雷明
- 作品数：7 被引量：26H指数：2
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- 二性霉素B与β-escin混合穿孔电极液在人心房肌细胞SK2电流记录中的应用被引量：4
- 2012年
- 目的:为研究钙离子对人心房肌细胞小电导钙激活钾通道电流(ISK2)的调节作用,建立用二性霉素B(amphotericin B)与β-escin穿孔的膜片钳(PPR)技术。方法:体外循环术中取得右心耳,应用急性酶分离获得单个人体心房肌细胞,用二性霉素B和/或β-escin作为穿孔电极液,进行穿孔膜片钳实验,在此模式下测试钙离子对人心房肌细胞SK2电流的调控作用,并用胞内钙测试系统验证穿孔前后胞内钙变化。结果:混合使用穿孔电极液6.88μg/mlβ-escin和150μg/ml二性霉素B与单独用150μg/ml二性霉素B或6.88μg/mlβ-escin相比,前一种方法细胞容易封接,能形成稳定的穿孔膜片钳记录模式,可观察到SK2电流有激活,且胞内钙测试系统检测时可观察到穿孔后电极液至细胞内的游离钙离子浓度的增加,F340/380增强。结论:适当浓度的二性霉素B与β-escin混合使用进行穿孔膜片钳实验是一种稳定的全细胞膜片的记录技术,可以用于胞内游离钙离子对SK2电流调控的研究。
- 王华李涛雷明李妙龄丁银元杨艳曾晓荣
- 关键词：二性霉素B人心房肌细胞
- 一种有效记录人心房肌细胞小电导钙激活钾通道电流的方法(英文)被引量：2
- 2011年
- 目的:探讨一种有效的记录人心房肌细胞小电导钙激活钾通道(small conductance Ca2+-activated K+channels,SK)电流的全细胞膜片钳方法。方法:以人心房肌细胞为研究对象,采用传统全细胞膜片钳技术,记录人心房肌细胞的小电导钙激活钾通道的宏观电流。传统全细胞模式形成后,分别记录在浴液中加入apamin(100 nM)前后的电流,两者相减就得到了apamin敏感的SK2的电流。结果:采用传统全细胞膜片钳技术,能有效记录人心房肌细胞上apamin敏感的宏观电流。该电流是内向整流,去极化激活时,无明显失活现象,无尾电流出现,这些都符合SK2电流特性。结论:本实验提供了一种简单、有效的记录人心房肌细胞SK2宏观电流的方法,为今后深入的研究提供了实验基础。
- 李涛李妙龄雷明谭晓秋丁银元杨艳曾晓荣
- 关键词：小电导钙激活钾通道膜片钳
- 二性霉素B与β-escin混合穿孔电极液在人心房肌细胞SKca电流记录中的应用
- 目的:建立用二性霉素B(amphotericin B)与β-escin穿孔的膜片钳(perforated clamp,PPR)技术,用以研究钙离子对人心房肌细胞小电导钙激活钾通道(small conductanceCa-...
- 王华李涛雷明李妙龄丁银元杨艳曾晓荣
- 关键词：二性霉素B人心房肌细胞
- 文献传递
- 持续性心房颤动患者心房肌细胞小电导钙激活钾通道电流的增强被引量：21
- 2011年
- 目的 比较风湿性心脏病窦性心律（SR）患者和持续性心房颤动（AF）患者心房肌细胞小电导钙激活钾通道（SK2）的电流变化和通道蛋白在细胞上的分布。方法 将临床行心脏体外循环手术的患者分为SR组（15例）和AF组（7例，AF持续时间〉16个月），应用常规膜片钳全细胞记录技术记录SK2通道电流的变化，应用免疫荧光染色检测SK2在心房肌细胞上的分布。结果 在SR组和AF组心房肌细胞上均记录到内向整流钾通道混合电流，AF组电流密度明显大于SR组。在－130mV，sR组的电流密度为（－6．59±2．24）pA／pF，AF组为（－16．42±5．32）pA／pF，P〈0．01；在此基础上加入SK2特异性阻断剂apamin100nmoL／L后，使内向电流和外向电流均有所减小，内向电流减小较为明显，两者相减的为SK2电流。AF组的SK2电流明显高于SR组；在－130mV测试电压下，其电流密度分别为（－9.81±2．54）pA／pF与（－3．67±0．37）pA／pF，P〈0．01。免疫荧光染色试验证明SR组与AF组中均存在SK2通道蛋白。结论 两组心房肌细胞卜均有SK2通道蛋白的存在，AF时SK2通道电流明显增加，这表明心肌细胞上的一种新型通道SK2也参与和介导了AF的心房电重构过程。
- 李妙龄李涛雷明谭晓秋杨艳刘泰槰裴杰曾晓荣
- 关键词：心房颤动离子通道膜片钳术APAMIN
- 动脉平滑肌细胞内钙瞬变与自发性瞬时外向电流同步记录技术(英文)
- 2010年
- 本文旨在建立一种可同步观察细胞内信号分子和细胞膜离子通道变化之间相互关系的实时研究方法。联合应用激光扫描共聚焦显微镜(laser scanning confocal microscopy,LSCM)显微成像技术和全细胞穿孔膜片钳技术,在急性酶分离的小鼠脑动脉平滑肌细胞上同步记录自发性瞬时外向电流(spontaneous transient outward currents,STOCs)和细胞内的钙瞬变。在全细胞模式膜片钳记录平滑肌细胞膜钾电流的同时,LSCM可准确记录到胞浆内出现的钙瞬变。此技术对于从分子水平揭示细胞内信号转导过程和离子通道相关疾病的机制有重要意义。
- 李鹏云曾晓荣雷明刘智飞杨艳
- 关键词：激光扫描共聚焦显微镜膜片钳技术钙瞬变
- 胞外不同钠浓度对培养新生小鼠心肌细胞钠电流的影响
- 2011年
- 目的:探讨细胞外液不同的钠浓度对培养新生小鼠心肌细胞Na+电流的影响。方法:采用膜片钳技术,在浴液不同的钠离子浓度下,记录培养新生小鼠的心肌细胞钠电流的激活、失活以及恢复曲线。结果:相对于低钠浴液,高钠浴液记录的培养新生小鼠心肌细胞钠电流明显延迟,电流幅度增加也不明显,激活曲线不圆滑。结论:胞外高钠不是记录钠电流最合适的实验方案。
- 李涛李鹏云雷明李妙龄陈桂兰杨艳曾晓荣
- 关键词：钠电流膜片钳心肌细胞
- 胞内游离钙浓度测定平台的建立被引量：2
- 2010年
- 目的:建立一种简单有效的细胞内游离钙浓度测定平台。方法:用Fura-2作为荧光指示剂标记细胞内Ca2+,在倒置荧光显微镜下交替检测340nm和380nm激发的荧光强度,计算F340/F380代表的Ca2+相对浓度,再校正为标准浓度。结果:给予细胞刺激(如10mM咖啡因),F340/F380迅速增高,表明细胞内游离钙浓度迅速升高。对于快速变化的胞内Ca2+信号,系统反应灵敏、迅速,能很好地捕捉相关钙浓度变化。结论:由此建立起了一种简单有效的细胞内游离钙浓度测定平台,并应用于实际工作。这一平台在平滑肌细胞及心肌细胞游离钙浓度测定中都得到了充分的应用,平台建设中的第一手资料具有重要参考价值。
- 雷明曾晓荣陈桂兰刘智飞杨艳
- 关键词：FURA-2钙离子浓度咖啡因
