钱跃军
- 作品数：6 被引量：10H指数：2
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- AP-4在结直肠癌局部淋巴结中的表达与结直肠癌复发相关性的研究
- 背景
结直肠癌是近年来国内发病率和死亡率均呈上升趋势的肿瘤之一,发病率仅次于肺癌、胃癌和肝癌,而国外结直肠癌的发病率有所下降但仍处于恶性肿瘤的第2或3位。随着社会的进步、生活水平的提高,人们饮食结构及生活习惯的不...
- 钱跃军
- 关键词：结直肠肿瘤RT-PCR
- 文献传递
- 脆性组氨酸三联体基因对结肠癌细胞增殖和凋亡的影响被引量：5
- 2010年
- 目的 探讨脆性组氨酸三联体基因（FHIT）转染对结肠癌细胞株SW480增殖和凋亡的影响及其作用机制.方法 将重组真核表达质粒pRc/CMV2-FHIT通过脂质体转染技术导入人结肠癌细胞株SW480（实验组）,筛选稳定转染的细胞并扩增培养,以转染了空质粒pRc/CMV2的SW480细胞作为阴性对照,以正常SW480细胞作为空白对照.应用MTT法检测细胞的增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期分布和细胞凋亡率,Western blot分析caspase-8酶原的变化,半定量RT-PCR检测caspase-8 mRNA水平的改变,肽核酸标记底物的比色法检测caspase-8的相对活性.结果 转染96 h后,实验组和阴性对照组细胞生长抑制率分别为71.7%和16.9%,G0/G1细胞比例分别为（63.3±3.5）%和（50.6±2.1）%,细胞凋亡率分别为（40.5±3.1）%和（18.6±2.6）%,caspase-8 mRNA条带光密度积分值分别为107和41,caspase-8蛋白相对活性分别为0.43和0.25;上述差异均有统计学意义（P＜0.05）.当加入FHIT抑制剂后,caspase-8蛋白相对活性恢复至对照组水平（0.22）.结论 FHIT基因转染能够明显抑制人结肠癌细胞株SW480的增殖,诱导SW480细胞发生G0/G1期阻滞,其作用机制可能与caspase-8表达及活性上调有关.
- 曹杰梁立源杨平钱跃军王辉孙政李旺林谭明华
- 关键词：结肠肿瘤脆性组氨酸三联体基因结肠癌细胞株SW480
- FHIT基因转染对人结肠癌细胞系SW480增殖和侵袭力的影响被引量：2
- 2010年
- 目的探讨真核表达质粒pRc/CMV2-FHIT对结肠癌细胞株SW480增殖和侵袭活性的影响。方法将携有FHIT基因的重组真核表达质粒pRc/CMV2-FHIT转化大肠杆菌DH5α并扩增,抽提纯化质粒并进行酶切鉴定,pRc/CMV2-FHIT体外转染SW480细胞(SW480-FHIT),筛选稳定转染的细胞并扩增培养,以转染了空质粒pRc/CMV2的SW480细胞(SW480-pRc/CMV2)和正常SW480细胞为对照,用RT-PCR检测FHIT的表达情况,并用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT法)和细胞侵袭实验分别检测FHIT基因转染前、后SW480细胞增殖和侵袭活性的变化。结果pRc/CMV2-FHIT的酶切鉴定证实含有目的基因FHIT;SW480-FHIT细胞的RT-PCR产物经凝胶电泳有明显的阳性条带,而对照组则无;MTT实验结果显示重组质粒转染组SW480细胞的增殖明显受到抑制;Transwell体外侵袭实验显示转染pRc/CMV2-FHIT能明显抑制SW480细胞的体外侵袭力(P<0.01)。结论应用基因转染技术重表达FHIT基因能有效抑制细胞的生长、增殖及侵袭活性,为以FHIT为靶向的结肠癌基因治疗提供了新的思路和手段。
- 钱跃军曹杰杨平王辉孙政李旺林陈熙文王强
- 关键词：结肠肿瘤脆性组氨酸三联体基因
- 人端粒酶反转录酶启动子调控NK4基因靶向治疗结肠癌的实验研究被引量：3
- 2010年
- 目的 构建人端粒酶反转录酶（HTERT）启动子调控的NK4基因重组腺病毒表达系统,探讨NK4基因对结肠癌生长、侵袭转移的抑制作用.方法 以Ad HTERTp-NK4重组腺病毒载体感染结肠癌细胞HTC116,分别以RT-PCR方法和Western blot检测细胞内NK4基因mRNA及蛋白表达量：MTT和体外侵袭实验观察NK4对结肠癌细胞增殖及侵袭转移能力的抑制作用.建立结肠癌裸鼠皮下移植瘤模型,观察重组腺病毒Ad HTERTp-NK4对裸鼠结肠癌移植瘤生长的影响.结果 Ad HTERTp-NK4重组腺病毒载体感染HCT116细胞后,HCT116细胞内NK4 mRNA及蛋白表达水平明显增高：Ad HTERTp-NK4重组腺病毒感染后,HCT116细胞生长抑制率和侵袭抑制率分别为47.14%和40.63%,与Ad HTERTp-GFP（空载体）组（2.75%和2.31%）比较,差异均有统计学意义（均P＜0.05）.局部注射Ad HTERTp-NK4重组腺病毒载体后,结肠癌裸鼠皮下移植瘤模型肿瘤生长受抑,抑瘤率为47.3%,与空载体组（4.6%）比较,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 HTERT启动子调控NK4基因靶向治疗系统可有效抑制结肠癌的增殖及侵袭转移,在结肠癌的基因治疗具有较好的应用前景.
- 徐波肖焕擎曾山崎黄桂填刘振邦钱跃军李书华
- 关键词：结肠肿瘤
- 人FHIT基因的克隆及其真核表达质粒的构建
- 2009年
- 目的克隆人脆性组氨酸三联体(FHIT)基因,构建其真核表达质粒pRcCMV-FHIT。方法提取人外周血总RNA,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术扩增人FHIT cDNA全长开放阅读框序列,PCR产物与中间载体pGEM-T连接后转化到大肠杆菌DH5α,然后对单菌落进行菌落PCR、限制性内切酶酶切鉴定和测序。用EcoR Ⅰ将目的片段切下。插入真核表达载体pRc/CMV2的相应位点,构建表达质粒pRc/CMV2-FHIT,将该重组质粒转化到大肠杆菌DH5α后进行菌落PCR、酶切鉴定。结果测序结果表明从正常人外周血单个核细胞中所获得的FHITcDNA含有781个碱基,与Genbank(NM_002012.1)序列完全一致。pRc/CMV2-FHIT经酶切鉴定与预期结果一致。结论成功构建重组真核表达质粒pRcCMV-FHIT,为进一步研究脂质体转染FHIT基因对结肠癌细胞株SW480凋亡作用的影响奠定基础。
- 杨平曹杰钱跃军彭燕孙政李旺林王强谭明华
- 关键词：脆性组氨酸三联体真核表达载体基因克隆
- 脆性组氨酸三联体基因转染对人结肠癌细胞株SW480奥沙利铂敏感性的影响
- 2009年
- 目的观察脆性组氨酸三联体基因（FHIT）转染对人结肠癌细胞株SW480奥沙利铂敏感性的影响。方法将重组真核表达质粒pRc／CMV2-FHIT通过脂质体转染技术导入人结肠癌细胞株SW480，筛选稳定转染的细胞并扩增培养，以转染了空质粒pRc／CMV2的SW480细胞（SW480-pRc／CMV2）和正常SW480细胞为对照。逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测FHIT基因的mRNA转录水平。以奥沙利铂作用于3组细胞，用噻唑蓝（MTT）比色法测定细胞的生长抑制率，用流式细胞仪检测奥沙利铂处理前后各组结肠癌细胞的凋亡率及细胞周期的变化。结果SW480-FHIT细胞的RT-PCR产物经凝胶电泳有明显的阳性条带，而对照组则无；经奥沙利铂处理后，转染FHIT基因的SW480细胞的凋亡水平与空质粒转染组及结肠癌细胞株组比较明显增高（第2、3、4天A值比较P〈0．05），并且FHIT基因与奥沙利铂有轻度的协同促进凋亡作用；同时奥沙利铂处理前后实验组结肠癌细胞的生长周期较对照组均出现了明显的G0／G1期阻滞，且细胞的生长抑制率存在浓度和时间依赖性。结论外源性FHIT基因表达与奥沙利铂协同促进SW480细胞凋亡及细胞周期阻滞，FHIT基因可增加结肠癌细胞对奥沙利铂的敏感性。
- 曹杰钱跃军杨平孙政李旺林王强谭明华陈伟陈新岐
- 关键词：结肠肿瘤奥沙利铂组氨酸基因转染
