门大鹏 作品数:10 被引量:17 H指数:2 供职机构: 中国科学院微生物研究所 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 生物学 化学工程 轻工技术与工程 更多>>
谷氨酸棒杆菌质粒pXZ10145自发缺失突变体的特性及其重组质粒的构建 被引量:2 1991年 用谷氨酸棒杆菌质粒pXZ10145转化钝齿棒杆菌T6-13原生质体,得到自发缺失突变体pNAT65,该质粒为2.4kb,仍带有氯霉素抗性,经物理图谱分析表明,质粒pXZ10145Sma I到Cla I位点之间的片段已缺失,仍保留EcoR I、Xba I、Bcl I三个酶的单切点。质粒pNAT65与pBR322用EcoR I酶切连接得到重组质粒pNAR67,这一质粒在E.coli中复制并表现Ap,Tc抗性,但氯霉素抗性能力大大降低,只能抗2μg/ml。 那淑敏 沈天翔 贾盘兴 门大鹏 陈琦关键词:谷氨酸棒杆菌 质粒 缺失突变体 带有sop基因稳定表达载体的构建 1996年 F质粒的第五个EcoRⅠ片段mini-F具有质粒的分配功能。其EcoRⅠ-BamHⅠ片段含有oriS、ccd、repD和sop基因(sopA,B和C)。该片段与pBR322重组,得到质粒pDMC32。pDMC32经SmaⅠ酶切,T4连接酶连接,得到衍生质粒pDMC311,消除了oriS、ccd和repD片段。MI32(pDMC32)和MI311(pDMC311),在液体限磷基础培养基中培养100代,质粒保持率分别为93%和100%。而对照MIR322(pBR322)培养55代时,质粒保持率仅为10%。带有色氨酸启动子质粒pDR720与pBR322重组,得到质粒pDMC40。pDMC40再与mini-F的sop基因重组,得到带有sop基因的稳定表达质粒pDMC48。MI48(pDMC48)在液体限磷基础培养基中培养100代,质粒保持率为100%。 杜笑寒 丁久元 吴夏英 余志华 门大鹏关键词:基因载体 以温和噬菌体ρ11为载体克隆α-淀粉酶基因 被引量:1 1990年 温和噬菌体 p11 DNA 和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)168染色体 DNA 用 BamH1酶消化和 T4 DNA 连接酶连接,转化到被噬菌体ρ11溶源化了的501菌株中,经过体内交换整入到染色体上,培养48小时后,从1020个菌落中挑出含 Arol^+-Amy^+基因的3个转化子,分别命名为ρ11Amy1、ρ11Amy2和ρ11Amy3。取ρ11Amy1 进行繁殖和丝裂霉素 C 诱导,诱导后的重组噬菌体用于测定噬斑形成能力和转导活性,提取其 DNA 再用于转化,均证明构建成了含淀粉酶基因的重组特异性转导噬菌体。 郭兴华 贾士芳 门大鹏关键词:噬菌体 枯草芽孢杆菌 微生物发酵法生产青霉素酰化酶 一种用微生物发酵生产青霉素酰化酶的方法。以巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)为出发菌,经物理和化学因子反复诱变处理,得到产胞外青霉素酰化酶高产菌株。在适宜的发酵培养条件下,酶活达700-800单位/1... 王祯祥 徐冠珠 朱丽钊 韩文珍 门大鹏文献传递 胞外青霉素酰化酶产生菌的选育 被引量:7 1992年 利用纸片显色方法,从土壤中快速筛选出98株产胞外青霉素酰化酶的菌种,经复筛其中10株酶活力较高,经鉴定均属于巨大芽孢杆菌。经单株分离得46号菌,用这株菌进行了产酶条件的研究,在最适产酶条件下,酶活力比开始提高了3.6倍。在此基础上又进行了物理化学因素处理,得突变株 UL-81,酶活力达720u/100ml 发酵液。对原株和突变株进行比较,发现UL-81菌落、细胞形态、诱导剂苯乙酸用量及添加时间等明显不同于原株。在500L 罐发酵酶活达820u/100ml 发酵液,为开始酶活的16倍。 王祯祥 韩文珍 门大鹏 王青关键词:巨大芽孢杆菌 青霉素酰化酶 质粒pXZ10145核苷酸序列测定和分析 被引量:6 1993年 以Sanger双脱氧中止法为原理,利用美国ABI公司370A自动核酸序列分析仪,我们测定了谷氨酸棒杆菌质粒pXZ10145全长4887bp的核苷酸序列,该质粒上存在包括ApaI等18种限制酶的单一切点,其它限制酶切点的数目和位置也被定出,质粒上有8个可能的阅读框架,通过序列分析,我们确定了pXZ10145断裂生成缺失突变体pNAT65的两侧位点,在两个断裂点上发现存在'ATCTAGC'7个碱基的同向重复序列。 沈天翔 贾盘兴 那淑敏 门大鹏关键词:谷氨酸棒杆菌 质粒 核苷酸 基因工程菌酶促转化生产L-色氨酸(中试) 余志华 丁久元 王宇 张英姿 门大鹏 陈琦 姚绍斌 汪大顺 蔡诗贵 王昭君 高才元 李耀清 刘相辽 杜祖国 L-色氨酸是人和动物的必需氨基酸之一,广泛应用于医药、食品和饲料的添加,需求量极大。我国至今尚未工业化大生产,全部依赖进口。为了满足国内外市场需求,加速氨基酸国产化进程,该项目进行研究,利用重组DNA技术构建了带有稳定因...关键词:关键词:基因工程菌 L-色氨酸 中试 微生物发酵法生产青霉素酰化酶 一种用微生物发酵生产青霉素酰化酶的方法。以巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)为出发菌,经物理和化学因子反复诱变处理,得到产胞外青霉素酰化酶高产菌株。在适宜的发酵培养条件下,酶活达700-800单位/1... 王祯祥 徐冠珠 朱丽钊 韩文珍 门大鹏文献传递 α-淀粉酶高产菌株选育方法的研究 被引量:1 1989年 在含有氨苄青霉素1—10μg/ml的LB液体培养基中,接入枯芽孢杆菌BF7658菌悬液,在37℃下振荡培养3—5天,经平板分离单菌落以及摇瓶发酵试验,初筛获得2213、2104和2120等α-淀粉酶高产菌株。将2213菌株的菌悬液涂布于含有4-6μg/ml氨苄青霉素的2%淀粉培养基上,复筛得到4213、4218、4237等α-淀粉酶高产菌株。4213菌株再经4次亚硝基胍诱变,未能得到蛋白酶活性低、α-淀粉酶活性高的突变株。 门大鹏 贾士芳 郭兴华关键词:Α-淀粉酶 高产菌株 选育方法 遗传工程在食品和发酵工业中的应用 被引量:1 1992年 80年代中期,遗传工程在食品和发酵工业中的研究和应用越来越广泛。利用遗传工程技术克隆编码酶的基因,经基因扩增可以提高酶的产量,或发酵产物的产量。 门大鹏关键词:食品工业 发酵工业