郭强
- 作品数：7 被引量：15H指数：2
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- 天然免疫分子LILRB5慢病毒稳定转染THP-1细胞系的构建
- 2014年
- 目的构建天然免疫分子LILRB5的慢病毒表达载体,获得稳定转染LILRB5的单核细胞系。方法将LILRB5构建入真核表达载体pEGFP-flag,瞬时转染293T细胞系,通过免疫荧光和流式细胞术检测LILRB5-GFP和LILRB5-flag在293T细胞中的表达。构建慢病毒表达载体pHR-LILRB5,与p8.91和pMD共同转入293T细胞,产生标记有绿色荧光的LILRB5慢病毒,感染单核细胞系THP-1后通过流式细胞术检测LILRB5的表达。结果测序显示真核表达载体pEGFP-LILRB5-flag的序列与预期相符,瞬时转染pEGFP-LILRB5-flag的293T细胞可检测到绿色荧光蛋白的表达,流式细胞术检测显示LILRB5-flag在细胞膜表面有表达;构建亚克隆慢病毒载体pHR-LILRB5,经测序验证后,转染293T细胞,产生LILRB5的慢病毒,并感染THP-1细胞,流式细胞术检测LILRB5在THP-1细胞稳定表达。结论构建LILRB5的慢病毒载体,通过LILRB5慢病毒感染建立LILRB5的稳转THP-1细胞系。
- 王希娣张之勇任霞宋冠华禹林昌史美艳袁晓芬郭强李莲莲张晓瑜姜国胜
- 关键词：绿色荧光蛋白单核细胞慢病毒转染
- sox4不同结构域的真核表达质粒的构建和鉴定
- 2014年
- 目的：构建并鉴定sox4四段不同结构域的重组真核表达质粒。方法：以HL-60细胞的总RNA为模板，用RT—PCR方法扩增出sox4基因cDNA，将产物克隆进真核载体pCMV—Flag质粒内，构建含sox4不同结构域的重组真核表达质粒。将pCMV—Flag—sox4重组质粒转染293T细胞，Westernblot检测sox4蛋白表达。结果：核酸序列分析sox4已成功插入pCMV—Flag载体中，转染pCMV—Flag-sox4的293T细胞中检测到表达的sox4蛋白。结论：成功构建了含sox4基因的重组真核表达质粒。
- 史露露宋冠华潘素飞禹林昌史美燕任霞郭强姜国胜
- 关键词：HL-60
- 白血病细胞诱导分化过程中nm23-H1表达变化及其分子调控机制被引量：3
- 2017年
- 目的 探讨在白血病细胞HL-60分化过程中nm23-H1、c-Myc、粒细胞集落刺激因子（G-CSF）的作用机制及相互关系,为临床治疗提供理论依据和治疗靶点.方法 CCK-8实验测定全反式维甲酸（ATRA）作用下的靶细胞增殖情况,瑞士-吉姆萨染色观察细胞形态学变化.反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）或Western blotting测定nm23-H1、c-Myc和G-CSF的基因、蛋白表达水平.酶联免疫吸附试验（ELISA）测定ATRA诱导HL-60细胞分化过程中培养上清G-CSF水平的变化.结果 分别使用药物浓度为0.25、0.50、1.00、2.00和4.00 μmol/L的ATRA诱导HL-60细胞72 h,细胞增殖抑制率分别为（43.00±0.08）%、（49.55±2.30）%、（58.90±6.70）%、（64.60±4.70）%、（72.70±3.20）%,差异有统计学意义（F=69.887,P=0.000）.在ATRA诱导下,细胞形态学证实HL-60细胞向成熟粒细胞方向分化.nm23-H1的mRNA相对表达量由0.79±0.03逐渐降低到0.52±0.09,差异有统计学意义（F=9.679,P=0.002）,蛋白相对表达量由1.54±0.12逐渐降低到0.40±0.04,差异有统计学意义（F=90.140,P=0.000）.c-Myc的mRNA相对表达量由0.95±0.05逐渐降低到0.46±0.05,差异有统计学意义（F=27.900,P=0.000）,蛋白相对表达量由1.12±0.11逐渐降低到0.14±0.03,差异有统计学意义（F=115.500,P=0.000）.而G-CSF的mRNA相对表达量由0.26±0.07逐渐升高到0.55±0.09,差异有统计学意义（F=7.817,P=0.004）,细胞分泌水平由（13.67±7.51）pg/ml逐渐升高到（128.30±25.77）pg/ml,差异有统计学意义（F=28.020,P=0.000）.结论 nm23-H1可能通过与c-Myc和G-CSF相互作用而发挥其诱导白血病HL-60细胞分化的作用.
- 田静袁小芬韩杨任霞张之勇郭强李莲莲张晓瑜张振李霞姜国胜
- 关键词：白血病细胞分化粒细胞集落刺激因子
- 宋绍亮教授运用羚羊角治疗风湿免疫性疾病的经验
- 2010年
- 羚羊角性味咸寒,入肝心肺经,功善清热凉血解毒。介绍宋绍亮教授以经典、古籍为依据,以现代医学的疾病观与实验室指标为参考,强调辨病用药,将其合理应用于风湿免疫性疾病,治疗痹热、皮肤黏膜病变、炎症指标持续不降及转氨酶增高,取得良好疗效。
- 郭强
- 关键词：羚羊角粉
- 全反式维甲酸诱导HL60细胞分化分子机制探讨被引量：1
- 2015年
- 目的探讨全反式维甲酸(alltrans retinoic acid,ATRA)诱导HL-60细胞分化过程中PADI4的变化与作用机制。方法 ATRA诱导HL-60细胞24、48、72和96h后,采用Wright-Gimesa染色观察细胞形态学变化;采用流式细胞术检测细胞表面分化抗原CD11b的表达变化;采用RT-PCR分析PADI4在基因水平的表达趋势,蛋白质印迹法检测PADI4在蛋白水平的表达变化;RNAi技术干扰PADI4后流式细胞仪检测CD11b变化,蛋白质印迹法检测PADI4、p42/44、p65、p105和p55等蛋白水平变化。结果 HL-60细胞经ATRA诱导后与对照组相比,Wright-Gimesa染色显示核质比明显减小,核有凹陷及分叶,杆状核、分叶核现象明显增多。流式细胞术检测结果显示,细胞表面分子CD11b表达由2.1%升高到48.9%,升高了346.8%,t=411.51,P<0.01;RT-PCR结果显示,PADI4在mRNA水平表达随时间延长逐渐升高,F=318.046,P<0.001,r=0.595;PADI4与内参基因GAPDH灰度值的比值从0.122±0.033升高到0.464±0.077,差异有统计学意义,F=16.002,P<0.001。蛋白质印迹法检测结果显示,PADI4在蛋白水平表达随时间延长逐渐升高,F=16.002,P<0.001,r=0.873;PADI4与内参GAPDH灰度值的比值分析从0.077±0.045升高到0.263±0.095,差异有统计学意义,F=221.8,P<0.000 1。蛋白质印迹法检测结果显示,P-p44/42与内参GAPDH灰度值的比值分析从0.470±0.023下降到0.320±0.012,差异有统计学意义,F=92.942,P<0.001。结论 ATRA诱导HL-60细胞定向粒系分化的过程中,PADI4促进HL-60细胞向粒系分化,而且PADI4可能是通过促进MAPK信号通路中的p42/44磷酸化而发挥作用。
- 禹林昌宋冠华张之勇史美燕袁小芬任霞郭强姜国胜
- 关键词：HL-60PADI4磷酸化P42/44
- 天然免疫分子LILRA1和LILRB2结合并调控HLA—B27的比较性研究
- 2014年
- 目的：探讨天然免疫分子LILRA1，LILRB2与HLA-1类抗原HLA-B27的结合及其调控作用机制。方法：构建LILRA1，LILRB2的真核表达载体和慢病毒载体，利用流式细胞术检测LILRA1，LILRB2在293T细胞系和221-B27细胞系中的表达，利用HLA—B27同源四聚体检测表达在细胞膜表面的LILRA1，LILRB2与HLA—B27分子结合能力，将LILRA1，LILRB2慢病毒载体分别转入HLA—B27稳定转染221细胞后，通过特异性抗体HC10和W6／32检测HLA—B27表达的差异性。结果：测序结果表明LILRA1与LILRB2载体序列正确，LILRA1与LILRB2均能特异性结合HLA—B27同源四聚体，而LILRB2结合HLA—B27能力强于LILRA1；LILRB2稳定转梁的221-B27细胞中HLA—B27分子在细胞膜的表达降低，而L1LRA1的转染对HLA—B27分子在细胞膜的表达无显著性影响。结论：LILRA1，LILRB2均可在细胞膜表面特异的与HLA-B27同源四聚体相结合，LILRB2在细胞内的高表达将抑制HLA—B27分子在细胞膜的表达。
- 张之勇任霞宋冠华俞林昌史美艳郭强李莲莲张晓瑜姜国胜毕可红
- 关键词：慢病毒
- 异补骨脂素对HL-60细胞增殖和凋亡影响及其机制探讨被引量：11
- 2015年
- 目的异补骨脂素可抑制多种肿瘤细胞增殖,并诱导细胞凋亡,但是异补骨脂素对白血病细胞是否亦具有同样的作用却不明确。本研究旨在探讨异补骨脂素对人急性髓系白血病HL-60细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法采用MTT法检测不同浓度异补骨脂素(10、20、40、80和160μg/mL)作用于HL-60细胞24和48h后对HL-60细胞的增殖抑制作用;光镜观察细胞形态学变化;Annexin V/PI双染后采用流式细胞术检测细胞凋亡的改变;流式细胞术检测细胞周期的变化;分别采用RT-PCR和蛋白质印迹法检测Bcl-2家族Bcl-2和Bax的mRNA水平和蛋白水平表达变化。结果异补骨脂素对HL-60细胞的增殖具有明显的抑制作用,并呈现时间-剂量依赖性。10、20、40、80和160μg/mL异补骨脂素处理24h后,HL-60细胞的抑制率分别为(5.5±4.5)%、(13.7±3.1)%、(20.4±1.9)%、(35.3±5.5)%和(51.7±2.1)%,F=1 465.33,P<0.001;48h后对HL-60细胞的抑制率分别为(21.7±3.2)%、(34.6±5.6)%、(43.3±1.2)%、(61.4±8.76)%和(84.7±4.4)%,F=146.33,P<0.05,差异均有统计学意义。经异补骨脂素处理的HL-60细胞体积明显变小、且有凋亡小体产生,呈现典型的凋亡形态学改变;40μg/mL异补骨脂素处理HL-60细胞24h后细胞早期凋亡率为(16.6±2.7)%,与对照组的(2.8±1.5)%相比,差异有统计学意义,P<0.05;异补骨脂素不引起细胞周期阻滞,G0/G1期前出现典型亚二倍体凋亡峰。RT-PCR和蛋白质印迹法检测结果表明,异补骨脂素可上调Bax、下调Bcl-2的mRNA水平和蛋白水平表达。结论异补骨脂素可抑制人急性髓系白血病HL-60细胞增殖,并诱导其凋亡,其机制与促进Bax蛋白表达和抑制Bcl-2蛋白表达相关。
- 袁小芬孙亚梅张之勇李翠玲郭强宋冠华史美燕禹林昌任霞姜国胜
- 关键词：急性髓系白血病异补骨脂素细胞增殖HL-60细胞流式细胞术
