- 利用PCR确定已知DNA序列的两侧未知序列的方法
- 本发明是一种利用PCR确定已知DNA序列的两侧未知序列的方法。它是通过对已知序列的限制性内切酶位点进行酶切，设计合适的PCR引物，进行PCR扩增，最后对所得片断进行克隆和序列测定。本发明技术设计简单易行，操作限制少，应用...
- 黄伟达王奕然钱志康邬敏辰王维荣
- 文献传递
- 异亮氨酸拉链结构对可溶性CD40L生物学活性的影响被引量：3
- 2003年
- CD40配基(CD40L)为TNF超家族中的一员,瞬时表达于激活的CD4+的T淋巴细胞上.自然状态下膜上三聚体的CD40L通过和CD40受体(CD40R)结合,在免疫监视和肿瘤免疫中发挥作用.以PCR方法从pcDNA3 CD40L质粒上扩增得到编码CD40L基因的胞外部分sCD40L,并将该片段插入大肠杆菌表达质粒pET30a上,构建得到大肠杆菌表达质粒pET30a sCD40L;同时,在sCD40L的N端融合了异亮氨酸拉链(IsoleucineZipper,IZ)结构,构建得到表达质粒pET30a IZ sCD40L.表达质粒在大肠杆菌中表达,得到可溶性的重组人CD40L和IZ CD40L.SDS PAGE分析结果表明重组人rhsCD40L和IZ rhsCD40L在相应分子质量位置都有明显的条带产生,并得到Westernblotting的确认.非SDS PAGE电泳结果显示,异亮氨酸拉链结构有利于rhsCD40L蛋白形成聚合体结构.B细胞增殖实验和人骨髓瘤细胞株XG2凋亡实验结果都表明,异亮氨酸拉链结构提高了rhsCD40L的生物学活性.
- 丁天洪洁徐颖周璇江培翃钱志康张学光黄伟达
- 关键词：可溶性CD40L生物学活性
- 一类双链RNA分子及其在制备抑制乙型肝炎病毒复制药物中的应用
- 本发明属于分子生物学与生物医药技术领域，具体为一种利用大肠杆菌发酵制备RNA干扰用双链RNA分子或小干扰RNA分子的方法，并将这些RNA分子用于制备治疗乙型肝炎的药物。将本发明得到的ldsRNA或siRNA以适当的比例与...
- 钱志康宣宝琴徐剑锋李琳闵太善程小伟史顺成黄伟达
- 文献传递
- 热激蛋白HSP70在肿瘤免疫反应中作用的研究进展被引量：3
- 2002年
- 热激蛋白(heat shock proteins,HSPs)是细胞受应激原刺激后诱导产生的一组应激蛋白,在进化上高度保守。热激蛋白的功能有很多,充当分子伴侣,参与蛋白质折叠和转运。最近研究表明HSP70还在肿瘤免疫反应过程中起协同作用,充当呈递载体,将抗原肽呈递于APC表面引起CTL毒性杀死感染细胞和肿瘤细胞。在肿瘤的免疫治疗中作为免疫疫苗的载体有很好的前景。
- 章宏海钱志康黄伟达
- 关键词：抗原呈递免疫疫苗肿瘤免疫反应
- EPHA2-siRNA质粒对骨肉瘤细胞生物学行为的影响被引量：6
- 2007年
- 目的探讨骨肉瘤细胞中EPHA2基因表达对细胞增殖、凋亡以及仿血管发生的影响。方法应用pSiliencer质粒构建靶向EPHA2的siRNA质粒;脂质体转染siRNA质粒人骨肉瘤细胞,Western blot在蛋白水平检测转染前后细胞基因表达情况;采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法、流式细胞仪结合Annexin V-FITC和PI染色以及HE染色观察转染前后骨肉瘤细胞增殖、凋亡及仿血管发生情况。结果成功构建了针对EPHA2的siRNA表达质粒;将质粒转染入骨肉瘤后,EPHA2基因在蛋白表达水平下调;骨肉瘤细胞增殖能力下降,并发生了早期凋亡,骨肉瘤细胞的仿血管发生受到抑制。结论EPHA2参与了骨肉瘤细胞增殖、早期凋亡和仿血管发生;利用RNA干扰技术靶向EPHA2基因治疗可能为骨肉瘤治疗提供新方法。
- 张立智蔡宣松钱志康梅炯马小辉黄煌渊黄伟达
- 关键词：EPHA2RNA干扰凋亡骨肉瘤细胞
- VEGF特异siRNA对骨肉瘤细胞凋亡和仿血管发生的影响被引量：7
- 2007年
- 目的:探讨VEGF特异siRNA在骨肉瘤细胞株(MG63)增殖、凋亡以及仿血管发生中的作用。方法:以pSilienc-er载体构建VEGF特异siRNA质粒pSilencer-VEGF siRNA,并转染骨肉瘤细胞MG63;将细胞分为pSilencer-VEGF siRNA质粒组(试验组)和空siRNA质粒组(对照组),Western blotting在蛋白水平检测转染重组质粒后MG63细胞VEGF表达情况;MTT比色法、光镜、流式细胞仪结合Annexin V-FITC/PI染色和H-E染色观察质粒转染后骨肉瘤细胞增殖、凋亡和仿血管发生情况。结果:测序证实成功构建了针对VEGF的siRNA重组质粒。转染pSilencer-VEGF siRNA重组质粒后的试验组培养液中及骨肉瘤细胞内VEGF蛋白表达下降;转染后48、72、96h骨肉瘤细胞的增殖抑制率分别为41.67%、43.92%、35.32%,并发生了早期凋亡,凋亡率为28.27%。转染pSilencer-VEGF siRNA重组质粒的骨肉瘤细胞未见仿血管发生,转染空质粒的对照组骨肉瘤细胞则有仿血管发生。结论:RNA干扰VEGF基因能抑制骨肉瘤细胞增殖,促进骨肉瘤细胞早期凋亡,干扰骨肉瘤细胞仿血管发生,为临床基因治疗骨肉瘤提供了新的思路。
- 张立智蔡宣松钱志康梅炯黄煌渊黄伟达
- 关键词：小干扰RNA骨肉瘤细胞
- 一种利用大肠杆菌发酵制备小干扰RNA分子的方法
- 本发明涉及一种利用大肠杆菌发酵大规模制备RNA干扰用小干扰RNA分子的新方法。本发明构建了长双链RNA表达载体，并转化大肠杆菌宿主菌，通过大规模发酵，用碱－SDS法抽提发酵菌体得到全RNA和质粒DNA的混合物。该混合物用...
- 钱志康宣宝琴李琳徐剑锋谭畅闵太善王维荣谢承光沈水源程小伟史顺成黄伟达
- 文献传递
- 利用PCR确定已知DNA序列的两侧未知序列的方法
- 本发明是一种利用PCR确定已知DNA序列的两侧未知序列的方法。它是通过对已知序列的限制性内切酶位点进行酶切，设计合适的PCR引物，进行PCR扩增，最后对所得片断进行克隆和序列测定。本发明技术设计简单易行，操作限制少，应用...
- 黄伟达王奕然钱志康邬敏辰王维荣
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- 利用大肠杆菌发酵制备siRNA及其在抑制乙型肝炎病毒复制中的应用
- RNA干扰(RNAinterference，RNAi)是指双链RNA特异性地诱发与其序列同源的mRNA分子被降解，从而抑制基因表达的现象，是一种特殊的转录后基因表达沉默(posttranscriptionalgenesi...
- 钱志康
- 关键词：大肠杆菌乙型肝炎病毒复制RNA干扰肝癌细胞
- 文献传递
- 一种利用大肠杆菌发酵制备小干扰RNA分子的方法
- 本发明涉及一种利用大肠杆菌发酵大规模制备RNA干扰用小干扰RNA分子的新方法。本发明构建了长双链RNA表达载体，并转化大肠杆菌宿主菌，通过大规模发酵，用碱-SDS法抽提发酵菌体得到全RNA和质粒DNA的混合物。该混合物用...
- 钱志康宣宝琴李琳徐剑锋谭畅闵太善王维荣谢承光沈水源程小伟史顺成黄伟达
- 文献传递
