赵建勇
- 作品数：14 被引量：29H指数：4
- 供职机构：中国农业科学院兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 偶蹄家畜FMDV受体通用亚基αv基因的分子特征及其进化关系
- 2008年
- 已发现至少有αvβ1、αvβ3、αvβ6、αvβ8 4种整联蛋白是FMDV的细胞受体,αv是4种受体的通用亚基。本试验中从FMDV实验感染猪和牛、健康羊和双峰驼等的肺组织中克隆到了受体通用亚基αv基因,并对其序列进行了比较和进化关系分析。结果显示,羊、牛、猪、双峰驼的αv亚基基因的编码区分别含有3147、3147、3141、3165个核苷酸,分别编码1048、1048、1046、1054个氨基酸,信号肽均由氨基端30个氨基酸组成,跨膜区、胞浆区均分别由29、32个氨基酸组成;胞外区分别由957、957、955、963个氨基酸组成。羊、牛、猪、双峰驼αv亚基基因在Gen-Bank中的登录号分别为EU367989、DQ871215、EF474019、EU367990。同源性分析表明,信号肽变异最大,胞外区次之,跨膜区和胞浆区比较保守;进化树表明,与灵长类、啮齿类、奇蹄类、禽类、食肉类等口蹄疫非易感物种相比,口蹄疫易感动物羊、双峰驼、猪、牛等偶蹄家畜αv亚基的亲缘关系较近,处于同一进化分支。这表明受体αv亚基可能与FMDV的宿主范围和组织嗜性有关。
- 独军政高闪电常惠芸赵建勇丛国正邵军军林彤刘湘涛才学鹏
- 关键词：分子特征进化关系
- 牛FMDV受体整合素β6亚基LBD的多克隆抗体制备及初步应用被引量：1
- 2008年
- 目的:利用大肠杆菌表达牛FMDV受体整合素β6亚基的配体结合域(LBD)片段,纯化重组目的蛋白后制备兔多克隆抗体并对其进行初步应用。方法:以含有牛整合素β6亚基全长cDNA的质粒为模板PCR扩增得到β6LBD基因片段,与原核表达载体pGEX4T-1相连,构建原核表达质粒pGEX/β6LBD,测序确认开放阅读框正确后,转化感受态细胞BL21(DE3),以IPTG诱导表达重组牛β6LBD融合蛋白。SDS-PAGE和Westernblot鉴定后提取包涵体,电泳分离纯化重组融合蛋白,免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,以ELISA、琼脂扩散实验、免疫组化鉴定该抗体的效价和特异性。结果:重组牛β6LBD融合蛋白在大肠杆菌中获得了高效表达,重组蛋白主要以包涵体形式表达,相对分子质量(Mr)约为45000。制备的兔多克隆抗体效价达1∶12800以上,该抗体可与牛舌上皮细胞中的抗原分子结合,具有很好的特异性。结论:实现了牛FMDV受体整合素β6亚基LBD的原核表达和抗体制备,为研究受体β6亚基在牛体内的分布及其在FMDV感染过程中的作用机制提供了工具。
- 独军政常惠芸高闪电王景锋赵建勇才学鹏
- 关键词：多克隆抗体免疫组化
- 硫酸乙酰肝素受体介导的病毒感染作用被引量：7
- 2008年
- 赵建勇独军政高闪电丛国正林彤邵军军伏小平常惠芸
- 关键词：硫酸乙酰肝素病毒受体受体介导SULFATE糖蛋白受体特异性结合
- 口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白αvβ6的细胞定位及组织分布
- 2009年
- 利用pcDNA3.1(+)-β6p真核表达载体稳定转染CHOK1细胞,间接免疫荧光法(IFA)检测整联蛋白αvβ6在转染细胞中的表达分布。以间接免疫组化法(IHA)检测整联蛋白αvβ6在健康猪舌、唇、气管等组织的表达分布。采用抗猪源整联蛋白β6亚基的单克隆抗体作为一抗,FITC标记山羊抗小鼠IgG、辣根过氧化物酶标记山羊抗小鼠IgG分别作为二抗。结果表明,pcDNA3.1(+)-β6p真核表达载体稳定转染的CHOK1细胞的细胞膜及细胞质内可见致密的绿色荧光(IFA),猪舌、唇、气管等组织细胞的细胞膜及细胞质内均出现了棕黄色的特异阳性反应物,表明整联蛋白αvβ6受体广泛分布于猪体的器官组织细胞中,为深入研究整联蛋白αvβ6在口蹄疫病毒感染过程中的作用奠定了基础。
- 赵建勇常惠芸独军政高闪电宋帅伏小平谢庆阁
- 关键词：口蹄疫病毒受体整联蛋白细胞定位
- 口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β6亚基配体结合域多克隆抗体的制备和特性分析被引量：4
- 2008年
- 目的:表达口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β6亚基配体结合域β6LBD,并制备兔抗β6LBD多克隆抗体。方法:利用PCR方法扩增整联蛋白β6LBD基因片段,经BamHⅠ和XhoⅠ进行双酶切后连入pGEX-4T-1原核表达载体,构建的pGEX-4T-1-β6LBD重组表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定融合蛋白的表达并提取包涵体,纯化目的蛋白。然后用纯化的蛋白免疫新西兰大耳白兔制备其多克隆抗体,以ELISA方法测定抗体效价,并以Western blot鉴定其特异性。结果:SDS-PAGE电泳分析显示pGEX-4T-1-β6LBD诱导后表达一Mr约为42000的GST-β6LBD融合蛋白,与预期结果相符。目的蛋白纯化后,在电泳图片上显示较为清晰的单一条带,用纯化GST-β6LBD免疫新西兰大耳白兔制备的多克隆抗体效价达1∶12800以上,具有较高的特异性。结论:制备了具有高亲和性和特异性的抗猪源整联蛋白β6LBD多克隆抗体,为深入研究整联蛋白β6在口蹄疫病毒感染过程中的作用了奠定基础。
- 高闪电常惠芸独军政王景锋周建华赵建勇谢庆阁
- 关键词：口蹄疫病毒受体配体结合域多克隆抗体
- 口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β6亚基配体结合域单克隆抗体的制备被引量：1
- 2008年
- 以纯化的口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β6亚基配体结合域重组蛋白为抗原,免疫雌性BALB/c小鼠,经3次免疫后取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,制备口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β6亚基配体结合域单克隆抗体(McAb);采用有限稀释法和间接ELISA克隆和筛选阳性杂交瘤细胞株,并用SDS-PAGE、间接ELISA以及间接免疫荧光法对制备的McAb的特异性进行鉴定。结果显示,成功获得5株能稳定传代并分泌抗β6亚基配体结合域的杂交瘤细胞株,分别命名为C4C7、E7C7、B8C9、C2D8和B7B6,其分泌的McAb为IgG2b(C2D8)和IgG2a(C4C7、E7C7、B8C9、B7B6)亚类。制备的口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β6亚基配体结合域McAb可为深入研究整联蛋白αvβ6在口蹄疫病毒感染过程中的作用奠定基础。
- 赵建勇独军政高闪电林彤邵军军丛国正伏小平常惠芸
- 关键词：口蹄疫病毒受体配体结合域单克隆抗体
- 口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β6亚基配体结合域单克隆抗体识别的抗原表位分析被引量：6
- 2009年
- [目的]分析测定口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β6亚基配体结合域单克隆抗体(mAb)的抗原识别位点、饱和值、亲和力常数。[方法]利用叠加ELISA法、间接ELISA法、硫氰酸盐洗脱法测定C2D8、B7B6、B8C9、C4C7、E7C7 5株mAb的抗原识别位点、饱和值、亲和力常数。[结果]5株mAb间具有相似或不同的抗原识别位点,其中C4C7与E7C7、C4C7与B8C9、E7C7与B8C9等mAb间的识别位点相似,而C4C7与B7B6、E7C7与C2D8等mAb间的识别位点不同。5株mAb C2D8、E7C7、B8C9、C4C7、B7B6的饱和值分别为1∶200、1∶400、1∶800、1∶800、1∶800,亲和力为B8C9>C4C7>B7B6≥E7C7>C2D8。[结论]分析测定了5株mAb的抗原识别位点、饱和值、亲和力常数,从而为利用mAb深入研究整联蛋白αvβ6在口蹄疫病毒感染过程中的作用奠定基础。
- 赵建勇伏小平独军政高闪电冯艳丽常惠芸
- 关键词：口蹄疫病毒整联蛋白单克隆抗体抗原表位
- 整联蛋白αvβ3与口蹄疫病毒感染被引量：2
- 2009年
- 赵建勇高闪电独军政伏小平常惠芸
- 关键词：整联蛋白病毒受体宿主特异性组织嗜性蛋白聚糖
- 整联蛋白与其配体结合的分子机制研究进展
- 2008年
- 整联蛋白是细胞表面的主要膜受体,具有介导细胞与细胞基质间的黏附及病毒吸附细胞等功能。αⅠ结构域型整联蛋白和非αⅠ结构域型整联蛋白与配体结合的方式各异。对整联蛋白-配体复合物分子结构的研究表明,整联蛋白利用其配体结合位点的αMIDAS(依赖金属离子的吸附位点)、βMIDAS与各种类型配体结合。
- 赵建勇高闪电独军政常惠芸
- 关键词：整联蛋白受体配体
- 整联蛋白结构与信号转导机制被引量：5
- 2010年
- 整联蛋白是一类α/β异源二聚体膜受体分子,通过细胞膜的双向信号转导作用以调节细胞分化、迁移、免疫、黏附等生物学功能。整联蛋白能通过多种途径如黏附斑激酶、胞内-外离子浓度及结构域构象变化等介导细胞信号转导。近年来,研究的焦点是整联蛋白如何通过构象的改变来调节细胞信号转导以及对配体的亲和力。论文主要从分子水平上就整联蛋白结构和介导的信号转导机理进行了综述。
- 薛霜独军政赵建勇高闪电常惠芸
- 关键词：整联蛋白构象信号转导配体
