自治区中,已有25个分离到B群菌株.由于B群荚膜多糖与人体抗原之间存在交叉反应表位,其表面的优势蛋白具有复杂的表型,因此,疫苗开发难度很大,仅有少数几个外膜囊泡疫苗用于预防特定的疫苗特异性亚型菌株感染.
- 吴根鹏黄帼英王晓徐帆洪朱为
- 关键词：聚合酶链反应
- A群脑膜炎球菌多糖结合疫苗的稳定性被引量：2
- 2004年
- 目的 观察A群脑膜炎球菌多糖结合疫苗的稳定性。方法 疫苗放不同温度和不同时间后 ,用乙醇沉淀法测定A群脑膜炎球菌多糖结合疫苗的游离多糖含量 ,SepharoseCL 4B凝胶层析法测定分子大小。结果液体疫苗放置 2～ 8℃ 9个月 ,游离多糖含量为 30 %以上 ;4℃放置 18个月 ,Kd <0 2的多糖回收率 <6 0 %。冻干疫苗放置 2 5℃和 37℃ 12个月 ,或放置 2～ 8℃ 18个月 ,游离多糖含量均不高于 2 5 % ,Kd <0 2的多糖回收率 >6 0 %。结论 冻干A群脑膜炎球菌多糖结合疫苗具有良好的稳定性。
- 朱为毕慧黄帼英金铭
- 关键词：A群脑膜炎球菌多糖结合疫苗稳定性温度
