陈君
- 作品数：6 被引量：7H指数：2
- 供职机构：江苏大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人GITR基因的克隆和序列分析被引量：4
- 2007年
- 目的:克隆人GITR基因全长编码区的cDNA,同时对其序列进行分析。方法:采用RT-PCR方法,从正常人外周血单个核细胞获得GITR基因的cDNA,克隆至pGEM-T载体,选择阳性克隆并进行序列测定。结果:扩增得到的人GITR基因编码区cDNA的全长726 bp,编码241个氨基酸残基,与GeneBank注册的序列完全一致。结论:获得人类GITR基因的克隆,为进一步研究其生物学功能奠定了基础。
- 仝佳王胜军毛朝明杨云良陈君杨敏
- 关键词：CDNA克隆RT-PCR调节性T细胞
- 真核表达质粒pDisplay-hGITRaa_(1-165)构建及其在COS-7细胞中的表达被引量：1
- 2008年
- 目的:构建含有人GITR胞外段的真核表达质粒pDisplay-hGITRaa1-165,并检测其在真核细胞内的表达。方法:将带有信号肽的GITR基因片段克隆至真核表达载体pDisplay,经酶切鉴定及测序分析,脂质体介导法转染COS-7细胞,通过蛋白质印迹法检测其在COS-7细胞内的表达水平。结果:所构建的真核表达质粒pDisplay-hGI-TRaa1-165转染COS-7细胞后,在其培养上清中检测到目的蛋白的表达。结论:成功表达pDisplay-hGITRaa1-165蛋白,为GITR的生物学功能研究奠定了基础。
- 陈君王胜军仝佳王海生马斌唐莉胡正军鲍俊峰史烨许化溪
- 关键词：GITRCOS-7细胞真核表达
- hGITRL_(aa52-177)蛋白在杆状病毒系统中的表达被引量：1
- 2009年
- 目的利用杆状病毒系统表达hGITRLaa52-177蛋白。方法PCR扩增获得hGITRL胞外段(hGITRLaa52-177)基因,克隆入pFastBacHTa转移载体,在E.coliDH10Bac内通过转座子Tn7的介导,得到重组杆粒,转染Tn细胞表达目的蛋白。通过SDS-PAGE电泳及Westernblotting鉴定目的蛋白的表达。结果重组载体pFastBacHTa-hGITRLaa52-177以及重组杆粒Bacmid-hGITR-Laa52-177构建正确,在Tn细胞内成功表达6×His-hGITRLaa52-177重组蛋白,SDS-PAGE电泳及Westernblotting显示重组hGITRLaa52-177蛋白相对分子质量约为Mr18000。结论杆状病毒-昆虫表达系统获得hGITRLaa52-177蛋白,为进一步从蛋白质水平研究hGITR/hGITRL对机体免疫调节的影响奠定了基础。
- 唐莉王胜军毛朝明陈君胡正军鲍俊峰仝佳邵启祥许化溪
- 关键词：杆状病毒真核表达
- hGITR_(aa1-165)-IgG1Fc真核表达质粒的构建及其表达
- 2009年
- 目的:构建含有人糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体(GITR)胞外段基因的真核表达质粒hGITRaa1-165-IgG1Fc-pcDNA3.1(+),检测hGITRaa1-165-IgG1Fc融合蛋白在真核细胞COS-7中的表达。方法:以pGEMT-GITR质粒为模板,通过PCR扩增获得人GITR胞外段的基因hGITRaa1-165,将该目的基因连接至IgG1Fc-pcDNA3.1(+)质粒,构建hGITRaa1-165-IgG1Fc-pcDNA3.1(+)真核表达质粒。将该重组质粒采用脂质体法转染COS-7细胞,通过SDS-PAGE和蛋白质印迹法检测hGITRaa1-165-IgG1Fc融合蛋白在真核细胞COS-7中的表达。结果:成功构建真核表达质粒hGI-TRaa1-165-IgG1Fc-pcDNA3.1(+),并在其转染的COS-7细胞培养上清中检测到hGITRaa1-165-IgG1Fc融合蛋白的表达。结论:成功表达hGITRaa1-165-IgG1Fc融合蛋白,为进一步研究GITR的生物学功能奠定了基础。
- 崔大伟王胜军陈君仝佳陈建国王海生杨先知史烨许化溪邵启祥
- 关键词：COS-7细胞真核表达
- 人GITR_(aa27-165)蛋白的原核表达及其多克隆抗体制备被引量：2
- 2008年
- 目的:表达和纯化人GITR胞外段(hGITRaa27-165)融合蛋白,制备hGITRaa27-165融合蛋白的兔源性多克隆抗体(pAb)。方法:利用PCR从pGEMT-hGITR获得hGITRaa27-165编码序列,将其亚克隆至原核表达载体pQE30,构建重组表达质粒pQE30-hGITRaa27-165;将阳性重组质粒转化大肠杆菌,IPTG诱导表达融合蛋白,通过Profinity IMACNi-Charged Resin亲和层析柱进行纯化;纯化蛋白免疫新西兰大白兔,获取多克隆抗血清并利用Protein A Sepharose柱进行纯化,ELISA法检测抗体效价,Western blot法检测抗体特异性。结果:构建了pQE30-hGITRaa27-165原核表达载体,原核蛋白hGI-TRaa27-165蛋白以包涵体形式在大肠杆菌得到高水平表达,通过复性与亲和层析获得纯度在90%以上的hGITRaa27-165蛋白,蛋白浓度为400mg/L,制备的抗hGITRaa27-165多抗效价高达1∶1.6×105,Western blot鉴定其具有良好的特异性。结论:获得高纯度hGITRaa27-165蛋白,并制备特异性pAb,将为进一步研究hGITR的生物学功能提供实验基础。
- 仝佳王胜军陈君毛朝明杨云良杨敏胡正军只棣媛许化溪
- 关键词：原核表达多克隆抗体
- 人GITR/_（aa1-165）真核表达载体的构建及蛋白表达
- 目的构建携带人GITR基因胞外段真核表达质粒pDisplay-hGITR/_/(aa1-165/),构建人hGITR/_/(aa1-165/)-IgGl Fc段融合蛋白的真核表达载体hGITR/_/(aa1-165/)-...
- 陈君
- 关键词：GITR融合蛋白真核表达
- 文献传递
